PriCells: 臍血MSCs的分離
試劑和材料:
1. 培養(yǎng)基;
2. 0.05%胰蛋白酶,含EDTA;
3. PBSA;
4. T25;
實(shí)驗(yàn)方法:
1. 為了獲得新鮮制備的CB-MNCs,按密度梯度分離法分離單個(gè)核細(xì)胞(MNCs);
2. 用培養(yǎng)基重懸新鮮分離或凍存的MNCs。凍存的MNCs在鋪板前要37℃迅速?gòu)?fù)蘇并用培養(yǎng)基洗一遍;
3. 將重懸在培養(yǎng)基的CB-MNCs接種到T25的培養(yǎng)瓶,接種密度為3×105 個(gè)細(xì)胞/cm2;
4. 將細(xì)胞放入37℃ 5%CO2的培養(yǎng)箱中;
5. 每7天更換一次培養(yǎng)基,直到貼壁生長(zhǎng)的成纖維細(xì)胞樣的細(xì)胞達(dá)到匯合;
6. 一旦達(dá)到匯合,用0.05%胰蛋白酶/EDTA處理5min,重懸細(xì)胞,然后將細(xì)胞按1×105 個(gè)/瓶重新接種;
7. 達(dá)到細(xì)胞匯合后,用培養(yǎng)基按1:5稀釋后再接種培養(yǎng);
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