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當(dāng)前位置：蘇州阿爾法生物實(shí)驗(yàn)器材有限公司>>技術(shù)文章

凝膠電泳的染色方法2023/03/01: 凝膠電泳是研究蛋白質(zhì)性質(zhì)的一種相對(duì)簡(jiǎn)單、快速和高靈敏度的工具。它是分析化學(xué)、生物化學(xué)和分子生物學(xué)的主要工具。通過電泳分離蛋白質(zhì)是基于這樣一個(gè)事實(shí)，即帶電分子將在施加電場(chǎng)時(shí)通過基質(zhì)遷移。蛋白質(zhì)電泳分離的基質(zhì)是聚丙烯酰胺。用于形成聚丙烯酰胺的化學(xué)試劑是單體丙烯酰胺和N，N'-雙丙烯酰胺（雙-丙烯酰胺）。聚合丙烯酰胺和雙丙烯酰的方法是使用TEMED（四*基乙二胺）和過硫酸銨。聚丙烯酰胺凝膠內(nèi)部的聚合形成了一個(gè)交聯(lián)的微孔網(wǎng)絡(luò)。這種孔隙網(wǎng)絡(luò)允許小蛋白質(zhì)分子快速通過，同時(shí)減緩較大蛋白質(zhì)的遷移，這導(dǎo)致蛋白質(zhì)基

Vero細(xì)胞無血清懸浮培養(yǎng)技術(shù)驗(yàn)證2023/03/01: 大多數(shù)用于抗體生產(chǎn)的細(xì)胞主要基于動(dòng)物細(xì)胞上的開發(fā)，如MRC-5人二倍體細(xì)胞、Vero猿猴腎上皮細(xì)胞、Madin-Darby犬腎(MDCK)細(xì)胞和雞胚成纖維細(xì)胞。尤其是來自非洲綠猴腎臟的Vero細(xì)胞已被廣泛用于vaccine生產(chǎn)，因?yàn)樗鼈儽籛HO機(jī)構(gòu)證明沒有致癌潛力。許多vaccine，例如針對(duì)基孔肯雅熱、登革熱、日本腦炎、病毒性胃腸炎、脊髓灰質(zhì)炎、狂犬病、羅斯河熱、嚴(yán)重急性呼吸系統(tǒng)綜合癥、天花、西尼羅河腦炎和流感的vaccine都是使用Vero細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)開發(fā)的。用于virusvaccine生產(chǎn)

一文了解細(xì)菌內(nèi)毒素2023/02/28: 內(nèi)毒素(Endotoxin)是一種脂多糖(LPS)，來源于革蘭氏陰性細(xì)菌外膜，其細(xì)胞壁外膜的外部脂質(zhì)成分由內(nèi)毒素分子組成，細(xì)胞死亡或分解后被釋放出來。LPS具有三個(gè)結(jié)構(gòu)，由菌體特異性多糖、非特異性核心多糖和脂質(zhì)A三部分構(gòu)成。內(nèi)毒素單體分子量為10kDa左右，在不同成分水溶液中，可形成大分子聚集體，大的可超過1000kDa。類脂A是內(nèi)毒素多種生物活性或毒性反應(yīng)的主要基團(tuán)。該基團(tuán)沒有種屬特異性,所以各屬細(xì)菌的類脂A結(jié)構(gòu)相似,其毒性反應(yīng)相似，如發(fā)熱、血液流動(dòng)力學(xué)改變、彌漫性血管內(nèi)凝血,并導(dǎo)致休克等。O

細(xì)胞支原體污染的原因有哪些2023/02/28: 細(xì)胞支原體污染的原因?qū)τ谏飳?shí)驗(yàn)器材細(xì)胞培養(yǎng)來說，如何預(yù)防細(xì)胞的支原體污染是每一個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)者的都會(huì)考慮的問題，據(jù)統(tǒng)計(jì)，在細(xì)胞污染原因分析中有超過60%的細(xì)胞培養(yǎng)物污染都是由支原體所引起的。那么細(xì)胞支原體污染的原因有哪些呢？細(xì)胞支原體污染的原因主要包括：1.不良操作：如操作者未穿實(shí)驗(yàn)服、未戴口罩、未熏蒸操作臺(tái)等，容易引起污染。支原體一般通過難以追蹤的各種來源進(jìn)入細(xì)胞培養(yǎng)物。其中包括實(shí)驗(yàn)室人員、血清、細(xì)胞培養(yǎng)基、水浴鍋、振蕩培養(yǎng)箱、生物反應(yīng)器、細(xì)胞培養(yǎng)瓶等。人為污染是上述污染源中最大的污染源。污染物

細(xì)胞支原體污染怎么處理2023/02/28: 用肉眼或光學(xué)顯微鏡檢測(cè)支原體比較困難，所以支原體檢測(cè)一般會(huì)通過PCR的檢測(cè)、DNA染色、熒光標(biāo)記、瓊脂平板接種等方法來實(shí)現(xiàn)。在支原體檢測(cè)之前，細(xì)胞應(yīng)連續(xù)培養(yǎng)至少兩周，以便有時(shí)間讓低水平的污染物生長(zhǎng)。對(duì)于測(cè)試，在取樣前至少兩三天內(nèi)不應(yīng)更換培養(yǎng)基。一、培養(yǎng)法在瓊脂平板/肉湯上培養(yǎng)被認(rèn)為是檢測(cè)支原體的“金標(biāo)準(zhǔn)”。在這種方法中，將細(xì)胞培養(yǎng)物的上清液添加到液體或半固體培養(yǎng)基（含有支原體生長(zhǎng)所必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)）中。受感染的細(xì)胞培養(yǎng)物會(huì)在液體肉湯和瓊脂平板上生長(zhǎng)。瓊脂平板上很容易看到支原體菌落。這種方法能夠檢測(cè)

細(xì)胞培養(yǎng)試劑選購(gòu)指南2023/02/28: 細(xì)胞生物學(xué)研究、創(chuàng)新藥開發(fā)等領(lǐng)域經(jīng)常會(huì)進(jìn)行細(xì)胞體外培養(yǎng)，但是很多實(shí)驗(yàn)員不知道該怎么選購(gòu)細(xì)胞、細(xì)胞培養(yǎng)基、細(xì)胞培養(yǎng)試劑，本節(jié)小編帶你初步了解一下細(xì)胞系的選擇技巧、購(gòu)買細(xì)胞培養(yǎng)基應(yīng)考慮的因素。一、細(xì)胞培養(yǎng)的環(huán)境條件細(xì)胞的體外培養(yǎng)需要為細(xì)胞創(chuàng)造良好的細(xì)胞的存活和增殖環(huán)境，這樣的環(huán)境條件包括培養(yǎng)溫度、濕度和CO2水平、營(yíng)養(yǎng)成分、酸堿度、滲透壓等。下表為大多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)的適宜條件。酸堿度7.0–7.4滲透壓280–320mmol/千克二氧化碳_5–10%溫度35–37°C二、細(xì)胞系購(gòu)買時(shí)應(yīng)考慮

貼壁細(xì)胞傳代培養(yǎng)的基本步驟2023/02/28: 我們知道開始培養(yǎng)的細(xì)胞不能無限期地生長(zhǎng)，因?yàn)槭芟迏^(qū)域內(nèi)的細(xì)胞數(shù)量不斷增加，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)也會(huì)被消耗，從而導(dǎo)致有毒的代謝產(chǎn)物增加，另外根據(jù)實(shí)驗(yàn)或生產(chǎn)需要，也要對(duì)細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)。通過去除培養(yǎng)基并將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到新鮮的生長(zhǎng)培養(yǎng)基和基質(zhì)中，細(xì)胞獲得了新鮮的營(yíng)養(yǎng)并去除了有毒代謝物，從而可以長(zhǎng)期維持培養(yǎng)。這個(gè)過程就屬于傳代培養(yǎng)，傳代培養(yǎng)的細(xì)胞密度會(huì)低于原始培養(yǎng)物中的細(xì)胞密度。當(dāng)接種細(xì)胞后，細(xì)胞生長(zhǎng)會(huì)經(jīng)過滯后期、對(duì)數(shù)期，穩(wěn)定期和凋亡期。在凋亡期，細(xì)胞會(huì)因缺乏營(yíng)養(yǎng)或培養(yǎng)條件不當(dāng)而死亡。貼壁細(xì)胞傳代培養(yǎng)步驟如下：一、細(xì)胞

生物安全柜內(nèi)HEPA 和 ULPA 過濾器的區(qū)別2023/02/27: 過濾器是生物安全柜的重要組成部分。了解過濾器的工作原理、維護(hù)級(jí)別以及過濾器需要多久更換一次，這些都是購(gòu)買生物安全柜時(shí)需要考慮的因素。那么生物安全柜中的HEPA和ULPA過濾器有什么區(qū)別呢？生物安全柜中使用的過濾器，一般為高效微粒空氣(HEPA)過濾器和超低滲透(ULPA)過濾器，HEPA和ULPA過濾器有什么區(qū)別呢？HEPA和ULPA過濾器的結(jié)構(gòu)及其工作原理從結(jié)構(gòu)和化學(xué)角度來說，HEPA和ULPA過濾器非常相似。這些過濾器用于生物安全柜，其中氣流（由電機(jī)驅(qū)動(dòng)）攜帶有害氣體和顆粒物。兩種類型的過濾

國(guó)產(chǎn)PCR儀購(gòu)買時(shí)的注意事項(xiàng)2023/02/21: 國(guó)產(chǎn)PCR儀購(gòu)買時(shí)的注意事項(xiàng)PCR儀作為分子生物學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)的常規(guī)儀器，每年都有數(shù)千臺(tái)的選購(gòu)量，這兩年一批國(guó)產(chǎn)PCR儀正在興起。購(gòu)買國(guó)產(chǎn)PCR儀需要考慮以下因素1樣本管的種類現(xiàn)在主要有0.2ml和0.5ml兩種，使用0.5mlPCR管的人員已經(jīng)很少了，一是0.5mlPCR專用的薄壁管很少見，二是如果想要較大體積的PCR產(chǎn)物，可以通過多分幾個(gè)0.2mlPCR管來實(shí)現(xiàn)。除非經(jīng)常需要較大體積的PCR產(chǎn)物，否則可以不必考慮0.5ml型的PCR儀。2樣本容量種類很多，0.2ml的有96孔和48孔，0.5ml

瓊脂糖凝膠電泳時(shí)注意事項(xiàng)2023/02/21: 瓊脂糖凝膠電泳分子生物學(xué)常用的實(shí)驗(yàn)方法，那么在凝膠電泳過程中需要注意哪些事項(xiàng)呢？一、切膠時(shí)的注意事項(xiàng)1.盡量保證電泳的buffer和gel都是新制的，切膠的臺(tái)子清理干凈，刀片也要洗凈，確保切下的沒有外源dna污染。2.為了減少膠的體積，可以用相對(duì)比較薄的膠來做，只要夠點(diǎn)樣即可，也可采用薄而寬的梳子來跑膠。3.關(guān)于防護(hù)，戴一般有機(jī)玻璃眼罩就足夠了，戴上防護(hù)面具也以保護(hù)眼睛，如果戴樹脂眼鏡就可以了。要是非常害怕紫外照射，或者對(duì)于膠有特殊要求，例如要求不含EB，可以采用點(diǎn)marker和帶刻度的尺子一起

HEK293細(xì)胞的特點(diǎn)與應(yīng)用2023/02/21: HEK293細(xì)胞的特點(diǎn)和應(yīng)用人胚腎293(HEK293)細(xì)胞是生物技術(shù)和研究中常用的細(xì)胞系之一。由于HEK293細(xì)胞具有較高的生長(zhǎng)效率，通常生成用于生物醫(yī)學(xué)和藥物研究的外源性蛋白質(zhì)。HEK293細(xì)胞也會(huì)被用于各種轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)中。HEK293細(xì)胞起源和背景人胚腎293細(xì)胞AlexVanderEb在1970年代時(shí)培養(yǎng)出了HEK293細(xì)胞系。為了產(chǎn)生永生化細(xì)胞系，Graham將5型腺病毒的DNA轉(zhuǎn)染到HEK細(xì)胞的人類19號(hào)染色體中。Ad5整合到細(xì)胞基因組中導(dǎo)致細(xì)胞凋亡的預(yù)防，從而導(dǎo)致細(xì)胞系的連續(xù)產(chǎn)生。在獲

購(gòu)買細(xì)胞常見問題匯總2023/02/16: 購(gòu)買細(xì)胞常見問題匯總購(gòu)買細(xì)胞收到細(xì)胞前，應(yīng)做哪些準(zhǔn)備工作？購(gòu)買細(xì)胞應(yīng)具有一定細(xì)胞培養(yǎng)知識(shí)與經(jīng)驗(yàn)，并具備基本實(shí)驗(yàn)設(shè)備，如細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室、超凈工作臺(tái)、CO2培養(yǎng)箱，倒置顯微鏡等；還應(yīng)準(zhǔn)備好相應(yīng)的細(xì)胞無菌培養(yǎng)基、血清、雙抗、細(xì)胞培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)板、移液管等。購(gòu)買的細(xì)胞收到細(xì)胞后，應(yīng)該怎么操作？1.觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請(qǐng)及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系；2.用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)，隔天

降低CHO細(xì)胞培養(yǎng)中的乳酸水平的解決方案2023/02/16: 乳酸是CHO細(xì)胞補(bǔ)料分批培養(yǎng)的主要副產(chǎn)品之一。在pH控制的生物反應(yīng)器中，由于添加堿以控制細(xì)胞培養(yǎng)基的pH值，高水平乳酸的積累伴隨著高滲透壓，可能導(dǎo)致制造細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢，甚至大量凋亡，同時(shí)產(chǎn)生抗體蛋白的產(chǎn)量也降低不少。而乳酸脫氫酶(LDH)是一種催化底物丙酮酸轉(zhuǎn)化為乳酸的酶，包括丙酮酸濃度在內(nèi)的許多因素都會(huì)調(diào)節(jié)LDH活性。乳酸脫氫酶對(duì)代謝產(chǎn)物的影響在一項(xiàng)研究中，科學(xué)家們?cè)鴩L試敲低乳酸脫氫酶A(LDHa)和PDHK的基因表達(dá)，以研究對(duì)乳酸代謝和蛋白質(zhì)生產(chǎn)的影響。他們發(fā)現(xiàn)，使用攜帶LDHa和PDHK的小

DNA克隆技術(shù)概述2023/02/16: 當(dāng)您聽到“克隆”一詞時(shí)，您可能會(huì)想到克隆整個(gè)生物體，例如綿羊多利。然而，克隆某物的全部意思就是制作它的基因精確副本。在分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室中，常被克隆的是基因或其他小片段DNA稱為DNA克隆。DNA克隆技術(shù)概述DNA克隆技術(shù)其實(shí)就是基因編輯，是指制作特定DNA片段的多個(gè)相同副本的過程。在典型的DNA克隆過程中，通常會(huì)將目的的基因或其他DNA片段插入稱為質(zhì)粒的環(huán)狀DNA片段中。插入是使用“剪切和粘貼”DNA的酶完成的，它會(huì)產(chǎn)生一個(gè)重組DNA分子，或由多個(gè)來源的片段組裝而成的DNA。質(zhì)粒DNA的環(huán)狀片段

實(shí)驗(yàn)室儀器可以自校準(zhǔn)嗎？2023/02/15: 實(shí)驗(yàn)室移液槍、實(shí)驗(yàn)室天平、PH計(jì)等實(shí)驗(yàn)室儀器使用一段時(shí)間后，需要對(duì)其進(jìn)行校準(zhǔn)，那么實(shí)驗(yàn)室儀器可以自校準(zhǔn)嗎？小編帶你了解一下：內(nèi)部校準(zhǔn)與自校準(zhǔn)的區(qū)別“自校準(zhǔn)”一般是利用測(cè)量設(shè)備自帶的校準(zhǔn)程序或功能（比如智能儀器的開機(jī)自校準(zhǔn)程序）或設(shè)備廠商提供的沒有溯源證書的標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行的校準(zhǔn)活動(dòng)，通常情況下，其不是有效的量值溯源活動(dòng)，但特殊領(lǐng)域另有規(guī)定除外?！皟?nèi)部校準(zhǔn)”是指在實(shí)驗(yàn)室或其所在組織內(nèi)部實(shí)施的，使用自有的設(shè)施和測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)，校準(zhǔn)結(jié)果僅用于內(nèi)部需要，為實(shí)現(xiàn)獲認(rèn)可的檢測(cè)活動(dòng)相關(guān)的測(cè)量設(shè)備的量值溯源而實(shí)施的校準(zhǔn)。

DNA重組實(shí)驗(yàn)技術(shù)總結(jié)2023/02/15: DNA重組技術(shù)，是分子的生物學(xué)研究生需要掌握的實(shí)驗(yàn)技術(shù)之一，DNA重組實(shí)驗(yàn)方法總結(jié)如下：一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康捏w外連接獲得重組分子，用于轉(zhuǎn)化受體細(xì)胞。二、實(shí)驗(yàn)原理DNA重組技術(shù)是用內(nèi)切酶分別將載體和外源DNA切開，經(jīng)分離純化后，用連接酶將其連接，構(gòu)成新的DNA分子。外源DNA片段和質(zhì)粒載體的連接反應(yīng)策略有以下幾種：1、帶有非互補(bǔ)突出端的片段用兩種不同的限制性內(nèi)切酶進(jìn)行消化可以產(chǎn)生帶有非互補(bǔ)的粘性末端，這也是最容易克隆的DNA片段，一般情況下，常用質(zhì)粒載體均帶有多個(gè)不同限制酶的識(shí)別序列組成的多克隆位點(diǎn)，因而

PCR儀使用參數(shù)設(shè)定注意事項(xiàng)2023/02/15: PCR儀使用參數(shù)設(shè)定注意事項(xiàng)PCR儀使用參數(shù)設(shè)定不正確會(huì)影響到PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果，這主要表現(xiàn)在溫度、時(shí)間和循環(huán)次數(shù)上，如果溫度參數(shù)設(shè)置過高，延伸時(shí)間不夠都會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成影響，下面談?wù)勈褂肞CR儀參數(shù)設(shè)定時(shí)的注意事項(xiàng)：一、溫度和時(shí)間溫度與時(shí)間的設(shè)置：基于PCR原理三步驟而設(shè)置變性-退火-延伸三個(gè)溫度點(diǎn)。在標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)中采用三溫度點(diǎn)法，雙鏈DNA在90～95℃變性，再迅速冷卻至40～60℃，引物退火并結(jié)合到靶序列上，然后快速升溫至70～75℃，在TaqDNA聚合酶的作用下，使引物鏈沿模板延伸。對(duì)于較短靶基

一種通過改造CHO 細(xì)胞提升抗體產(chǎn)量的新技術(shù)2023/02/15: 丙酮酸羧化酶是細(xì)胞質(zhì)和線粒體代謝途徑的重要元素，可以有效促進(jìn)能量代謝。在CHO細(xì)胞中過表達(dá)酵母胞質(zhì)丙酮酸羧化酶(PYC2)，可以增加丙酮酸流向TCA循環(huán)。增強(qiáng)的PYC2表達(dá)導(dǎo)致丙酮酸通量增加，從而使乳酸積累減少多達(dá)4倍，并顯著增加細(xì)胞密度和培養(yǎng)壽命。有了這個(gè)結(jié)果，與親本細(xì)胞相比，工程細(xì)胞的抗體表達(dá)顯著提高了70%，產(chǎn)品質(zhì)量也有所提高（約3倍）。通過PYC2工程改造提升細(xì)胞性能，在丙酮酸、葡萄糖、乳酸和細(xì)胞能量代謝方面具有均高于親代細(xì)胞的各種優(yōu)勢(shì)。PYC2工程改造原理和方法在補(bǔ)料分批上游工藝中，產(chǎn)

核酸酶切反應(yīng)原理及注意事項(xiàng)2023/02/14: A載體和外源DNA的酶切一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)習(xí)和掌握核酸的酶切操作原理；通過酶切獲得可進(jìn)行體外重組的載體和外源DNA。二、實(shí)驗(yàn)原理限制性內(nèi)切酶能特異地結(jié)合于一段被稱為限制性酶識(shí)別序列的DNA序列之內(nèi)或其附近的特異位點(diǎn)上，并切割雙鏈DNA。絕大多數(shù)限制酶識(shí)別長(zhǎng)度為4至6個(gè)核苷酸的回文對(duì)稱特異核苷酸序列(如EcoRⅠ識(shí)別六個(gè)核苷酸序列：5'-G↓AATTC-3')，有少數(shù)酶識(shí)別更長(zhǎng)的序列或簡(jiǎn)并序列。Ⅱ類酶切割位點(diǎn)在識(shí)別序列中，有的在對(duì)稱軸處切割，產(chǎn)生平末端的DNA片段(如SmaⅠ:5'-CCC↓GGG-3

質(zhì)粒DNA的提取實(shí)驗(yàn)方法和步驟2023/02/14: 質(zhì)粒DNA的提取實(shí)驗(yàn)方法和步驟一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康耐ㄟ^本實(shí)驗(yàn)學(xué)習(xí)和掌握堿裂解法提取質(zhì)粒的原理和步驟。二、實(shí)驗(yàn)原理從細(xì)菌中分離質(zhì)粒DNA的方法都包括3個(gè)基本步驟：培養(yǎng)細(xì)菌使質(zhì)粒擴(kuò)增；收集和裂解細(xì)胞：分離和純化質(zhì)粒DNA。采用溶菌酶可以破壞菌體細(xì)胞壁，十二烷基磺酸鈉(SDS)和TritonX-100可使細(xì)胞膜裂解。經(jīng)溶菌酶和SDS或TritonX-100處理后，細(xì)菌染色體DNA會(huì)纏繞附著在細(xì)胞碎片上，同時(shí)由于細(xì)菌染色體DNA比質(zhì)粒大得多，易受機(jī)械力和核酸酶等的作用而被切斷成不同大小的線性片段。堿裂解法提取質(zhì)

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