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生物反應(yīng)器培養(yǎng)和搖瓶培養(yǎng)的區(qū)別2023/02/07: 生物反應(yīng)器培養(yǎng)和搖瓶培養(yǎng)的區(qū)別使用搖瓶在二氧化碳培養(yǎng)箱進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，是細(xì)胞培養(yǎng)的基本方法。隨著現(xiàn)代生物科學(xué)研究發(fā)展進(jìn)步，使用生物反應(yīng)器進(jìn)行商業(yè)化生產(chǎn)也變得越來越普遍，生物反應(yīng)器的應(yīng)用逐漸滿足小規(guī)模半生產(chǎn)能力的需求。同樣是進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，什么情況下使用搖瓶培養(yǎng)？什么情況下使用生物反應(yīng)器培養(yǎng)呢？與搖瓶培養(yǎng)相比生物反應(yīng)器有哪些優(yōu)勢呢？下面小編就總結(jié)一下從搖瓶轉(zhuǎn)向生物反應(yīng)器培養(yǎng)的5個理由：一、生物反應(yīng)器培養(yǎng)可獲得更高的收益率這是從搖瓶轉(zhuǎn)向生物反應(yīng)器的主要原因之一—您通常可以在更短的時間內(nèi)獲得更多目的產(chǎn)物。

超凈工作臺和生物安全柜的區(qū)別2023/02/06: 很多從業(yè)者對超凈工作臺和生物安全柜之間的區(qū)別不了解，認(rèn)為這兩者用途差不多。其實這是有很多誤區(qū)的，超凈工作臺和生物安全柜還是有很多區(qū)別的，首先我們從原理上對兩者之間進(jìn)行一個定義。原理超凈工作臺的工作原理是將通過高效過濾器的凈化空氣向下吹或水平過工作區(qū)，用來保護(hù)樣本，由于工作區(qū)是正壓區(qū)，氣流通過操作窗口外溢，只保護(hù)樣本，而對操作人員和環(huán)境不提供保護(hù)，如果操作含有任何已知或潛在致病氣溶膠，都會給操作人員帶來極大隱患。生物安全柜是一種負(fù)壓凈化工作臺，可以防止操作者和環(huán)境暴露于實驗室過程中產(chǎn)生的有害氣溶膠

核酸提取試劑盒的工作原理2023/02/06: 核酸提取試劑盒的工作原理子生物學(xué)實驗中qPCR、分子克隆、下一代測序等都需要進(jìn)行DNA提取。如今，大多數(shù)實驗室都使用商業(yè)DNA提取試劑盒，這些試劑盒使用硅膠自旋過濾法來獲得高質(zhì)量的DNA。這些可以快速有效地純化DNA（或RNA），在這里需要先了解一下DNA提取試劑盒的工作原理。核酸提取試劑盒的工作原理離心柱包含一種硅膠樹脂，可根據(jù)鹽條件和受提取方法影響的其他因素選擇性地結(jié)合DNA和RNA。這些DNA提取試劑盒使整個過程比舊的DNA分離方法更容易、更快。但是，使用套件的缺點是，如果您不了解套件的黑

DNA 提取實驗中的常見問題解析2023/02/06: 分子生物中RNA和DNA提取會常常遇到一些問題，下面小編就RNA和DNA提取實驗中的通常遇到的幾個問題進(jìn)行解析。1.提取產(chǎn)量低如果您遇到的DNA/RNA產(chǎn)量低于您對樣品的預(yù)期，則需要考慮許多因素。通常，這是一個裂解問題。未裂解是產(chǎn)量低的主要原因。它也可能是由不正確的綁定條件引起的。確保使用新鮮的優(yōu)質(zhì)乙醇（100%200標(biāo)準(zhǔn)）稀釋緩沖液或添加到結(jié)合的步驟。劣質(zhì)乙醇或舊庫存可能已經(jīng)吸收了水分，并且濃度不正確。如果洗滌緩沖液制備不正確，您可能正在洗掉提取的DNA或RNA。2.提取低純度如果提取的DNA

生物實驗室操作技術(shù)規(guī)范2023/02/06: 病原微生物實驗操作規(guī)范病原微生物接種的操作規(guī)范：做到以下4點能較大限度地減少接種時氣溶膠的產(chǎn)生。1.打開菌種管時，將安瓿管頸部燒熱，用冷的濕棉球使之突然破裂，才可以大大減小溶膠的產(chǎn)生。2.劃板時，瓊脂平板要選用表面光滑的；接種環(huán)應(yīng)用彈性小的金屬絲制作，絲桿要短，環(huán)不宜過大，劃板動作要輕。3.接完種后，蘸有菌液的接種環(huán)應(yīng)在含有消毒液的毛巾上吸干后再放到火焰上灼燒到紅。4.混勻微生物懸液的時候，旋轉(zhuǎn)式搖動，不能左右搖動；搖動時動作輕柔不要使懸液弄濕試管塞。生物樣本移液操作規(guī)范生物樣品的移液操作規(guī)范：

生命科學(xué)研究中常用的幾種實驗方法2023/02/06: 生命科學(xué)研究時生物學(xué)的分支，下面介紹幾個關(guān)于生命科學(xué)常用的幾種實驗方法：一、BCA法測蛋白質(zhì)濃度實驗原理：BCA(bicinchoninicacid，二辛可酸)法測定蛋白質(zhì)即在堿性條件下蛋白質(zhì)與Cu2+絡(luò)合，并將其還原成Cu1+。Cu1+和BCA試劑反應(yīng)使其由原來的蘋果綠形成穩(wěn)定的紫藍(lán)色復(fù)合物，在562nm有強(qiáng)烈的光吸收，且吸光值和蛋白質(zhì)濃度在廣泛范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系，因此可用于蛋白質(zhì)濃度測定。二、免疫組化原理:免疫組織化學(xué)，即免疫組化，是應(yīng)用免疫學(xué)基本原理一-抗原抗體反應(yīng)，即抗原與抗體特異性

CCK-8法進(jìn)行細(xì)胞毒性檢測的方法2023/02/03: CCK-8法進(jìn)行細(xì)胞毒性檢測的方法CCK-8法是細(xì)胞活力和細(xì)胞毒性檢測常用的一種檢測方法，其具體操作方法如下：1.制備細(xì)胞懸液：選取生長狀態(tài)良好的對數(shù)生長期細(xì)胞制作細(xì)胞懸液，并計數(shù)。2.在96孔板中接種細(xì)胞懸液(100μL/孔)。3.將培養(yǎng)板置于培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)（37℃，5%CO2）12-24小時，使細(xì)胞達(dá)到指數(shù)期（培養(yǎng)時間根據(jù)細(xì)胞種類的不同和每孔內(nèi)細(xì)胞數(shù)量的多少而異）。4.吸出各孔培養(yǎng)基，向培養(yǎng)板加入10μL不同濃度的待測藥物進(jìn)行干預(yù)。（實驗組加入含不同濃度藥物的培養(yǎng)基，空白組加入不含藥物培養(yǎng)基

實時熒光定量 PCR技術(shù)2023/02/03: 實時熒光定量PCR，簡稱RT-QPCR,屬于Q-PCR的一種，目前該技術(shù)已得到廣泛應(yīng)用，如：擴(kuò)增特異性分析、基因定量分析、基因分型、SNP分析等。熒光定量PCR常用的方法是DNA結(jié)合染料SYBRGreenⅠ的非特異性方法和Taqman水解探針的特異性方法。SYBRGreenI是一種結(jié)合于所有dsDNA雙螺旋小溝區(qū)域的具有綠色激發(fā)波長的熒光染料，可與所有的各種序列的雙鏈DNA分子結(jié)合。在游離狀態(tài)下，SYBRGreenI發(fā)出微弱的熒光，但一旦與雙鏈DNA結(jié)合，嵌入至dsDNA，熒光大大增強(qiáng)。因此，S

如何選擇合適的細(xì)胞凋亡試劑盒2023/02/03: 細(xì)胞調(diào)亡是細(xì)胞主動死亡的過程，并出現(xiàn)一系列特征變化。包括核固縮、核碎裂、凋亡小體形成，以及DNA特征性片段化、新的基因表達(dá)和特定的生物大分子合成等。流式細(xì)胞儀可以對不同細(xì)胞凋亡的過程進(jìn)行定性和定量檢測，通過檢測細(xì)胞膜完整性來反應(yīng)細(xì)胞凋亡是常用的流式檢測細(xì)胞凋亡常用方法之一。其原理是：①用AnnexinV檢測早期凋亡細(xì)胞：AnnexinV可以結(jié)合細(xì)胞膜上的磷酯酰絲氨酸，磷酯酰絲氨酸位于正常細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)，不會被檢測到，凋亡時外翻到細(xì)胞膜外表面，可以被檢測到。②用PI或者7AAD檢測晚期凋亡細(xì)胞：早期凋

CCK-8細(xì)胞活性檢測實驗步驟2023/02/03: CCK-8細(xì)胞活性檢測實驗步驟CCK-8實驗可用于細(xì)胞因子等誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖檢測，也可以用于抗癌藥物等對細(xì)胞有毒試劑誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性檢測，或一些藥物誘導(dǎo)的細(xì)胞生長抑制檢測。使用酶標(biāo)儀在450nm波長處測OD值，可間接性反應(yīng)活細(xì)胞的數(shù)量。使用CCK-8試劑盒進(jìn)行細(xì)胞活性檢測是一種高靈敏度，無放射性的比色檢測法。CCK-8細(xì)胞活性檢測實驗步驟：一、實驗前準(zhǔn)備：酒精燈、移液槍、酶標(biāo)儀（帶有450nm濾光片）、96孔培養(yǎng)板、CO2培養(yǎng)箱、CCK-8、細(xì)胞計數(shù)板、PBS等。二、繪制曲線1.制備細(xì)胞懸液：選取生

CHO細(xì)胞外泌體的分離和表征2023/02/03: CHO細(xì)胞外泌體的分離和表征CHO細(xì)胞是一種廣泛用于生物制藥蛋白質(zhì)生產(chǎn)的宿主。CHO細(xì)胞中分離外泌體主要采用聚合物的沉淀(PBP)技術(shù)從分批培養(yǎng)中分離和富集細(xì)胞外泌體囊泡。分離后的外泌體可以通過多種方法來檢測和表征分離的囊泡，這些分析包括動態(tài)光散射(DLS)和Zeta電位測量、電子顯微鏡(EM)和外泌體標(biāo)記物分析、RNA和脂質(zhì)分析等。一、細(xì)胞培養(yǎng)1.培養(yǎng)基與細(xì)胞細(xì)胞可使用CHO系中的CHO-S細(xì)胞。培養(yǎng)基使用CD-CHO培養(yǎng)基（ThermoFisher）。在培養(yǎng)基中添加8mML-谷氨酰胺利于CH

如何選購合適的PCR耗材2023/02/02: 如何選購合適的PCR耗材PCR耗材包括PCR管(EP管）、8連排管、96孔PCR板、深孔板等這些材質(zhì)一般為聚丙烯PP材質(zhì)，具有高品質(zhì)、高純度、高透明的特點，一般都在潔凈空間生產(chǎn)加工。PCR耗材為什么一般都是PP材質(zhì)的呢，為什么需要環(huán)境潔凈？因為PCR/qPCR耗材通常會與試劑或樣品直接接觸，而聚丙烯（PP）材質(zhì)是生物學(xué)惰性材料，表面不易于粘附生物分子，且有著良好的化學(xué)耐性，及溫度耐受性（可以121℃高壓滅菌，也可以承受熱循環(huán)過程中的溫度變化）。這里強(qiáng)調(diào)一下耗材質(zhì)量（是否干凈）的重要性。PCR耗材

實時定量PCR技術(shù)中常見問題匯總2023/02/02: 實時定量PCR技術(shù)中常見問題匯總實時定量PCR技術(shù)（real-timePCR）也叫qPCR（QuantitavePCR），是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號累積實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，最后通過特定數(shù)學(xué)原理對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。它是一項臨床上非常成熟的技術(shù)，目前在分子生物學(xué)領(lǐng)域，qPCR核酸定量的主要方法。目前仍在全球肆虐的病毒鑒定的“金標(biāo)準(zhǔn)”——核酸檢測就是通過qPCR原理進(jìn)行的。那么拿到一個樣本，需要經(jīng)過以下多項操作流程才能定量檢測到它的核酸含量。其中任何一個步驟操作失誤

使用生物反應(yīng)器研究乳腺癌亞型細(xì)胞外囊泡產(chǎn)生技術(shù)2023/02/02: 使用生物反應(yīng)器研究乳腺癌亞型細(xì)胞外囊泡產(chǎn)生技術(shù)使用傳統(tǒng)體外方法生產(chǎn)的EV的深入表征和驗證由于需要大面積的細(xì)胞單層和大量的培養(yǎng)基，培養(yǎng)可能具有挑戰(zhàn)性。該實驗方法使用貼壁細(xì)胞生物反應(yīng)器系統(tǒng)以節(jié)省空間、資源和時間的方式同時培養(yǎng)多種不同亞型的乳腺癌細(xì)胞系，從而能夠持續(xù)生產(chǎn)大量用于下游實驗的EV。一、生物反應(yīng)器接種、適應(yīng)和維護(hù)培養(yǎng)基A：含有10%胎牛血清（FBS，Merck）和1%青霉素/鏈霉素（PS，Gibco）的DMEM（Gibco）。培養(yǎng)基B：AdvancedDMEM/F-12(Gibco)、2%C

細(xì)胞培養(yǎng)常見問題匯總2023/02/02: 細(xì)胞培養(yǎng)常見問題匯總1冷凍管應(yīng)如何解凍？取出冷凍管后，須立即放入37C水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1分鐘內(nèi)全部融化，并注意水面不可超過冷凍管蓋沿，否則易發(fā)生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時，必須注意安全，預(yù)防冷凍管之爆裂。2細(xì)胞冷凍管解凍培養(yǎng)時，是否應(yīng)馬上去除DMSO？除少數(shù)特別注明對DMSO敏感之細(xì)胞外，絕大部分細(xì)胞株（包括懸浮性細(xì)胞），在解凍之后，應(yīng)直接放入含有10-15ml新鮮培養(yǎng)基之培養(yǎng)角瓶中，待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除DMSO即可，如此可避免大部分解凍后細(xì)胞無法生長或貼附之

層析工藝放大需要遵循的原則2023/02/01: 層析工藝放大原則包括線性放大原則和固定保留時間原則。線性放大原則線性放大原則是工藝放大過程中常用的原則，其核心思路是保持層析柱柱高和線性流速不變，只放大層析柱直徑和體積流速。固定的柱高和線性流速理論上可以保證相同的保留時間、層析中溶液用到的CV數(shù)和洗脫樣品CV數(shù)，較大程度保證相同的純化效果。線性放大原則的具體操作方法可參見下表：層析工藝在實際的應(yīng)用過程中，線性放大可能會遇到幾個問題，一是層析設(shè)備供應(yīng)商提供的層析柱都是幾個固定規(guī)格，可能無法適配具體某項的工藝需求；二是當(dāng)層析柱直徑超過30cm時，由

熒光定量PCR實驗中PCR儀器選購技巧2023/01/31: 聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)是無數(shù)研究和測試實驗室的主要技術(shù)，涉及的領(lǐng)域包括生物醫(yī)學(xué)、基因編輯、食品微生物學(xué)測試等。熒光定量PCR技術(shù)使用熱循環(huán)來促進(jìn)一系列反應(yīng)，在這些反應(yīng)中，DNA樣本會快速、呈指數(shù)地復(fù)制，從而產(chǎn)生數(shù)百萬或數(shù)十億個序列拷貝。購買PCR儀器時，重要的是要考慮您的應(yīng)用的最終目標(biāo)、熱循環(huán)設(shè)備的準(zhǔn)確性和效率以及儀器的容量和靈活性。本文概述了PCR儀器可用的不同選項和功能，以幫助您選購合適的PCR儀。1.PCR與qPCR與dPCR雖然所有PCR系統(tǒng)都使用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)復(fù)制DNA，但不同的系

應(yīng)用差速離心法分離外泌體的原理2023/01/31: 外泌體是一種小的(40-100nm)細(xì)胞外膜囊泡，目前進(jìn)行外泌體分離的普遍方法是差速離心法。應(yīng)用差速離心法和粒徑分析等是細(xì)胞外囊泡(EV)研究的重要步驟。已知細(xì)胞會分泌許多膜囊泡，這些囊泡的大小、分子含量及其形成機(jī)制各不相同具體取決于細(xì)胞的類型和當(dāng)前狀態(tài)。通?？梢员鎰e出三個主要的EV群體：凋亡小體、脫落的囊泡和外泌體.凋亡小體是已知較大的囊泡，直徑為800-5000nm，由凋亡后細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)和質(zhì)膜成分組成。脫落的囊泡和外泌體由非凋亡細(xì)胞釋放。脫落的囊泡，也稱為“胞外體”或有時稱為“微泡”，是由質(zhì)

影響細(xì)胞培養(yǎng)的環(huán)境因素有哪些2023/01/31: 細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境主要通過CO2培養(yǎng)箱、震蕩培養(yǎng)箱（即溫度、濕度、O2和CO2張力）和基礎(chǔ)細(xì)胞培養(yǎng)基及其補(bǔ)充劑來實現(xiàn)。這不僅包括碳水化合物、維生素、氨基酸、礦物質(zhì)、生長因子、激素等營養(yǎng)素的供應(yīng)，還包括控制培養(yǎng)物pH值和細(xì)胞滲透壓等理化特性的成分。此外，固體或半固體生長基質(zhì)和細(xì)胞密度分別允許細(xì)胞-基質(zhì)錨定和細(xì)胞-細(xì)胞相互作用，這進(jìn)一步控制了生理相關(guān)微環(huán)境的模擬。為滿足特定細(xì)胞類型的要求，市場上已有多種細(xì)胞培養(yǎng)基組合物，并且可以根據(jù)它們補(bǔ)充血清的水平進(jìn)行分類。胎牛血清(FBS)形式的血清通常會添加到已經(jīng)含

外泌體制造需要哪些實驗室設(shè)備2023/01/31: 外泌體是蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和核酸的天然載體，在細(xì)胞間通訊中起著至關(guān)重要的作用。外泌體包含各種膜蛋白，例如內(nèi)體相關(guān)蛋白（Alix、Tsg101和Rab蛋白）、四跨膜蛋白（CD63、CD81、CD82、CD53和CD37）和脂筏相關(guān)蛋白（糖基磷脂酰肌醇和flotillin）。隨著近年來生物技術(shù)、實驗室設(shè)備的不斷發(fā)展，外泌體有著廣泛的應(yīng)用前景，包括藥物發(fā)現(xiàn)、配體篩選和靶向藥物遞送。進(jìn)而即用型、高質(zhì)量的功能性外泌體的需求也越來越顯明，這種工業(yè)外泌體生產(chǎn)需要通過大規(guī)模外泌體制備和純化來實現(xiàn)。外泌體制備過程主要分

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