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2021
09-17

原代上皮細(xì)胞與原代成纖維細(xì)胞培養(yǎng)的分離純化
PriCells-原代上皮細(xì)胞與原代成纖維細(xì)胞培養(yǎng)的分離純化原代細(xì)胞、傳代細(xì)胞絕大多數(shù)都呈混合生長，既有上皮樣細(xì)胞又有纖維樣細(xì)胞，纖維樣細(xì)胞又包括成纖維細(xì)胞、肌細(xì)胞、骨細(xì)胞、滑膜細(xì)胞等?；祀s的細(xì)胞會直接影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。在體外培養(yǎng)原代細(xì)胞時(shí)，為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性、一致性、穩(wěn)定性、和可重復(fù)性，要求采用單一種類細(xì)胞來進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，這樣才能對某一細(xì)胞的功能、形態(tài)等變化進(jìn)行一系列研究，因而培養(yǎng)細(xì)胞的純化就成為實(shí)驗(yàn)研究的重要一步，甚至需要從混雜的細(xì)胞群中分離出單個(gè)細(xì)胞來進(jìn)行培養(yǎng)和開展實(shí)驗(yàn)研究。一、原代細(xì)胞增殖
2021
09-17

原代血管內(nèi)皮細(xì)胞、Angiogenesis、VEGF
PriCells:原代血管內(nèi)皮細(xì)胞、Angiogenesis、VEGF血管內(nèi)皮細(xì)胞是位于循環(huán)血液與血管壁內(nèi)皮下組織之間的單層細(xì)胞。血管內(nèi)皮細(xì)胞在血栓與止血、血管新生、輻射損傷、炎癥及免疫反應(yīng)等一系列重要的病理生理過程起著重要的作用。臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)和鑒定方法：采用胰蛋白酶行臍靜脈兩次酶灌注消化法獲取內(nèi)皮細(xì)胞。分別在倒置相差顯微鏡、透射電鏡下觀察，SP免疫組化法行Ⅷ因子抗原鑒定。觀察血管內(nèi)皮細(xì)胞體外培養(yǎng)的生長情況，并繪制細(xì)胞生長曲線。血管內(nèi)皮細(xì)胞生理功能1、內(nèi)分泌功能：內(nèi)皮細(xì)胞能通過膜受體途徑感
2021
09-17

原代細(xì)胞分離和培養(yǎng)基本步驟
PriCells:原代細(xì)胞分離和培養(yǎng)基本步驟1、器官和組織的選擇盡可能的去除不必要的組織和血跡。2、原代細(xì)胞的分離（1）應(yīng)用PriCells原代細(xì)胞分離試劑盒I、II、III。（2）根據(jù)組織來源不同，可選用不同的PriCells原代細(xì)胞分離試劑盒。3、原代細(xì)胞的培養(yǎng)：（1）PriCells原代細(xì)胞特制培養(yǎng)基（2）PriCells原代細(xì)胞特制添加物（3）優(yōu)質(zhì)胎牛血清4、細(xì)胞的培養(yǎng)和鑒定：PriCells原代細(xì)胞鑒定試劑盒4、原代細(xì)胞的傳代、保存（1）傳代：依椐細(xì)胞的生長狀態(tài)，生長的細(xì)胞1：2或1：
2021
09-17

原代微血管內(nèi)皮細(xì)胞的體外分離培養(yǎng)
PriCells：原代微血管內(nèi)皮細(xì)胞（PrimaryMicrovascularEndothelialCells）的體外分離培養(yǎng)微血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子的應(yīng)用和免疫磁珠技術(shù)的發(fā)展，使微血管內(nèi)皮細(xì)胞的培養(yǎng)和純化變得相對簡化。1、微血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)簡述人體主要器官和組織的微血管內(nèi)皮細(xì)胞已經(jīng)培養(yǎng)成功的有：骨骼肌、心、腦、胃、視網(wǎng)膜、肺、皮膚、脈絡(luò)膜、小腸、脂肪、肝竇、腎、關(guān)節(jié)滑膜、胎盤、骨髓、胰島、角膜及食道等器官組織的微血管內(nèi)皮細(xì)胞。2、微血管內(nèi)皮細(xì)胞的分離目前分離內(nèi)皮細(xì)胞的方法主要有三種，即酶消化法、
2021
09-17

原代肺泡上皮細(xì)胞的體外分離培養(yǎng)
PriCells：原代肺泡上皮細(xì)胞（PrimaryAlveolarEpithelialCells）的體外分離培養(yǎng)1、*無血液殘留肺臟組織：2、消化肺組織：常用細(xì)胞消化酶：胰蛋白酶、彈性蛋白酶、膠原酶。經(jīng)支氣管將酶灌注到完整的肺中消化，或把肺組織剪碎放入消化液中消化。前者比后者更有效。3、分離純化細(xì)胞：原代肺泡上皮細(xì)胞的分離純化主要方法：（1）密度梯度離心法：密度梯度離心分離細(xì)胞的原理是不同細(xì)胞的沉降系數(shù)不同，在密度梯度離心中細(xì)胞所處的位置也相應(yīng)不同。用ficoll或percoll不連續(xù)梯度離心法
2021
09-16

免疫熒光技術(shù)簡介
PriCells-免疫熒光技術(shù)（Immunofluorescencetechnique）1941年，Coons等于首ci采用熒光素進(jìn)行標(biāo)記而獲得成功。這種以熒光物質(zhì)標(biāo)記抗體而進(jìn)行抗原定位的技術(shù)稱為熒光抗體技術(shù)（fluorescentantibodytechnique）。該技術(shù)的主要特點(diǎn)是：特異性強(qiáng)、敏感性高、速度快。主要缺點(diǎn)是：非特異性染色問題尚未*jie決，結(jié)果判定的客觀性不足，技術(shù)程序也還比較復(fù)雜。一、熒光免疫技術(shù)的概念：免疫熒光技術(shù)（Immunofluorescencetechnique）
2021
09-16

原代肝細(xì)胞培養(yǎng)、肝非實(shí)質(zhì)細(xì)胞、肝臟干細(xì)胞
原代肝細(xì)胞培養(yǎng)、肝非實(shí)質(zhì)細(xì)胞、肝臟干細(xì)胞肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞：指具有執(zhí)行和完成肝功能單位的細(xì)胞。肝非實(shí)質(zhì)細(xì)胞：指非具有執(zhí)行和完成肝功能單位的細(xì)胞，這些細(xì)胞的功能主要是具有連接和支撐肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞的作用。如血竇內(nèi)皮細(xì)胞、Kupffer細(xì)胞、陷窩細(xì)胞（pitcell）及肝臟星狀細(xì)胞（hepaticstellatecell；HSC）。肝臟干細(xì)胞：是一種來源于肝臟Herring狹隙和肝內(nèi)膽管的具有雙向分化潛能的細(xì)胞，能夠分化為肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞和膽管上皮細(xì)胞。這種細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)少，具有卵圓形細(xì)胞核，故又稱卵圓細(xì)胞。在正常的情況
2021
09-16

細(xì)胞培養(yǎng) + ELISA的結(jié)合產(chǎn)物：ELISPOT技術(shù)
ELISPOT（Enzyme-LinkedImmunosorbentSPOT,酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法）：是一種體外檢測特異性抗體分泌細(xì)胞和細(xì)胞因子分泌細(xì)胞的固相酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)技術(shù)，是ELISA技術(shù)和細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)結(jié)合而發(fā)展的新型技術(shù)。使體外檢測各種細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子及細(xì)胞分泌抗體研究有了新的突破ELISPOT技術(shù)優(yōu)點(diǎn)：1.特異性和敏感性高：能從20萬-30萬細(xì)胞中檢出1個(gè)分泌該蛋白的細(xì)胞。2.顯色反應(yīng)：顯現(xiàn)清晰可辨的斑點(diǎn)可直接在顯微鏡下人工計(jì)數(shù)斑點(diǎn)或通過ELISPOT分析系統(tǒng)對斑點(diǎn)進(jìn)行計(jì)數(shù)，1個(gè)斑點(diǎn)代表1個(gè)細(xì)
2021
09-16

小鼠骨骼肌細(xì)胞培養(yǎng)
PriCells–正常小鼠原代骨骼肌細(xì)胞培養(yǎng)一、實(shí)驗(yàn)試劑1、培養(yǎng)基：PriCellsMedium+10%FBS+1%P/S+PriCellsSupplement2、凍存液：PriCellsMedium+20%FBS+10%DMSO3、洗滌液：1×PBS（pH7.4）+1%P/S4、染色液：0.4%TrypanBlue5、消化液：PriCellsIsolationofPrimaryCellKit6、檢測試劑：鼠抗人及大鼠desmin一抗，肌球蛋白（myosin）單克隆抗體二、實(shí)驗(yàn)器械1、培養(yǎng)皿2、
2021
09-16

人和哺乳動物原代細(xì)胞的蛋白質(zhì)抽提步驟
一、培養(yǎng)的貼壁原代細(xì)胞的蛋白質(zhì)抽提基本步驟1、從貼壁細(xì)胞培養(yǎng)瓶中小心傾去培養(yǎng)液。2、預(yù)冷的1×PBS（pH7.4）清洗貼壁的細(xì)胞2次，小心傾去PBS。3、PriCells蛋白質(zhì)抽提試劑（1ml抽提試劑中加入5μl蛋白酶抑制劑混合液\5μlPMSF和5μl磷酸酶混合液等等）。4、細(xì)胞瓶中加入預(yù)冷的含抑制劑的蛋白質(zhì)抽提劑（107個(gè)細(xì)胞中加入1ml抽提試劑；5×106個(gè)細(xì)胞中加入0.5ml抽提試劑），輕輕搖動5分鐘。5、用一預(yù)冷的橡膠和塑料細(xì)胞刮將培養(yǎng)瓶壁上貼壁細(xì)胞刮下來，轉(zhuǎn)移細(xì)胞懸浮液到離心管中，冰
2021
09-13

小鼠真皮成纖維細(xì)胞培養(yǎng)
PriCells–正常小鼠原代真皮纖維原細(xì)胞培養(yǎng)一、實(shí)驗(yàn)試劑1、培養(yǎng)基：PriCellsMedium+10%FBS+1%P/S+PriCellsSupplement2、凍存液：PriCellsMedium+20%FBS+10%DMSO3、洗滌液：1×PBS（pH7.4）+1%P/S4、染色液：0.4%TrypanBlue5、消化液：PriCellsIsolationofPrimaryCellKit6、檢測試劑：抗小鼠Fibronectin抗體，熒光標(biāo)記二抗，乙醇丙酮混合液（1：1）二、實(shí)驗(yàn)器械1
2021
09-13

人外周血白細(xì)胞的分離
正常人外周血白細(xì)胞的分離一、自然沉降法正常人外周血紅細(xì)胞與白細(xì)胞的比例約為6000～1000:1，兩類細(xì)胞的沉降速度不同，進(jìn)行正常人外周血白細(xì)胞分離。1、試劑及配制1）無Ca2+、Mg2+Hank’s液。2）含10%～20%滅活小牛血清Hank’s液。2、操作方法1）取靜脈血2ml，放入加有抗凝劑的試管中，輕輕混勻。2）將試管直立靜置于室溫或37℃溫箱中30～60min，待紅細(xì)胞自然沉降。此時(shí)可見試管中的懸液分3層，上層為淡黃色血漿，底層為紅細(xì)胞，在緊貼紅細(xì)胞層上有一呈灰白色的白細(xì)胞層（正常人外
2021
09-13

無血清培養(yǎng)基一些基本配方
無血清培養(yǎng)基一些基本配方1、基本適應(yīng)于神經(jīng)細(xì)胞，干細(xì)胞，PC12細(xì)胞葡萄糖0.6%谷氨酰胺2mMNaHCO33mMHepes5mM胰島素2.5mg/ml轉(zhuǎn)鐵蛋白100ng/ml孕酮20nM丁二胺60mM硒酸na30nM青霉素50mg/ml鏈霉素50mg/ml最后用DF12添加到100ml。2.基本適應(yīng)于各類小鼠胚胎癌細(xì)胞系培養(yǎng)基NaHCO32.4gHEPES(1.5M)10.0ml硒酸（5X10-6M)10.0mg纖粘連蛋白1ug/cm2(37度作用15－30分鐘）胰島素1000.0mg轉(zhuǎn)鐵蛋白
2021
09-13

小鼠腦星形膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)
PriCells–正常小鼠原代腦星形膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)一、實(shí)驗(yàn)試劑1、培養(yǎng)基：PriCellsMedium+10%FBS+1%P/S+PriCellsSupplement2、凍存液：PriCellsMedium+20%FBS+10%DMSO3、洗滌液：1×PBS（pH7.4）+1%P/S4、染色液：0.4%TrypanBlue5、消化液：PriCellsIsolationofPrimaryCellKit6、檢測試劑：抗小鼠CD11b/c抗體，熒光標(biāo)記二抗，乙醇丙酮混合液（1：1）二、實(shí)驗(yàn)器械1、培養(yǎng)皿
2021
09-13

大鼠原代主動脈平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)
PriCells–正常大鼠原代主動脈平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)一、實(shí)驗(yàn)試劑1、培養(yǎng)基：PriCellsMedium+10%FBS+1%P/S+PriCellsSupplement2、凍存液：PriCellsMedium+20%FBS+10%DMSO3、洗滌液：1×PBS（pH7.4）+1%P/S4、染色液：0.4%TrypanBlue5、消化液：PriCellsIsolationofPrimaryCellKit6、檢測試劑：肌動蛋白、a-SMA或Desmin抗體，熒光標(biāo)記二抗，4%多聚甲醛二、實(shí)驗(yàn)器械1、培
2021
09-10

大鼠原代心肌細(xì)胞培養(yǎng)
PriCells–正常大鼠原代心肌細(xì)胞培養(yǎng)一、實(shí)驗(yàn)試劑1、培養(yǎng)基：PriCellsMedium+10%FBS+1%P/S+PriCellsSupplement2、凍存液：PriCellsMedium+20%FBS+10%DMSO3、洗滌液：1×PBS（pH7.4）+1%P/S4、染色液：0.4%TrypanBlue5、消化液：PriCellsIsolationofPrimaryCellKit6、檢測試劑：一抗小鼠抗大鼠α-橫紋肌肌動蛋白，二抗FITC標(biāo)記山羊抗小鼠IgG，乙醇丙酮混合液（1∶1）
2021
09-10

大兔原代晶狀體上皮細(xì)胞培養(yǎng)
PriCells-正常大兔原代晶狀體上皮細(xì)胞培養(yǎng)一、實(shí)驗(yàn)試劑1、培養(yǎng)基：PriCellsMedium+10%FBS+1%P/S+PriCellsSupplement2、凍存液：PriCellsMedium+20%FBS+10%DMSO3、洗滌液：1×PBS（pH7.4）+1%P/S4、檢測試劑：抗兔Vimentin抗體，熒光標(biāo)記二抗，乙醇丙酮混合液（1：1）二、實(shí)驗(yàn)器械1、培養(yǎng)皿2、培養(yǎng)瓶3、直剪和眼科剪4、眼科鑷5、200μl微量移液器及200μl的吸頭6、玻璃滴管三、實(shí)驗(yàn)流程取材↓清除鞏膜外
2021
09-10

原代細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室組建的基本要求
一、實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)1、細(xì)胞培養(yǎng)是一種無菌操作技術(shù)，要求工作環(huán)境和條件必須保證無微生物污染和不受其它有害因素的影響。2、細(xì)胞培養(yǎng)室和設(shè)計(jì)原則是防止微生物污染和有害因素影響，要求工作環(huán)境清潔、空氣清新，干燥和無煙塵。3、細(xì)胞培養(yǎng)室的設(shè)計(jì)原則一般是無菌操作區(qū)設(shè)在室內(nèi)較少走動的內(nèi)側(cè)，常規(guī)操作和封閉培養(yǎng)于一室，為10萬級潔凈環(huán)境的潔凈室。而洗刷消毒工作設(shè)在潔凈室外，避免物品污染潔凈室內(nèi)環(huán)境。細(xì)胞潔凈室需要一個(gè)空調(diào)系統(tǒng)并對外界保持一定的正壓。4、解剖實(shí)驗(yàn)室主要用于對器官組織的分離，需要有無菌操作臺、解剖顯微鏡、
2021
09-10

人臍靜脈原代內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)
PriCells-正常人臍靜脈原代內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)一、實(shí)驗(yàn)試劑1、培養(yǎng)基：PriCellsMedium+10%FBS+1%P/S+PriCellsSupplement2、凍存液：PriCellsMedium+20%FBS+10%DMSO3、洗滌液：1×PBS（pH7.4）+1%P/S4、染色液：0.4%TrypanBlue5、消化液：PriCellsIsolationofPrimaryCellKit6、檢測試劑：抗人Ⅷ因子抗體，熒光標(biāo)記二抗，乙醇丙酮混合液（1：1）二、實(shí)驗(yàn)器械1、培養(yǎng)皿2、培養(yǎng)瓶3
2021
09-10

腫瘤組織源性的原代細(xì)胞培養(yǎng)
概述腫瘤細(xì)胞的原代培養(yǎng)與正常細(xì)胞的原代培養(yǎng)的條件基本相似。一般常用原代細(xì)胞的基礎(chǔ)培養(yǎng)基，10%血清濃度即可，在原代培養(yǎng)時(shí)需加入原代細(xì)胞培養(yǎng)的特制添加物，或原患者血清（1%-2%）以利細(xì)胞生長。用細(xì)胞生長因子如胰島素、氫化可de松、雌激素等等。也可以考慮動物媒介培養(yǎng)。，根據(jù)細(xì)胞種類不同選用不同的促細(xì)胞生長因子。腫瘤組織分離為腫瘤細(xì)胞原代培養(yǎng)的方法主要有組織塊法、酶消化法、鉭網(wǎng)法、脫落細(xì)胞法等。1.組織塊法將取得的瘤組織去除脂肪、結(jié)締組織及壞死部分，在平皿中用Hanks液洗3次，剪碎組織，切成1-2

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