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武漢原生原代生物醫(yī)藥科技有限公司

5
  • 2021

    09-09

    什么是無(wú)血清培養(yǎng)基?

    無(wú)血清培養(yǎng)基(serumfreemedium,SFM):是不需要添加血清就可以維持細(xì)胞在體外較長(zhǎng)時(shí)間生長(zhǎng)繁殖的合成培養(yǎng)基。簡(jiǎn)單地認(rèn)為是體外細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中的細(xì)胞培養(yǎng)基中不含有動(dòng)物或人的血清,稱為無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)基。無(wú)血清培養(yǎng)基的基ben配方是基本成分為基礎(chǔ)培養(yǎng)基及添加組分兩大部分。大多數(shù)的無(wú)血清培養(yǎng)基含有必須的向細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)離子的轉(zhuǎn)鐵蛋白和調(diào)節(jié)葡萄糖攝取量的胰島素,以及一些蛋白質(zhì)如纖連蛋白、球蛋白、細(xì)胞生長(zhǎng)因子等。無(wú)血清培養(yǎng)基被廣泛的應(yīng)用于培養(yǎng)哺乳動(dòng)物和無(wú)脊動(dòng)物細(xì)胞以制備單克隆抗體、病毒抗原、重組蛋白
  • 2021

    09-09

    什么是傳代細(xì)胞培養(yǎng)?

    原代細(xì)胞或細(xì)胞株或細(xì)胞系需在體外持續(xù)地培養(yǎng)就必須傳代,以便獲得穩(wěn)定的原代細(xì)胞或細(xì)胞株或細(xì)胞系或得到大量的同種細(xì)胞,并維持細(xì)胞種的延續(xù),這個(gè)過(guò)程體外培養(yǎng)稱為傳代細(xì)胞培養(yǎng)。一般認(rèn)為,細(xì)胞培養(yǎng)形成單層匯合,細(xì)胞密度與生存空間有密切的關(guān)系,將培養(yǎng)細(xì)胞分散,以1:2或l:3或1:4以上的比率轉(zhuǎn)移分散進(jìn)行培養(yǎng),即為傳代細(xì)胞培養(yǎng)。細(xì)胞傳代后,一般經(jīng)過(guò)三個(gè)階段:游離期、指數(shù)增生期和停止期。常用細(xì)胞分裂指數(shù)表示細(xì)胞增殖的旺盛程度,即細(xì)胞群的分裂相數(shù)/100個(gè)細(xì)胞。一般細(xì)胞分裂指數(shù)介于0.2%~0.5%,腫瘤細(xì)胞可
  • 2021

    09-09

    細(xì)胞培養(yǎng)的倍增和細(xì)胞培養(yǎng)的代數(shù)

    細(xì)胞培養(yǎng)的倍增是培養(yǎng)物中細(xì)胞總數(shù)加倍,通常是指細(xì)胞指數(shù)或?qū)?shù)生長(zhǎng)期。細(xì)胞培養(yǎng)的代數(shù)是指細(xì)胞群從培養(yǎng)瓶中移出,傳代培養(yǎng)過(guò)程的次數(shù),傳代培養(yǎng)的目的是使細(xì)胞處于低密度以刺激其進(jìn)一步生長(zhǎng)。PriCells提供:1.各種原代細(xì)胞、細(xì)胞系;2.各種原代細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基;3.各種原代細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑;4.原代細(xì)胞分離試劑盒;5.原代細(xì)胞鑒定試劑盒;6.原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒;7.原代細(xì)胞總蛋白質(zhì)抽提物;8.原代細(xì)胞總RNA;9.原代細(xì)胞總DNA;
  • 2021

    09-09

    原代細(xì)胞的概述

    在大多數(shù)人的印象中,原代細(xì)胞培養(yǎng)是一件很困難的事;*自己動(dòng)手可能確實(shí)如此,但市場(chǎng)上那么多的原代細(xì)胞培養(yǎng)體系,相當(dāng)程度上可以為你解除后顧之憂。原代細(xì)胞的質(zhì)量取決于多個(gè)因素:組織、培養(yǎng)基、特別是它還與實(shí)驗(yàn)人員分離組織的技術(shù)息息相關(guān)。如果你對(duì)分離組織不甚精通或者很難保證組織來(lái)源地穩(wěn)定性,市售的原代細(xì)胞是一種不錯(cuò)的選擇。細(xì)胞系培養(yǎng)相當(dāng)成熟且普遍,但有時(shí)會(huì)得到一些難以解釋的結(jié)果。想不想得到更多符合體內(nèi)正常生理?xiàng)l件的數(shù)據(jù)?從細(xì)胞系轉(zhuǎn)向原代細(xì)胞,情況一定會(huì)有所好轉(zhuǎn)。原代細(xì)胞培養(yǎng)模擬了體內(nèi)的狀態(tài),能讓你獲得更多
  • 2021

    09-07

    什么是原代細(xì)胞、細(xì)胞株、細(xì)胞系?

    原代細(xì)胞(primarycell)是指從機(jī)體的組織(如人組織、小鼠組織、大鼠組織和兔組織等)經(jīng)蛋白酶或其它的方法獲得單個(gè)細(xì)胞并在體外進(jìn)行模擬機(jī)體培養(yǎng)的細(xì)胞,稱為原代細(xì)胞。一般認(rèn)為,培養(yǎng)的原代的第1代細(xì)胞和傳代到第10代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。在人工條件下使其原代細(xì)胞生存、生長(zhǎng)、繁殖和傳代,進(jìn)行細(xì)胞生命過(guò)程、細(xì)胞癌變、細(xì)胞工程等問(wèn)題的研究。細(xì)胞株(cellstrain)是通過(guò)選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)細(xì)胞中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物的細(xì)胞稱為細(xì)胞株。一般認(rèn)為,細(xì)胞株是用單細(xì)胞分離培養(yǎng)或通過(guò)篩
  • 2021

    09-07

    腫瘤原代細(xì)胞鑒定技術(shù)

    一、形態(tài)學(xué)鑒定1.在倒置顯微鏡中直接觀察活細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特征2.細(xì)胞染色檢查:a)將無(wú)菌玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,加細(xì)胞懸液后培養(yǎng);b)待細(xì)胞長(zhǎng)滿玻片后取出,用PBS清洗,之后放于載玻片上,待其自然干燥;c)用PBS/甲醇(1:1)固定15分鐘;d)棄固定液,加合適的染色液染色;e)染色完畢后用清水洗凈,置于空氣中干燥,f)干燥后,用二甲苯透明,光學(xué)樹脂封片后觀察。二、免疫組織細(xì)胞化學(xué)鑒定1.將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片;2.PBS清洗標(biāo)本3次,各1分鐘;3.4
  • 2021

    09-07

    原代細(xì)胞計(jì)數(shù)技術(shù)

    1、準(zhǔn)備計(jì)數(shù)板:用酒精清潔計(jì)數(shù)板及專用蓋玻片,然后輕輕拭干。2、制備細(xì)胞懸液:用消化液分散單層培養(yǎng)細(xì)胞或直接收集懸浮培養(yǎng)細(xì)胞,制成單個(gè)細(xì)胞懸液。要求細(xì)胞密度不低于104/ml,若細(xì)胞數(shù)很少,應(yīng)將懸液離心(1000rpm,2分鐘),重懸浮于少量培養(yǎng)液中。3、加樣:用習(xí)慣輕吹打細(xì)胞懸液,取少許細(xì)胞懸液,在計(jì)數(shù)板上蓋玻片的一側(cè)加微量細(xì)胞懸液。4、計(jì)數(shù):計(jì)算計(jì)數(shù)板四大格細(xì)胞總數(shù),壓線細(xì)胞只計(jì)左側(cè)和上方的。然后按下式計(jì)算:細(xì)胞數(shù)/ml=4大格細(xì)胞總數(shù)/4×10000。
  • 2021

    09-07

    原代細(xì)胞染色技術(shù)

    一.臺(tái)盼藍(lán)染色(1)制備單個(gè)細(xì)胞懸液,并作適當(dāng)稀釋(106細(xì)胞/ml)。(2)染色:取9滴細(xì)胞懸液移入小試管中,加一滴0.4%臺(tái)盼藍(lán)溶液,混勻。(3)計(jì)數(shù):在3分鐘內(nèi),用血球計(jì)數(shù)板分別計(jì)數(shù)活細(xì)胞和死細(xì)胞。(4)鏡下觀察,死細(xì)胞被染成藍(lán)色,而活細(xì)胞拒染。(5)根據(jù)下式求細(xì)胞活力:二.伊紅Y染色(1)制備1×106-5×106細(xì)胞/ml的細(xì)胞懸液。(2)取0.1ml細(xì)胞懸液加0.1ml伊紅Y染液混合。(3)用計(jì)數(shù)板鏡下計(jì)數(shù)活、死細(xì)胞數(shù)。(4)鏡下觀察,著紅色的為死細(xì)胞。按公式計(jì)算細(xì)胞活力。三.苯胺黑
  • 2021

    09-07

    原代細(xì)胞復(fù)蘇技術(shù)

    1、取出細(xì)胞,迅速放入37℃溫水中快速解凍。2、吸出細(xì)胞懸液,并加10倍以上培養(yǎng)液。3、1000r/分鐘離心5分鐘,去除上清。4、用培養(yǎng)液適當(dāng)稀釋后接種培養(yǎng)瓶,放入37℃CO2培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)。鏡檢細(xì)胞貼壁能力。次日更換一次培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)。PriCells提供:1.各種原代細(xì)胞、細(xì)胞系;2.各種原代細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基;3.各種原代細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑;4.原代細(xì)胞分離試劑盒;5.原代細(xì)胞鑒定試劑盒;6.原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒;7.原代細(xì)胞總蛋白質(zhì)抽提物;8.原代細(xì)胞總RNA;9.原代細(xì)胞總DNA;
  • 2021

    09-06

    原代細(xì)胞凍存技術(shù)

    1、選用生長(zhǎng)情況好,數(shù)量較多的原代細(xì)胞,凍存前一天換液一次。2、貼壁細(xì)胞需用0.25%胰酶常規(guī)消化將細(xì)胞消化下來(lái),將細(xì)胞懸液收集至離心管中。3、1000rpm離心5分鐘,棄上清液。4、沉淀加含DMSO的培養(yǎng)液,計(jì)數(shù),調(diào)整至(1-10)×106/ml。5、將懸液分至凍存管中,每管1ml。6、密封凍存管,封口一定要嚴(yán),否則復(fù)蘇時(shí)易出現(xiàn)爆裂。7、用記號(hào)筆標(biāo)明細(xì)胞種類,凍存日期。8、按下列順序降溫:室溫→4℃(20分鐘〕→冰箱冷凍室(30分鐘)→超低溫冰箱(-80℃過(guò)夜)→液氮。PriCells提供:1
  • 2021

    09-06

    原代細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)技術(shù)

    1、棄去培養(yǎng)基廢液。2、消化:加入1ml0.125%胰酶溶液,轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶使酶液浸沒(méi)瓶底,溫浴消化2-3分鐘。3、終止:用無(wú)血清培養(yǎng)基終止酶反應(yīng)。4、離心:收集中和了的培養(yǎng)液,于15ml的離心管中1000rmp離心10分鐘。5、細(xì)胞重懸:棄去上清,加入1ml無(wú)血清培養(yǎng)基用吸管將貼壁的細(xì)胞吹打成懸液。6、細(xì)胞計(jì)數(shù):血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)細(xì)胞,并換算出細(xì)胞數(shù)量。7、接種分瓶:將細(xì)胞接種到含4ml無(wú)血清培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中,37℃,5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。8、鏡檢觀察:次日觀察貼壁率,細(xì)胞形態(tài)等。
  • 2021

    09-06

    原代細(xì)胞傳代技術(shù)

    一、貼壁細(xì)胞的消化法傳代1、吸除或倒掉瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液。2、加入1ml左右消化液(胰蛋白酶或與EDTA混合液)輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)瓶,使瓶底細(xì)胞都浸入溶液中。3、消化2-5分鐘后把培養(yǎng)瓶放置在顯微鏡下進(jìn)行觀察,發(fā)現(xiàn)原貼壁的細(xì)胞逐漸趨于圓形,在還未漂起時(shí),棄去消化液,加入培養(yǎng)液終止消化。4、用吸管將貼壁的細(xì)胞吹打成懸液,分別接種到另外兩到三個(gè)培養(yǎng)瓶中,置37℃培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。第二天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。二、懸浮細(xì)胞的傳代1、直接傳代①讓懸浮細(xì)胞慢慢沉淀在瓶底后,將上清吸掉1/2-2/3。②用吸管吹打形成細(xì)胞懸液
  • 2021

    09-06

    原代細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)

    一、組織塊直接培養(yǎng)法1、取材,用Hank's液洗滌三次,并剔除脂肪,結(jié)締組織,血液等雜物。2、用手術(shù)剪將組織剪切成1mm3左右的小塊,再用Hank's液洗三次。3、將組織塊轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶,并貼附于瓶底面。4、輕輕將培養(yǎng)瓶翻轉(zhuǎn),瓶底朝上,向瓶?jī)?nèi)注入適量的培養(yǎng)液,將培養(yǎng)瓶放置在37℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)。5、放置待組織小塊貼附后,將培養(yǎng)瓶慢慢翻轉(zhuǎn)平放,使組織浸入培養(yǎng)液中(勿使組織漂起),37℃繼續(xù)培養(yǎng)。二、消化培養(yǎng)法1、取材,用Hank's液洗滌三次,并剔除脂肪,結(jié)締組織,血液等雜物。2、用手術(shù)剪將組織剪切成
  • 2021

    09-06

    原代細(xì)胞鑒定技術(shù)

    一、形態(tài)學(xué)鑒定1.在倒置顯微鏡中直接觀察活細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特征2.細(xì)胞染色檢查:a)將無(wú)菌玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,加細(xì)胞懸液后培養(yǎng);b)待細(xì)胞長(zhǎng)滿玻片后取出,用PBS清洗,之后放于載玻片上,待其自然干燥;c)用PBS/甲醇(1:1)固定15分鐘;d)棄固定液,加合適的染色液染色;e)染色完畢后用清水洗凈,置于空氣中干燥,f)干燥后,用二甲苯透明,光學(xué)樹脂封片后觀察。二、免疫組織細(xì)胞化學(xué)鑒定1.將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中,將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片;2.PBS清洗標(biāo)本3次,各1分鐘;3.4
  • 2021

    08-30

    原代細(xì)胞分離技術(shù)

    取人或動(dòng)物體內(nèi)(或胚胎)的組織,將其剪碎至1mm3的組織塊,再采用的如下方法進(jìn)行分離培養(yǎng):一、懸浮細(xì)胞的分離方法1、將血液、羊水、胸水或腹水等懸液直接轉(zhuǎn)至離心管中,1000rpm/分鐘離心5分鐘。2、去掉上清,離心沉淀用無(wú)鈣、鎂的PBS清洗后1000rpm/分鐘離心5分鐘。此步重復(fù)兩次。3、用培養(yǎng)基重懸,調(diào)整適當(dāng)細(xì)胞濃度后分瓶培養(yǎng)。4、如選用懸液中某種細(xì)胞,可采用離心后的細(xì)胞分層液收獲目的細(xì)胞。二、實(shí)體組織材料的分離方法(一)機(jī)械分散法1、纖維成分很少的腦組織,部分胚胎組織,用剪刀剪碎至1mm3
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