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蘇州阿爾法生物實(shí)驗(yàn)器材有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第6年
PCR反應(yīng)的基本原理與實(shí)驗(yàn)技術(shù)2023/02/14
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模赫莆誔CR反應(yīng)的基本原理與實(shí)驗(yàn)技術(shù)二、PCR反應(yīng)實(shí)驗(yàn)原理PCR(PolymeraseChainReaction)-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng),可以選擇性擴(kuò)增一段DNA序列。其基本步驟是,首先將待擴(kuò)增的模板DNA變性使之成為單鏈,DNA樣品中,特異性的引物能夠與其互補(bǔ)的序列雜交,在dNTPs和Taq酶存在時(shí),就可以合成模板DNA的互補(bǔ)鏈,反應(yīng)完成后,將反應(yīng)混合物加熱使DNA雙鏈變性,溫度下降后,過量的引物又可以開始第二輪的合成反應(yīng)。這種延伸-變性-退火-延伸的循環(huán)可以重復(fù)多次,使所需要的DNA片
瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)DNA的方法2023/02/14
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模和ㄟ^本實(shí)驗(yàn)學(xué)習(xí)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)DNA的方法和技術(shù)。二、實(shí)驗(yàn)原理DNA分子在瓊脂糖凝膠中泳動(dòng)時(shí)有電荷效應(yīng)和分子篩效應(yīng)。DNA分子在高于等電點(diǎn)的pH溶液中帶負(fù)電荷在電場(chǎng)中向正極移動(dòng)。由于糖-磷酸骨架在結(jié)構(gòu)上的重復(fù)性質(zhì),相同數(shù)量的雙鏈DNA幾乎具有等量的凈電荷,因此他們能以相同的速度向正極方向移動(dòng)。在一定的電場(chǎng)強(qiáng)度下,DNA分子的遷移速度取決于分子篩效應(yīng),即DNA分子本身的大小和構(gòu)型。具有不同的相對(duì)分子質(zhì)量的DNA片段泳動(dòng)速度不一樣,可進(jìn)行分離。DNA分子的遷移速度與相對(duì)分子質(zhì)量對(duì)數(shù)值
病毒純化方法2023/02/14
病毒是一類非細(xì)胞型生物,需要寄生在其活細(xì)胞體內(nèi),雖然大部分病毒對(duì)人體是有害的,但是隨著科學(xué)的發(fā)展,發(fā)現(xiàn)很多病毒有較高的利用價(jià)值。例如:可以作為基因工程載體的慢病毒、腺相關(guān)病毒等;還有噬菌體展示技術(shù),可以幫助我們對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行相關(guān)研究;以及曾作為細(xì)胞融合應(yīng)用的仙臺(tái)病毒;而病毒最重要的應(yīng)用,就是用來制備滅活、減毒、亞單位疫苗。本期,我們主要對(duì)病毒疫苗生產(chǎn)過程中的純化方法進(jìn)行介紹。病毒提純是病毒學(xué)研究的重要前提,病毒的相關(guān)詳細(xì)研究都需要高純度的病毒樣品。病毒純化是在病毒不受損、不失活的前提下使用一些物理
分光光度計(jì)選購指南2023/02/13
光譜儀或分光光度計(jì)是用于識(shí)別或確認(rèn)樣品中物質(zhì)的化學(xué)種類、化學(xué)結(jié)構(gòu)或濃度的分析儀器。分光光度計(jì)將發(fā)射能量源通過溶液并測(cè)量不同波長的光強(qiáng)度。若溶液的分子濃度較高,則可能會(huì)吸收更多的光。所以,提交用于光譜分析的樣品必須非常純凈,以避免產(chǎn)生不良或受污染的結(jié)果。分光光度計(jì)主要由激發(fā)光源、濾光片、比色皿,以及光信號(hào)檢測(cè)器所組成。選擇合適的分光光度計(jì)/光譜儀時(shí)要考慮的重要標(biāo)準(zhǔn):檢測(cè)限制您要測(cè)量的產(chǎn)品的密度、形狀或尺寸波長范圍分析工作范圍樣品通量(單樣品與多樣品)數(shù)據(jù)質(zhì)量?jī)x器和相關(guān)消耗品的成本可定制和/或預(yù)配置
動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)生物反應(yīng)器中乳酸含量的控制方法2023/02/13
銨產(chǎn)量過多、乳酸產(chǎn)量過剩、營養(yǎng)限制或與營養(yǎng)補(bǔ)給、添加堿以控制pH值相關(guān)的高滲應(yīng)激等因素,使得動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)生物反應(yīng)器中的細(xì)胞密度被限制。為了部分克服這些因素,使用乳酸補(bǔ)充和適應(yīng)LSA技術(shù)是減少銨和乳酸產(chǎn)生的一種簡(jiǎn)單方法。使用這種簡(jiǎn)單的方法,可以實(shí)現(xiàn)了將近乳酸產(chǎn)量的大幅度減少,同時(shí)在分批搖瓶培養(yǎng)中減少了50%的銨產(chǎn)量。在隨后的補(bǔ)料分批生物反應(yīng)器培養(yǎng)中,使用BiosenC-Line乳酸分析儀測(cè)定乳酸產(chǎn)量減少了近8八倍。甚至可以實(shí)現(xiàn)3500萬個(gè)細(xì)胞/mL的活細(xì)胞密度和2.73億個(gè)細(xì)胞-天/mL的完整活細(xì)
如何選擇移液槍移液吸頭2023/02/13
如何選擇移液槍移液吸頭如何選擇實(shí)驗(yàn)室移液吸頭?任何移液器,其性能和精確度都會(huì)因使用質(zhì)量不佳或不合適的吸頭而受到嚴(yán)重影響。移液器和移液器吸頭作為一個(gè)系統(tǒng),只有互相匹配才能保證準(zhǔn)確地轉(zhuǎn)移和輸送液體。在掌握正確的移液技術(shù)后,匹配推薦的吸頭,就能保證移液的精度。一般分為:①袋裝吸頭、②盒裝吸頭、③低吸附吸頭、④濾芯吸頭、⑤自動(dòng)化吸頭等。透明吸頭VS.有色吸頭當(dāng)前,市場(chǎng)上吸頭基本上都是用聚丙烯塑料(化學(xué)惰性高,使用溫度范圍廣的無色透明塑料)做的。不過,同樣是聚丙烯,品質(zhì)差別也會(huì)很大:高品質(zhì)的吸頭一般都是用
紫外可見分光光度計(jì)使用注意事項(xiàng)2023/02/10
紫外可見光譜分析技術(shù)是一種廣泛應(yīng)用于許多科學(xué)領(lǐng)域的技術(shù),從細(xì)菌培養(yǎng)、藥物鑒定和核酸純度檢查和定量,到飲料行業(yè)的質(zhì)量控制和化學(xué)研究??梢姽庾V是一種分析技術(shù),它測(cè)量與參考或空白樣品相比樣品吸收或透射過的UV或可見光的離散波長的數(shù)量。此屬性受樣品成分的影響,分析結(jié)果可能會(huì)提供有關(guān)樣品中成分和濃度的信息。人類能夠看到一系列可見光,從大約380nm(我們看到的紫色)到780nm(我們看到的紅色)。紫外光的波長比可見光短,約為100nm。因此,光可以通過其波長來描述,這在紫外可見光譜中可用于通過定位與吸光度
實(shí)驗(yàn)室電子天平的使用及維護(hù)方法2023/02/10
實(shí)驗(yàn)室電子天平的使用及維護(hù)方法實(shí)驗(yàn)室電子天平主要用于實(shí)驗(yàn)過程中的樣品稱量、樣品制備等過程。使用及維護(hù)方法如下:1.實(shí)驗(yàn)室電子天平的使用條件稱量臺(tái):穩(wěn)固的實(shí)驗(yàn)臺(tái)或石臺(tái),不得用鐵板制品、塑料和玻璃制品的材料工作室:只有一個(gè)出入口,防止空氣對(duì)流;窗戶數(shù)量盡量少,避免陽光直射溫濕度:溫度要求15-30℃,并盡可能保持穩(wěn)定;濕度30-65%RH,盡量保持在50%RH空氣:避免空調(diào)或風(fēng)扇直吹天平,并避免將調(diào)溫、除濕設(shè)施安放于天平附近2.實(shí)驗(yàn)室電子天平操作注意事項(xiàng)調(diào)平:使用天平前應(yīng)首先檢查氣泡是否在水平儀的中
使用實(shí)驗(yàn)室儀器進(jìn)行小鼠抗體生產(chǎn)技術(shù)2023/02/10
小鼠抗體是科研實(shí)驗(yàn)中常用的一種抗體,它主要有IgA、IgD、IgE、IgG和IgM五種類型,下面小編就小鼠抗體分類及使用實(shí)驗(yàn)室儀器進(jìn)行小鼠抗體生產(chǎn)技術(shù)做一下簡(jiǎn)單介紹:小鼠抗體同種型/類、亞類和小鼠抗體同種型與人類相同,小鼠有五種抗體同種型(IgA、IgD、IgE、IgG和IgM)。每個(gè)同種型都有不同的重鏈。同種型也稱為類??贵w的另一個(gè)名稱是免疫球蛋白,因此后綴“Ig”表示抗體類別和亞類。幼稚B細(xì)胞產(chǎn)生IgM和IgD。在B細(xì)胞成熟過程中,通過同種型轉(zhuǎn)換,成熟的B細(xì)胞將產(chǎn)生IgG、IgA或IgE同種
使用微載體生物反應(yīng)器規(guī)模化擴(kuò)增 Vero 細(xì)胞的方法2023/02/10
絕大多數(shù)貼壁Vero細(xì)胞擴(kuò)增培養(yǎng)都是使用微載體技術(shù)在攪拌式細(xì)胞生物反應(yīng)器中進(jìn)行的。在這里,細(xì)胞附著在微載體上,微載體被設(shè)計(jì)成在攪拌培養(yǎng)中保持懸浮。微載體的種類很多,主要分為固體和大孔兩種,表面性質(zhì)不同。幾項(xiàng)研究比較了不同類型的微載體用于Vero細(xì)胞的繁殖.目前多數(shù)使用Cytodex1微載體.Cytodex1微載體是基于葡聚糖的固體微載體,顯示帶電表面,平均直徑為180μm左右。近年來,國內(nèi)生產(chǎn)的DISKS片狀載體孔徑只有15μm,單層厚度約0.44mm,可以維持較好的營養(yǎng)物質(zhì)交換環(huán)境,并且減少細(xì)
克隆抗體的特點(diǎn)和應(yīng)用2023/02/09
單克隆抗體是由單一B細(xì)胞克隆產(chǎn)生的高度均一、僅針對(duì)某一特定抗原表位的抗體。通常采用雜交瘤技術(shù)來制備,雜交瘤(hybridoma)抗體技術(shù)是在細(xì)胞融合技術(shù)的基礎(chǔ)上,將具有分泌特異性抗體能力的致敏B細(xì)胞和具有無限繁殖能力的骨髓瘤細(xì)胞融合為B細(xì)胞雜交瘤。1975年分子生物學(xué)家G.J.F.克勒和C.米爾斯坦在自然雜交技術(shù)的基礎(chǔ)上,創(chuàng)建立雜交瘤技術(shù),他們把可在體外培養(yǎng)和大量增殖的小鼠骨髓瘤細(xì)胞與經(jīng)抗原免疫后的純系小鼠B細(xì)胞融合,成為雜交細(xì)胞系,既具有瘤細(xì)胞易于在體外無限增殖的特性,又具有抗體形成細(xì)胞的合成
多克隆抗體及抗體制備流程2023/02/09
抗體,又名免疫球蛋白(Ig),是一種由B細(xì)胞產(chǎn)生的大型Y形糖蛋白,可在免疫防御中起主要作用。抗體與病原體的特定分子(即抗原)發(fā)生特異性結(jié)合??贵w以一個(gè)或者多個(gè)Y形單體存在,每個(gè)Y形單體由4條多肽鏈組成。每個(gè)Y形單體包含兩條相同的重鏈(H)和兩條相同的輕鏈(L),重鏈和輕鏈的序列和長度不同。Y形單體的頂部包含可變區(qū)(V),也稱抗原結(jié)合片段(F(ab))區(qū)。該區(qū)可與給定抗原上的表位特異性緊密結(jié)合??贵w的基本結(jié)構(gòu)包含恒定區(qū)(C)和可結(jié)晶片段(Fc)區(qū)。這一區(qū)域?qū)贵w的免疫應(yīng)答功能非常重要。此外,將熒光
蛋白酶K的應(yīng)用2023/02/09
近年來,隨著對(duì)蛋白酶K研究的深入,該酶的應(yīng)用范圍不僅在醫(yī)療診斷及科研領(lǐng)域得到了十分廣泛的應(yīng)用,該酶還作為替代其它作用范圍較窄的蛋白酶,主要應(yīng)用于造紙、工業(yè)制革、飼料生產(chǎn)、食品加工等行業(yè)中。此外,該酶還可以替代傳統(tǒng)的通過化學(xué)方法處理原材料的方法,減少污染。在各行各業(yè)中,蛋白酶K的主要用途有:①在分離DNA和RNA的過程中,用于核酸酶的蛋白水解失活。蛋白酶K能降解與核酸結(jié)合的蛋白質(zhì),促進(jìn)蛋白與核酸的分離,因此該酶在提取高分子量的核酸時(shí)具有很大的優(yōu)勢(shì)。蛋白酶K還常被用于RNA提取過程中抑制和降解RNa
什么是蛋白酶K,蛋白酶K的生產(chǎn)有哪些挑戰(zhàn)?2023/02/09
蛋白酶K(ProteinaseK)是一種廣譜絲氨酸蛋白酶,蛋白酶K于1974年在fungusEngyodontiumalbum的提取物中發(fā)現(xiàn)。能合成該種蛋白酶的微生物能在以角蛋白(Keratin)作為碳源和氮源的環(huán)境中生長,說明該酶可以消化角蛋白,因此被稱為“蛋白酶K”。蛋白酶K由一條肽鏈組成,含有277個(gè)氨基酸,該蛋白的相對(duì)分子量~28.9kDa,蛋白酶K是一種穩(wěn)定且具有高活性的絲氨酸蛋白酶。晶體和分子結(jié)構(gòu)研究證據(jù)表明該酶屬于枯草素家族,具有活性位點(diǎn)催化三聯(lián)體(Asp39-His69-Ser2
熒光蛋白Marker優(yōu)化方案2023/02/09
熒光蛋白Marker優(yōu)化方案有報(bào)道稱一種自預(yù)染熒光蛋白Marker,能夠?qū)崿F(xiàn)蛋白Marker即是預(yù)染蛋白又是曝光蛋白。具體原理是:將天然提取的熒光蛋白(包括藻紅蛋白、藻藍(lán)蛋白、別藻藍(lán)蛋白、綠色熒光蛋白、黃色熒光蛋白和紅色熒光蛋白等,其分子量為20-300kDa),與能夠結(jié)合抗體IgG的proteinA、proteinG和能被二抗結(jié)合的抗體Fc區(qū)蛋白或肽共價(jià)偶聯(lián),由于熒光蛋白自帶顏色,從而實(shí)現(xiàn)蛋白即是預(yù)染蛋白,又是熒光蛋白的目的,無需轉(zhuǎn)膜染色或X光片成像,此外,熒光蛋白Marker條帶可特異性結(jié)合
mRNA疫苗生產(chǎn)流程及具體步驟2023/02/08
mRNA疫苗生產(chǎn)流程及具體步驟Step1:將含病毒的核酸序列的質(zhì)粒,注入到大腸桿菌中,這里的質(zhì)??梢允菑牟《局刑崛?,但更安全有效的方法是根據(jù)發(fā)表的核酸序列優(yōu)化設(shè)計(jì)直接連接到質(zhì)粒上,避免跟病毒直接接觸;Step2:在溫暖適宜的條件下,大量繁殖生長攜帶了質(zhì)粒的大腸桿菌;Step3:將上述生長繁殖的大腸桿菌轉(zhuǎn)移至體積更大的營養(yǎng)液里,適宜條件下存放發(fā)酵,使其復(fù)制億萬級(jí)別的質(zhì)粒;Step4:發(fā)酵結(jié)束后,加入酶或者其他化學(xué)物質(zhì)分解大腸桿菌細(xì)胞壁,收集并純化質(zhì)粒;Step5:檢測(cè)上述的質(zhì)粒,確保質(zhì)粒攜帶的基因
初代測(cè)序技術(shù)分類及原理2023/02/08
1977年Sanger和Gilbert分別提出雙脫氧鏈終止法和化學(xué)降解法測(cè)序法,標(biāo)志著初代測(cè)序技術(shù)的誕生。初代測(cè)序技術(shù)分類Maxam-Gilbert化學(xué)降解法測(cè)序1.測(cè)序原理:先對(duì)DNA片段的5'或3'端進(jìn)行放射性標(biāo)記,再采用特異性化學(xué)試劑修飾和裂解特定的堿基位點(diǎn),從而得到一系列有共同放射起點(diǎn)但長度不一的DNA片段混合物,通過對(duì)此混合物進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳即可從放射自顯影片直接讀出DNA堿基序列。2.堿基序列的識(shí)讀:聚丙烯酰胺凝膠電泳可以將DNA片段混合物按片段大小分開,片段越小越接近凝膠底部
常見生物樣本的存儲(chǔ)和運(yùn)輸條件匯總2023/02/08
常見生物樣本的存儲(chǔ)和運(yùn)輸條件匯總生物樣本是醫(yī)學(xué)研究的重要資源,其質(zhì)量在很大程度上決定著臨床結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。目前生物樣本及其提取產(chǎn)物主要有深低溫和常溫兩大類保存方式,針對(duì)不同科研的需求,更多的樣本保存方式也相繼問世,本文將對(duì)常用的樣本保存方式及運(yùn)輸條件進(jìn)行小結(jié),可以收藏保存?zhèn)溆?。樣本?chǔ)存條件1.-196℃、-150℃深低溫凍存超低溫凍存是理想的樣本保存方法,目前液氮(-196℃)是靠譜的樣本保存方法,然而由于樣本浸沒在液氮中,游離的組織碎片可能帶來交叉污染的潛在風(fēng)險(xiǎn),因此催生了氣相液氮(-1
下游生物技術(shù)的一般工藝流程2023/02/08
下游生物技術(shù)的一般工藝流程人們通常把工業(yè)生物技術(shù)產(chǎn)品的生產(chǎn)過程比作河流,通常稱微生物育種技術(shù)為上游技術(shù),稱發(fā)酵技術(shù)為生物反應(yīng)工程,而發(fā)酵液的產(chǎn)物分離到產(chǎn)品的制作技術(shù)稱為下游技術(shù)。由于工業(yè)生物技術(shù)產(chǎn)品眾多,原料廣泛,產(chǎn)品性質(zhì)多樣,用途各異,因而分離、提取、精制的技術(shù),生產(chǎn)工藝及相關(guān)裝備也是多種多樣的。根據(jù)不同的對(duì)象,可采用在生物工業(yè)中行之有效的化工單元操作技術(shù),也可采用生物工業(yè)中*的下游新技術(shù)。某一具體產(chǎn)品的分離提取工藝還與下列情況有關(guān):是胞內(nèi)產(chǎn)物還是胞外產(chǎn)物;(2)原料中產(chǎn)物和主要雜質(zhì)濃度;(3
免疫球蛋白的五大種類2023/02/08
免疫球蛋白的五大種類免疫球蛋白是一組具有抗體活性的球蛋白,存在于血清、體液、外分泌液和一些細(xì)胞膜上,免疫球蛋白一般常縮寫為Ig,通??梢苑譃槲孱?,即IgA、IgG、IgM、IgD、IgE,各自具有不同的免疫學(xué)功能。這些免疫球蛋白由B細(xì)胞分泌,被免疫系統(tǒng)用來鑒別與中和外來物質(zhì)如細(xì)菌、病毒,其廣泛存在于人體血液中,及B細(xì)胞的細(xì)胞膜表面,臨床上常用的是測(cè)定免疫球蛋白IgA、IgG、IgM三項(xiàng)。免疫球蛋白對(duì)于抵抗外來入侵的病原體或者異物等外來性的抗原,有非常重要的作用。IgMIgM對(duì)發(fā)現(xiàn)早期感染意義非常
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