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蛋白測序方法2025/7/9

蛋白測序是解析蛋白質(zhì)氨基酸排列順序的核心技術(shù)，主要分為傳統(tǒng)化學(xué)法、質(zhì)譜分析法和新興單分子技術(shù)三大類。以下是主流方法的原理、流程及適用場景詳解：??一、傳統(tǒng)化學(xué)法：Edman降解原理：從蛋白質(zhì)N端逐級切...

提高GST pull-down蛋白相互作用分析的五大關(guān)鍵2025/7/9

GSTpull-down是一種常用的體外實驗方法，主要用于驗證已知蛋白質(zhì)之間的直接相互作用。提高GSTpull-down蛋白相互作用分析的關(guān)鍵主要包括以下幾點：1.優(yōu)化蛋白表達與純化：選擇適當(dāng)?shù)谋磉_系...

如何進行MRM/PRM定量蛋白組學(xué)分析？2025/7/1

MRM（MultipleReactionMonitoring，多反應(yīng)監(jiān)測）和PRM（ParallelReactionMonitoring，平行反應(yīng)監(jiān)測）是兩種靶向定量蛋白質(zhì)組學(xué)的技術(shù)路線。以下是進行M...

蛋白質(zhì)組定量中的LFQ與同位素標(biāo)記策略2025/6/24

定量蛋白質(zhì)組學(xué)在當(dāng)代生命科學(xué)研究中扮演著關(guān)鍵角色，幫助研究人員深入了解生理或病理狀態(tài)下細胞系統(tǒng)的動態(tài)調(diào)控機制。不同于僅關(guān)注蛋白種類的“鑒定”，蛋白質(zhì)定量的核心在于測量蛋白豐度的變化，從而揭示差異表達、...

蛋白質(zhì)測序 Q＆A2025/6/24

Q1:蛋白質(zhì)測序需要保持蛋白活性嗎？A1:不需要。蛋白質(zhì)測序關(guān)注的是氨基酸序列信息，而非蛋白的生物學(xué)功能。因此，無論采用Edman降解法還是質(zhì)譜法，測序過程中蛋白是否具有活性都不會影響序列結(jié)果。實際上...

Pull-down靶蛋白質(zhì)譜鑒定的原理2025/6/11

Pull-down靶蛋白質(zhì)譜鑒定是一種基于親和純化-質(zhì)譜聯(lián)用的技術(shù)，主要用于研究蛋白質(zhì)相互作用（如蛋白-蛋白、蛋白-小分子、蛋白-核酸等）。其核心原理是通過特異性標(biāo)簽捕獲“誘餌”分子，分離與其直接或間...

泛素化定量蛋白組學(xué)研究的具體步驟2025/6/4

泛素化定量蛋白組學(xué)研究旨在系統(tǒng)性分析蛋白質(zhì)翻譯后修飾（泛素化）的動態(tài)變化，其核心步驟包括樣品制備、泛素化肽段富集、質(zhì)譜檢測、定量分析與生物信息學(xué)驗證。以下是詳細技術(shù)流程及關(guān)鍵要點：一、實驗設(shè)計階段樣本...

蛋白質(zhì)相互作用質(zhì)譜分析2025/5/31

蛋白質(zhì)相互作用質(zhì)譜分析是研究蛋白質(zhì)間相互作用網(wǎng)絡(luò)的重要技術(shù)，廣泛應(yīng)用于疾病機制、信號通路解析和藥物靶點發(fā)現(xiàn)等領(lǐng)域。以下是其核心內(nèi)容和關(guān)鍵步驟的整理：1.基本原理目標(biāo)：通過質(zhì)譜技術(shù)鑒定與目標(biāo)蛋白（bai...

翻譯后修飾的全面分析2025/5/28

在生命活動中，蛋白質(zhì)翻譯后修飾（PTMs）是調(diào)控蛋白功能、穩(wěn)定性、定位及相互作用的關(guān)鍵機制，廣泛參與細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、代謝調(diào)控、免疫應(yīng)答、細胞周期與疾病發(fā)生發(fā)展等多個生命活動環(huán)節(jié)。隨著組學(xué)技術(shù)的發(fā)展，研究...

蛋白質(zhì)翻譯后修飾概覽2025/5/28

盡管蛋白質(zhì)組學(xué)已為我們提供了細胞中蛋白表達的全景圖譜，但僅有蛋白表達量信息，遠不足以解釋生命系統(tǒng)的動態(tài)調(diào)控行為。蛋白質(zhì)的功能狀態(tài)，并不簡單由其表達水平所決定，而是高度依賴于翻譯后所發(fā)生的共價修飾事件，...

蛋白質(zhì)乳酸化：原理、機制與檢測2025/5/28

蛋白質(zhì)乳酸化的發(fā)現(xiàn)長期以來，乳酸（lactate）被視為細胞代謝中的“廢棄物”。在經(jīng)典代謝路徑中，細胞在缺氧或高強度代謝狀態(tài)下會啟動糖酵解，快速將葡萄糖轉(zhuǎn)化為丙酮酸。由于缺乏氧氣，丙酮酸無法進入線粒體...

埃德曼降解測序的原理、優(yōu)勢和不足2025/5/27

埃德曼測序的原理埃德曼降解法測序（Edmandegradationsequencing）誕生于二十世紀(jì)五十年代，是由瑞典化學(xué)家PehrEdman提出并不斷完善的一種經(jīng)典蛋白質(zhì)N端序列分析技術(shù)。該方法利...

蛋白質(zhì)組學(xué)分析的主要內(nèi)容和方法2025/5/27

蛋白質(zhì)組學(xué)分析的主要內(nèi)容和方法蛋白質(zhì)組學(xué)（Proteomics）是研究生物體內(nèi)所有蛋白質(zhì)的組成、結(jié)構(gòu)、功能及其動態(tài)變化的學(xué)科，其核心目標(biāo)是從整體層面解析蛋白質(zhì)的表達、修飾、相互作用及調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。以下是蛋...

蛋白質(zhì)糖基化分析Q＆A2025/5/21

Q1:蛋白質(zhì)糖基化分析的常用方法有哪些？A1:核心方法包括：1、色譜分析（Chromatography）色譜法可根據(jù)糖鏈或糖蛋白的理化特性進行有效分離。在糖基化分析中，常用的液相色譜技術(shù)（如HILIC...

磷酸化Q＆A2025/5/20

Q1:如何選擇磷酸化位點檢測的最佳方法？A1:常規(guī)檢測推薦Westernblot（WB），適用于已知位點的快速驗證。若需高通量檢測或未知位點鑒定，質(zhì)譜法（如TiO2富集結(jié)合LC-MS/MS）是shǒu...