1、棄去培養(yǎng)基廢液。
2、消化:加入1ml 0.125%胰酶溶液,轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶使酶液浸沒瓶底,溫浴消化2-3分鐘。
3、終止:用無血清培養(yǎng)基終止酶反應(yīng)。
4、離心:收集中和了的培養(yǎng)液,于15ml 的離心管中 1000rmp 離心10分鐘。
5、細(xì)胞重懸:棄去上清,加入1ml 無血清培養(yǎng)基用吸管將貼壁的細(xì)胞吹打成懸液。
6、細(xì)胞計(jì)數(shù):血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)細(xì)胞,并換算出細(xì)胞數(shù)量。
7、接種分瓶: 將細(xì)胞接種到含4ml無血清培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中,37℃,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
8、鏡檢觀察:次日觀察貼壁率,細(xì)胞形態(tài)等。
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