腫瘤原代細(xì)胞鑒定技術(shù)

來(lái)源：武漢原生原代生物醫(yī)藥科技有限公司 2021年09月07日 11:18

一、形態(tài)學(xué)鑒定

1. 在倒置顯微鏡中直接觀察活細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特征

2. 細(xì)胞染色檢查：

a) 將無(wú)菌玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，加細(xì)胞懸液后培養(yǎng)；

b) 待細(xì)胞長(zhǎng)滿玻片后取出，用PBS清洗，之后放于載玻片上，待其自然干燥；

c) 用PBS/甲醇（1:1）固定15分鐘；

d) 棄固定液，加合適的染色液染色；

e) 染色完畢后用清水洗凈，置于空氣中干燥，

f) 干燥后，用二甲苯透明，光學(xué)樹脂封片后觀察。

二、免疫組織細(xì)胞化學(xué)鑒定

1. 將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片；

2. PBS清洗標(biāo)本3次，各1 分鐘；

3. 4%多聚甲醛固定15分鐘；

4. 置于空氣中干燥；

5. PBS清洗標(biāo)本3次，各2 分鐘；

6. 0.5%Triton X-100孵育 1次20分鐘；

7. PBS清洗標(biāo)本 3次各2分鐘；

8. 3%H₂O₂孵育 15分鐘；

9. DPBS清洗標(biāo)本 3次各2 分鐘；

10. 封閉血清孵育（5%正常二抗血清DPBS液20分鐘；

11. 一抗孵育，4℃ 過(guò)夜或37℃ 60 分鐘；

12. PBS清洗標(biāo)本3次各5 分鐘；

13. 二抗工作液孵育（濕盒）37℃ 30 分鐘；

14. PBS清洗標(biāo)本3次各5 分鐘；

15. C液（濕盒） 37℃ 30 分鐘；

16. PBS清洗標(biāo)本3次，各5 分鐘；

17. 用顯色液進(jìn)行顯色；

18. 蒸餾水洗滌2次1 分鐘；

19. 蘇木素復(fù)染1分鐘；

20. 清水洗滌30分鐘；

21. 光學(xué)樹脂封片后觀察。

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