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2021
11-05PriCells: 原代細(xì)胞培養(yǎng)后，碘克沙醇梯度溶液分析主要細(xì)胞器
PriCells:原代細(xì)胞培養(yǎng)后，碘克沙醇梯度溶液分析主要細(xì)胞器試劑和器材：1.OptiPrepTM（600g/L的碘克沙醇）；2.勻漿介質(zhì)：0.25mmol/L蔗糖溶液、1mmol/L乙二胺四乙酸、20mmol/LHepes-NaOH，pH7.4；3.OptiPrepTM稀釋液：0.25mmol/L蔗糖、6mmol/L乙二胺四乙酸、120mmol/LHepes-NaOH，pH7.4；4.碘克沙醇（500g/L）工作液（IWS）：5體積OptiPrepTM+1體積OptiPrepTM稀釋液；5.2021
11-05不連續(xù)Nycodenz梯度溶液中原代細(xì)胞溶酶體的分離
PriCells:不連續(xù)Nycodenz梯度溶液中原代細(xì)胞溶酶體的分離試劑和器材：1.勻漿介質(zhì)：0.25mol/L蔗糖溶液、1mmol/L乙二胺四乙酸、10mmol/LHepes-NaOH，pH7.4；2.NycoprepTMUniversal；3.磷酸緩沖液pH7.4（50mmol/L）4.NycoprepTMUniversal稀釋劑：6mmol/L乙二胺四乙酸、60mmol/LHepes-NaOH，pH7.4；5.Nycodenz工作溶液（500g/L）：將5體積NycoprepTMUniv2021
11-05哺乳動(dòng)物原代細(xì)胞培養(yǎng)的β-半乳糖苷酶（分光光度測(cè)定）
PriCells:哺乳動(dòng)物原代細(xì)胞培養(yǎng)的β-半乳糖苷酶（分光光度測(cè)定）試劑和器材：1.反應(yīng)緩沖液：5g/L聚乙二醇辛基苯基醚（TritonX-100）、0.05mol/L檸檬酸鈉-磷酸鹽緩沖液，pH4.3；2.終止液：0.25%甘氨酸-NaOH，pH10；3.底物：6mmol/L對(duì)硝基苯基-β-半乳呋喃糖苷溶于緩沖溶液中；4.微量離心機(jī)，帶1.5—2.0ml小管；5.分光光度計(jì)（可見(jiàn)波長(zhǎng)）帶1ml比色皿；紫外-可見(jiàn)分光光度法測(cè)定酶活酶活測(cè)定：以O(shè)NPG為底物測(cè)定β-半乳糖苷酶活力。酶活定義：以O(shè)2021
11-05PriCells: 碘克沙醇梯度提取哺乳動(dòng)物原代細(xì)胞過(guò)氧化物酶體
PriCells:碘克沙醇梯度提取哺乳動(dòng)物原代細(xì)胞過(guò)氧化物酶體試劑和器材：1.OptiPrepTM（600g/L的碘克沙醇）；2.勻漿介質(zhì)：0.25mmol/L蔗糖溶液、1mmol/L乙二胺四乙酸、1g/L乙醇、5mmol/L3-嗎啉基丙磺酸（MOPS），pH7.2；3.稀釋劑：6mmol/L乙二胺四乙酸、6g/L乙醇、30mmol/LMOPS，pH7.2；4.1mol/L蔗糖溶液；5.按要求向勻漿介質(zhì)和稀釋劑中加入蛋白酶抑制劑；6.使用勻漿介質(zhì)制備好的線粒體組分；7.Dounce勻漿器（10m2021
11-05PriCells: 哺乳動(dòng)物原代細(xì)胞培養(yǎng)的β-半乳糖苷酶（熒光測(cè)定）
PriCells:哺乳動(dòng)物原代細(xì)胞培養(yǎng)的β-半乳糖苷酶（熒光測(cè)定）β半乳糖苷酶：β半乳糖苷酶由大腸桿菌lacZ基因編碼，可催化半乳糖苷水解。zui大優(yōu)勢(shì)是易于用免疫組織化學(xué)法觀測(cè)其原位表達(dá)，是zui常用的監(jiān)測(cè)轉(zhuǎn)染率的報(bào)道基因之一。以鄰—硝基苯—β—D—半乳吡喃糖苷(ONPG)為底物可用標(biāo)準(zhǔn)的比色法檢測(cè)酶活性，其檢測(cè)動(dòng)力學(xué)范圍為6個(gè)數(shù)量級(jí)。氯酚紅—β—D—半乳吡喃糖苷(CPRG)是另一個(gè)可用比色法檢測(cè)酶活性的底物，其靈敏度比ONPG高近10倍。以MUG和熒光素二半乳糖苷(FDG)為底物則可用熒光法2021
11-04PriCells: 用Nycodenz○R不連續(xù)梯度溶液純化酵母線粒體
PriCells:用Nycodenz○R不連續(xù)梯度溶液純化酵母線粒體試劑和器材：1.酵母原生質(zhì)體制備于山梨醇緩沖液中；2.NycoprepTMUniversal（600g/LNycodenz）；3.Nycodenz○R工作溶液：500g/LNycodenz；4.山梨醇緩沖液：0.6mol/L山梨醇、20mmol/LMes-KOH，pH6.0；5.山梨醇緩沖液（2×）：1.2mol/L山梨醇、40mmol/LMes-KOH，pH6.0；6.懸浮緩沖液：0.6mol/L山梨醇、20mmol/LMes2021
11-04PriCells: 從組織和培養(yǎng)細(xì)胞中制備輕線粒體組分
PriCells:從組織和培養(yǎng)細(xì)胞中制備輕線粒體組分試劑和器材：1.勻漿介質(zhì)：0.25mol/L蔗糖溶液、1mmol/L乙二胺四乙酸、10mmol/LHepes-NaOH，pH7.4；2.按要求向溶液加入蛋白酶抑制劑；3.磷酸鹽緩沖液；4.低速冷凍離心機(jī)，配有30—40ml離心管的吊桶式離心轉(zhuǎn)子；5.高速離心機(jī)，配有30—40ml離心管的固定角轉(zhuǎn)子；6.用于肝臟：Potter-Elvehjem（聚四氟乙烯樹(shù)脂和玻璃）勻漿器（30—40ml），連接高轉(zhuǎn)矩橋式電動(dòng)機(jī)（半導(dǎo)體開(kāi)關(guān)控制）；7.用于細(xì)胞：2021
11-04PriCells: Primary cell attachment assays
PriCells:Primarycellattachmentassays1.96-wellstissuecultureplateswerecoatedfor1houratRTwithtypeIcollagen,washedseveraltimeａndblockedwithPriCellsculturesolutionａnd1%BSAforanadditional30minutes.2.Primarycellweretrypsinizedoffflasks,centrifugedａndresusp2021
11-04PriCells: 用差速離心法從大鼠肝臟中分離原代細(xì)胞重線粒體組分
PriCells:用差速離心法從大鼠肝臟中分離原代細(xì)胞重線粒體組分試劑和器材1.甘露醇緩沖液：0.2mol/L甘露醇、50mmol/L蔗糖溶液、10mmol/LKCl、1mmol/L乙二胺四乙酸、10mmol/LHepes-NaOH，pH7.4；2.玻璃棒；3.Dounce勻漿器（20—30ml寬松配制，WheatonB型）；4.高轉(zhuǎn)矩橋式電動(dòng)機(jī)（半導(dǎo)體開(kāi)關(guān)控制）；5.高速離心機(jī)，配有可容納40—50ml離心管的固定角轉(zhuǎn)子低速冷凍離心機(jī)；6.Potter-Elvehjem勻漿器，20—40ml間2021
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11-03PriCells: Transendothelial flux of primary vascular endothelial cell
PriCells:Transendothelialfluxofprimaryvascularendothelialcell1.Primaryvascularendothelialcell(1x105cells)wereculturedtoconfluenceontissue-cultureTranswellplates(polycarbonatemembrane,12-mmdiameter,0.4-µMporesize;BectonDickinsonLabware,Bedford,MA)2.Pr2021
11-03PriCells: 原代細(xì)胞核孔復(fù)合物的分離
PriCells:原代細(xì)胞核孔復(fù)合物的分離試劑和器材：1.肝素；2.苯j(luò)ia基磺酰氟（PMSF）（溶于乙醇中配制成1mol/L儲(chǔ)存液）；3.純化的核膜；4.提取緩沖液（EB）：含1%（體積分?jǐn)?shù)）TritonX-100的10mmol/LTris-HCl，（pH7.4）、0.1mmol/L苯j(luò)ia基磺酰氟；5.Tris緩沖液：2mmol/LTris-HCl、pH7.4，10mmol/LTris-HCl、pH7.4；6.梯度溶液：0.25mol/L蔗糖溶液和1.5mol/L蔗糖溶液溶于10mmol/L2021
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11-02PriCells: Assay of the vascular endothelial permeability in mice
PriCells:AssayofthevascularendothelialpermeabilityinmiceMicewerehousedinapathogen-freeenvironment.Mice(6-8weeksold,18-22g)wereinjectedintravenouslywithChicagoskybluedye60B(100µLof10mg/mL)throughthetailveinMicewerekilled2hoursａndtheabdominalskinwasrem2021
11-02PriCells: 用碘克沙醇梯度溶液從哺乳動(dòng)物肝臟中分離細(xì)胞核的
試劑和器材：1.OptiPrepTM（600g碘克沙醇，ρ=1.32g/ml）；2.OptiPrepTM稀釋劑（OptiPrepTMdiluent，OD）：150mmol/LKCl、30mmol/LMgCl2、120mmol/L三jia基甘氨酸-KOH，pH7.8；3.勻漿介質(zhì)（HM）：0.25mol/L蔗糖、25mmol/LKCl、5mmol/LMgCl2、20mmol/L三jia基甘氨酸-KOH，pH7.8；按要求向OptiPrepTM稀釋劑和勻漿介質(zhì)中加入蛋白酶抑制劑4.高轉(zhuǎn)矩橋式電動(dòng)機(jī)（2021
11-02PriCells: 混合劑技術(shù)純化人外周血單核細(xì)胞
PriCells:混合劑技術(shù)純化人外周血單核細(xì)胞試劑和器材：1.抗凝血?jiǎng)?00mmol/L乙二胺四乙酸或38g/L檸檬酸鈉；2.Hepes緩沖生理鹽水（HBS）：8.5g/LNaCl、10mmol/LHepes-NaOH，pH7.4；3.OptiPrepTM；4.臺(tái)式低速離心機(jī)；5.巴斯德吸管（短型和長(zhǎng)型）；實(shí)驗(yàn)方法：1.用乙二胺四乙酸（2mmol/L終濃度）或檸檬酸鈉（38g/L終濃度）作為抗凝劑來(lái)收集靜脈血；2.在合適的帶帽離心管（可容納5—10ml樣品的15ml管）中，全血與OptiPr2021
11-02PriCells: 細(xì)胞計(jì)數(shù)和活力測(cè)定
PriCells:細(xì)胞計(jì)數(shù)和活力測(cè)定器材和試劑：1.倒置相差顯微鏡，具有10×物鏡；2.標(biāo)注體積刻度的試管（圓錐形底）；3.改良的Neubauer血細(xì)胞計(jì)數(shù)器；4.計(jì)數(shù)器蓋玻片；5.袖珍管或等體積的塑料容器，如試管或離心管；6.巴斯德吸管（短型和長(zhǎng)型）；7.可調(diào)體積的微量加樣器（100—250μl）；8.無(wú)菌槍尖；9.無(wú)菌刻度吸管（1—10ml）、洗耳球或自動(dòng)移液裝置；10.10g/L臺(tái)盼藍(lán)；11.Hanks平衡鹽溶液或儲(chǔ)存培養(yǎng)基；實(shí)驗(yàn)方法：1.準(zhǔn)備計(jì)數(shù)器。輕輕地濕潤(rùn)中央網(wǎng)絡(luò)區(qū)域的各個(gè)邊，用兩個(gè)2021
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