當(dāng)前位置：武漢原生原代生物醫(yī)藥科技有限公司>>技術(shù)文章展示
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2021
11-01PriCells: 等密度離心法去除紅細(xì)胞和死細(xì)胞
PriCells:等密度離心法去除紅細(xì)胞和死細(xì)胞器材和試劑：所有直接接觸細(xì)胞的用品和試劑必須無菌。1.標(biāo)注體積刻度的試管（圓錐形底）；2.巴斯德吸管（短型和長型）；3.10ml刻度吸管和洗耳球或移液裝置；4.臺式離心機(jī)；5.淋巴細(xì)胞分離液或類似試劑；6.培養(yǎng)基；實驗方法：1.重懸細(xì)胞使之達(dá)到5×106—107個/ml的高濃度。在一個離心管中加入10ml淋巴細(xì)胞分離液，用巴斯德吸管或10ml移液管小心將5ml的原代細(xì)胞懸液加于淋巴細(xì)胞分離液面上。將容器傾斜一個角度，沿容器壁慢慢地將細(xì)胞懸液滴下，而2021
11-012021
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11-01PriCells: 非限制性體干細(xì)胞（USSCs）的分離
PriCells:非限制性體干細(xì)胞（USSCs）的分離試劑和材料：1.起始培養(yǎng)基；2.擴(kuò)增培養(yǎng)基；3.0.05%胰蛋白酶，含EDTA；4.PBSA；5.T25培養(yǎng)瓶；實驗方法：1.制備和分離臍帶血來源的MNCs（CB-MNCs）；2.如果使用凍存的CB-MNCs，復(fù)蘇的細(xì)胞可以用于培養(yǎng)，不需要其他分離步驟；3.用起始培養(yǎng)基按5×106—7×106個細(xì)胞/ml濃度接種到T25的培養(yǎng)瓶中；4.將細(xì)胞放在37℃，5%CO2的條件下培養(yǎng)，2-4周內(nèi)每周一次更換培養(yǎng)基和細(xì)胞因子；5.形成USSC集落后，在2021
11-01PriCells: 飼養(yǎng)層細(xì)胞共培養(yǎng)體外擴(kuò)增原代CD34+細(xì)胞
PriCells:飼養(yǎng)層細(xì)胞共培養(yǎng)體外擴(kuò)增原代CD34+細(xì)胞試劑和材料：1.MSCs培養(yǎng)基；2.6孔培養(yǎng)板；3.絲lie霉素C，100μg/ml；4.共培養(yǎng)的培養(yǎng)基：IMDM添加10%FBS，100U/ml青霉素和100μl/ml鏈霉素；5.細(xì)胞因子（干細(xì)胞因子，IL-6，F(xiàn)lt-3配體，促血小板生成素）；實驗方法：1.將臍帶血來源的間充質(zhì)干細(xì)胞（CB-MSCs）作為飼養(yǎng)層細(xì)胞，用MSCs培養(yǎng)基重懸CB-MSCs，細(xì)胞濃度為5×104個細(xì)胞/ml；2.將CB-MNCs接種到6孔板；3.每周兩次半2021
10-29PriCells: 體外三維基質(zhì)中原代CD34+細(xì)胞的擴(kuò)增
PriCells:體外三維基質(zhì)中原代CD34+細(xì)胞的擴(kuò)增試劑和材料：1.培養(yǎng)基：含2mmol/L的左旋谷氨酰胺的IMDM，添加1%牛血清白蛋白，10μg/ml胰島素，0.1mmol/L2-巰基乙醇，50U/ml青霉素和50μg/ml鏈霉素；2.48孔培養(yǎng)板；3.0.05%胰蛋白酶，含EDTA；4.纖維粘連蛋白（fibronectin）包被的細(xì)胞基質(zhì)支架；5.細(xì)胞因子（干細(xì)胞因子，IL-6，IL-3，F(xiàn)lt-3配體）；實驗方法：1.用含細(xì)胞因子的培養(yǎng)基重懸細(xì)胞（100ng/ml干細(xì)胞因子，20ng2021
10-29PriCells: 原代細(xì)胞周期測定的原理和BrdU方法
PriCells:原代細(xì)胞周期測定的原理和BrdU方法原理:細(xì)胞周期:細(xì)胞一世代所經(jīng)歷的時間從一次細(xì)胞分裂結(jié)束到下一次分裂結(jié)束一個周期。細(xì)胞周期反應(yīng)了細(xì)胞增殖速度。單個細(xì)胞的周期測定可采用縮時攝影的方法，但它不能代表細(xì)胞群體的周期，故現(xiàn)采用其他方法測群體周期。測定細(xì)胞周期的方法很多，有同位素標(biāo)記法、細(xì)胞計法等。BrdU（5溴脫氧尿嘧啶核苷）加入培養(yǎng)基后，可做為細(xì)胞DNA復(fù)制的原料，經(jīng)兩個細(xì)胞周期后，細(xì)胞中兩條單鏈均含BrdU的DNA將占l/2，反映在染色體上應(yīng)表現(xiàn)為一條單體淺染。如經(jīng)歷了三個周期2021
10-29PriCells: Primary dermal fibroblasts isolated from human
PriCells:PrimarydermalfibroblastsisolatedfromhumanFibroblastswereestablishedfromdonorsofhumannormalskin,scar,ａndkeloidusingtheexplantmethod.Thespecimenswerewashedwithsterilephosphate-bufferedsaline(PBS),ａndthesubcutaneoustissueswereremovedcarefully.T2021
10-29PriCells: 密度梯度分離法分離單個核細(xì)胞（MNCs）
PriCells:密度梯度分離法分離單個核細(xì)胞（MNCs）試劑和材料：1.合適的培養(yǎng)基或冷凍液；2.PBSA；3.Ficoll-Hypague；4.巴氏吸管；5.50ml離心管；實驗方法：1.將臍血樣品用PBSA按1：1比例稀釋；2.將15mlFicoll-Hypague吸入50ml離心管；3.將30mlPBSA稀釋的臍血樣品緩慢地加到Ficoll-Hypague上；4.室溫450g離心20-30min；5.離心后，在Ficoll-Hypague液面上明細(xì)可見一層細(xì)胞，是密度低于Ficoll-H2021
10-29PriCells: 從CB-MNCs中分離CD34+細(xì)胞
PriCells:從CB-MNCs中分離CD34+細(xì)胞試劑和材料：1.培養(yǎng)基；2.過柱緩沖液：pH7.2的PBSA，添加0.5%牛血清白蛋白和2mmol/LEDTA或0.6%枸櫞酸葡萄糖A方（ACD-A）。用真空裝置除去緩沖液中的氣體；3.FcR阻斷劑；4.CD34微球；5.柱子（MS+/RS+或LS+/VS+）；6.磁珠細(xì)胞分離儀（如MiniMACS）；7.尼龍過濾網(wǎng)，30μm；實驗方法：1.準(zhǔn)備過柱緩沖液，用抽真空裝置去除氣體；2.每108個CB-MNCs用終體積300μl緩沖液重懸；3.每2021
10-28PriCells: Primary Culture of Cortical and Hippocampal neurons
PriCells:PrimaryCultureofCorticalａndHippocampalneuronsSet-upforthedissection:Day1:AddpolyD-lysine/lamininsolutiontoculturedishes/coverslips.Swirltheplatetoensurethatthecoatingmixcoverstheentirebottomoftheplate.Leavethedishes/coverslipsinthe37℃/5%CO2i2021
10-28PriCells: BrdU標(biāo)記法檢測原代細(xì)胞增殖
PriCells:BrdU標(biāo)記法檢測原代細(xì)胞增殖1．細(xì)胞以1.5×105/ml細(xì)胞接于直徑35ml培養(yǎng)皿中（內(nèi)放置蓋玻片），培養(yǎng)1天，用含0.4％FCS培養(yǎng)液同步化3天，使絕數(shù)細(xì)胞處于G0期2．終止細(xì)胞培養(yǎng)，加入BrdU（終濃度30μg/L），37℃，孵育40min。3．棄培養(yǎng)液，玻片用PBS洗滌3次。4．甲醇/醋酸固定10min。5．經(jīng)固定的玻片空氣干燥，0.3％H2O2-甲醇30min滅活內(nèi)源性氧化酶。6．5％正常兔血清封閉。7．甲酰胺100℃，5min變性核酸。8．冰浴冷卻后PBS洗滌，加2021
10-28PriCells: 酶消化法從Wharton膠中分離干細(xì)胞
PriCells:酶消化法從Wharton膠中分離干細(xì)胞試劑和材料：1.培養(yǎng)基：*LG-DMEM：含2mmol/L的左旋谷氨酰胺的低糖DMEM，添加10%熱滅活胎牛血清，100U/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素；2.PBSA；3.胰蛋白酶，2.5%；4.膠原酶A，0.1%用PBSA配制；5.培養(yǎng)瓶；6.圓錐形離心管，50ml；7.剪刀；8.鑷子；實驗方法：1.臍帶取材后，可在PBSA中保存1-24h；2.除去血管，將Wharton膠剪成大約0.5cm的小組織塊；3.將剪碎的組織塊轉(zhuǎn)移到50m2021
10-282021
10-28PriCells: 體內(nèi)DPSCs的成牙和成骨分化
PriCells:體內(nèi)DPSCs的成牙和成骨分化試劑和材料：1.無鎂和鈣的PBS平衡鹽溶液（PBSA）；2.MSC培養(yǎng)基：含2mmol/L谷氨酰胺的α-MEM，添加15%胎牛血清，0.1mmol/L左旋抗壞血酸磷酸鹽，100U/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素；3.胰蛋白酶-EDTA溶液：0.05%胰蛋白酶，0.54mmol/L（0.2%）EDTA，無鎂和鈣的PBS平衡鹽溶液溶解；4.凍存管，1.8ml；5.合適的載體（羥基磷灰石/磷酸三鈣載體，HA/TCP）；實驗方法：1.用MSC培養(yǎng)基培養(yǎng)2021
10-272021
10-27PriCells: Analysis of DNA Fragments of Apoptosis with Gel Electrophoresis
PriCells:AnalysisofDNAFragmentsofApoptosiswithGelElectrophoresisFormationofDNAfragmentsofoligonucleosomalsize(180-200bp)isahallmarkofapoptosisinmanycelltypes.1.Dispense0.5mlofcellsuspension(nolessthan5x105,otherwiseDNAwillnotbedetectablebyphotography2021
10-272021
10-27PriCells: DPSCs/SHED的原代培養(yǎng)
PriCells:DPSCs/SHED的原代培養(yǎng)Stemcellsfromhumanexfoliateddeciduousteeth(SHED)Postnatalhumandentalpulpstemcells(DPSCs)試劑和材料：1.無鎂和鈣的PBS平衡鹽溶液（PBSA）；2.MSC培養(yǎng)基：含2mmol/L谷氨酰胺的α-MEM，添加15%胎牛血清，0.1mmol/L左旋抗壞血酸磷酸鹽，100U/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素；3.Ⅰ型膠原酶；4.中性蛋白酶；5.免疫磁珠分選時所需試劑；2021
10-27PriCells: Isolation of Mice Muscle Cells
PriCells:IsolationofMiceMuscleCellsThegastrocnemius,soleus,ａndplantariswereexcisedfromthreeC57BL/6-Ly-5.16-week-oldmice.Tendons,allbone,ａndfatwerecarefullydiscarded,ａndthemuscletissuewasthoroughlymincedａndthendigestedat37°Cwith0.2%collagenasefor45min掃一掃訪問手機(jī)商鋪
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