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用氯化鈣制備新鮮的大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞方法2017/07/04: 下面的簡單方案是Clhen等（1972）所用方法的變通方案，常用于成批制備感受態(tài)細(xì)菌，這些細(xì)菌可使每微克螺旋質(zhì)粒ＤＮＡ產(chǎn)生5x106-2x107個轉(zhuǎn)化菌落，這樣的轉(zhuǎn)化效率足以滿足所有在質(zhì)粒中進(jìn)行的常規(guī)克隆的需要。該方法*適用于大多數(shù)大腸桿菌菌株，并且比方案Ｉ快速，重復(fù)性更好。該法制備的感受態(tài)細(xì)胞可貯存于-70℃，但保存時間過長會使轉(zhuǎn)化效率在一定程度上受到影響。１）從于37℃培養(yǎng)16-20小時的新鮮平板中挑取一個單菌落（直徑２－３mm），轉(zhuǎn)到一個含有100mlLB或SOB培養(yǎng)基的1L燒瓶中。于37

RNAi及其在植物遺傳改良中的應(yīng)用2017/06/29: RNAi即RNA干涉(或RNA干擾)是指雙鏈RNA導(dǎo)入細(xì)胞后并被切割成21～23個核苷酸長度的短核苷酸雙鏈，在其它作用因子的參與下能夠特異地與其同源的mRNA結(jié)合并導(dǎo)致其降解，從而使得內(nèi)源基因不能表達(dá)，導(dǎo)致內(nèi)源基因的沉默。自1998年Fire等在線蟲中發(fā)現(xiàn)并闡明以來，RNAi已經(jīng)在其它動物、植物和真菌中被證實(shí)。研究表明參與該過程的許多基因具有高度的保守性，這可能是生物調(diào)控基因表達(dá)及抵御病毒侵染或轉(zhuǎn)座子誘導(dǎo)DNA突變的一種共有的古老生理機(jī)制。RNAi所具有的特異性、穩(wěn)定性、、快速以及不改變基因組的

RNAi技術(shù)專有名詞詳解2017/06/26: 1.RNAi：（RNAinterference）RNA干擾一些小的雙鏈RNA可以、特異的阻斷體內(nèi)特定基因表達(dá)，促使mRNA降解，誘使細(xì)胞表現(xiàn)出特定基因缺失的表型，稱為RNA干擾（RNAinterference，RNAi，也譯作RNA干預(yù)或者干涉）。它也是體內(nèi)抵御外在感染的一種重要保護(hù)機(jī)制。2.sirna：(smallinterferingRNAs)小干擾RNA一種短片斷雙鏈RNA分子，能夠以同源互補(bǔ)序列的mRNA為靶目標(biāo)降解特定的mRNA，這個過程就是RNA干擾途徑（RNAinterferenc

質(zhì)粒提取2017/06/22: 一、導(dǎo)論已經(jīng)提出過許多方法用于從細(xì)菌中提純質(zhì)粒dna，這些方法都含有以下3個步驟：（一）細(xì)菌培養(yǎng)物的生長從瓊脂平板上挑取一個單菌落，接種到培養(yǎng)物中(有含有行當(dāng)抗生素的液體培養(yǎng)基中生長)，然后從中純化質(zhì)粒，質(zhì)粒的提純幾乎總是如此?，F(xiàn)在使用的許多質(zhì)粒載體（如pUC系列）都能復(fù)制到很高的拷貝數(shù)，惟致只要將培養(yǎng)物放在標(biāo)準(zhǔn)LB培養(yǎng)基中生長到對數(shù)晚期，就可以大量提純質(zhì)粒。此時，不必造反性地擴(kuò)增質(zhì)粒DNA。然而，較長一代的載體(如pBR322)由于不能如此自由地復(fù)制，所以需要在得到部分生長的細(xì)菌培養(yǎng)物中加入氯

士鋒siRNA設(shè)計指南2017/06/12: UsingsiRNAforgenesilencingisarapidlyevolvingtoolinmolecularbiology.ThereareseveralmethodsforpreparingsiRNA,suchaschemicalsynthesis,invitrotranscription,siRNAexpressionvectors,ａndPCRexpressioncassettes.Irrespectiveofwhichmethodoneuses,thefirststepinde

用PCR擴(kuò)增cDNA庫中的特異序列2017/06/07: zui常用的基因分離方法需要建立組織或細(xì)胞RNA的cDNA庫，然后用抗體或DNA探針篩選出感興趣的基因。雖然這個方法已成功地克隆了大量基因，但建立和篩選CDNA庫是一項非常耗時．費(fèi)力的工作，而且用寡聚核苷酸作探針進(jìn)行篩選需大量蛋白質(zhì)序列結(jié)構(gòu)的資料。聚合酶鏈的反應(yīng)（PCR）方法可使一種特異DNA擴(kuò)增幾百萬倍，并已成為分子克隆和診斷的十分有用的工具。zui近，TAQDNA聚合酶的使用極大地簡化了PCR方法。該酶在75℃左右有很寬的zui適溫度區(qū)，在小于95℃以下重復(fù)保溫仍能存活，更重要的是，該酶活性

ELISA試劑盒2017/06/04: 試劑盒組成及試劑配制1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）2、標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）：2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至1ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為8,000pg/ml，將其稀釋為1,600pg/ml后，再做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成1,600pg/ml，800pg/ml，400pg/ml，200pg/ml，100pg/ml，50pg/ml，25pg/ml，樣品稀釋液直接作為空白孔0pg/ml。如配制800pg/ml標(biāo)準(zhǔn)

ELISA試劑盒說明書2017/06/04: ELISA試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中豬纖維蛋白原（Fbg）水平。用純化的豬纖維蛋白原（Fbg）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入纖維蛋白原（Fbg），再與HRP標(biāo)記的纖維蛋白原（Fbg）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的纖維蛋白原（Fbg）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中豬纖維蛋白原（Fbg）

試劑盒制備方法2017/06/01: elisa試劑盒制備方法ELISA試劑盒不是容易的事情。主要的限制是你所用抗體的質(zhì)量。另外你需要配制出特定成分的稀釋液，保證結(jié)果的真實(shí)可靠以及良好的重復(fù)性。這兩方面過關(guān)了，生產(chǎn)工藝并不復(fù)雜，你只要有生產(chǎn)抗體的平臺，再加上酶標(biāo)儀基本就可以搞定了。ELISA試劑盒包括以下步驟：1)抗原表位的計算機(jī)篩選；2)抗原的制備；3)血清的采集；4)間接ELISA方法的建立；5)間接ELISA方法的敏感性和特異性驗證；6)試劑盒的穩(wěn)定性驗證；ELISA試劑盒對屠宰場進(jìn)行臨床檢測。該方法簡單、快速、靈敏度高、特異

士鋒DNA雙鏈缺口修復(fù)的新發(fā)現(xiàn)2017/05/31: DNA雙鏈出現(xiàn)缺口被認(rèn)為是發(fā)生癌癥的一個重要原因。zui近，美國密蘇里州斯托瓦斯醫(yī)學(xué)研究所的研究人員在研究DNA雙鏈缺口修復(fù)中又有了新發(fā)現(xiàn)，他們提出盡管有機(jī)體內(nèi)存在天然的檢測和修復(fù)缺口的機(jī)制，但是與DNA損傷修復(fù)有關(guān)的因子必須首先繞過組蛋白。組蛋白既能保護(hù)DNA不受傷害但同時也阻礙了DNA的修復(fù)。這或促進(jìn)科學(xué)家早日找到癌癥治療的新策略。這些發(fā)現(xiàn)公布在2004年12月17日的《科學(xué)》雜志上。研究DNA修復(fù)也是探索生命的一個重要方面，而且與軍事醫(yī)學(xué)、腫瘤學(xué)等密切相關(guān)。對不同的DNA損傷，細(xì)胞可以有不

cdc25和chk1與細(xì)胞凋亡2017/05/24: cdc25和chk1在DNA破壞中的作用Cdc25isaproteinphosphataseresponsiblefordephosphorylatingａndactivatingcdc2,acrucialstepinregulatingtheentryofalleukaryoticCellsintotheM-phaseofthecellcycle.Cdc25isphosphorylatedthroughoutinterphasebutnotinmitosis.Theprimarysitefor

PI3K/Akt通路的負(fù)性調(diào)節(jié)因子-PTEN2017/05/22: 10號染色體缺失的磷酸酶及張力蛋白同源物((Phosphataseａndtensinhomologdeletedonchromosometen,PTEN)為1997年新發(fā)現(xiàn)的抑癌基因，位于10q23.3，其轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物是一種膜結(jié)合型脂質(zhì)磷酸酶，作為腫瘤抑制因子在多種系統(tǒng)中下調(diào)PIP3的表達(dá)，在胚胎發(fā)育、細(xì)胞生長、分化、凋亡和遷移的調(diào)控中發(fā)揮重要的作用。PTEN具有PI3K活性，能拮抗PI3K的作用，通過催化PIP3的3位脫磷酸下調(diào)PIP3的水平。

植物細(xì)胞色素P450（CYP450）2017/05/12: 實(shí)驗原理：本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中植物細(xì)胞色素P450（CYP450）水平。用純化的植物細(xì)胞色素P450（CYP450）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入細(xì)胞色素P450（CYP450），再與HRP標(biāo)記的細(xì)胞色素P450（CYP450）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的細(xì)胞色素P450（CYP450）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下

聯(lián)會復(fù)合體的染色與觀察2017/05/09: 實(shí)驗?zāi)康?.學(xué)習(xí)光學(xué)顯微鏡下顯示聯(lián)會復(fù)合體的實(shí)驗技術(shù)2.觀察光鏡下聯(lián)會復(fù)合體的形態(tài)結(jié)構(gòu)實(shí)驗原理聯(lián)會復(fù)合體是減數(shù)分裂前期同源染色體配對形成的非*性核內(nèi)特殊結(jié)構(gòu)，典型的聯(lián)會復(fù)合體由三股平行的線狀結(jié)構(gòu)組成，即兩條平行側(cè)線和一條纖細(xì)的中央軸組成。一般開始于偶線期，成熟于粗線期，消失于雙線期。它與減數(shù)分裂三個重要環(huán)節(jié)同源染色體聯(lián)會、交換以及分離有著密切關(guān)系。大量工作表明，聯(lián)會復(fù)合體在真核生物的減數(shù)分裂過程中是普遍存在的。實(shí)驗用品一、材料雄性小白鼠二、器材離心機(jī)、顯微鏡、水浴、培養(yǎng)皿、鑷子、剪刀、吸管、燒杯

核糖核酸酶P主要功能2017/05/06: 核糖核酸酶P是一種核糖核酸酶。核糖核酸酶P也是一種核酶，即由一個RNA分子發(fā)揮催化活性，它是*個被發(fā)現(xiàn)的蛋白質(zhì)以外具有催化活性的生物大分子。它的功能是剪切tRNA分子中RNA上多余的或前體的多余序列。[1]它的發(fā)現(xiàn)者悉尼·奧爾特曼在1970年代在研究前體tRNA中發(fā)現(xiàn)它可以剪切RNA的5'端，悉尼·奧爾特曼也因此獲得了1989年度的諾貝爾化學(xué)獎。[2]近期的研究發(fā)現(xiàn)核糖核酸酶P也具有一些新的功能，[3]例如人類細(xì)胞核中的核糖核酸酶P對于正常并有效地轉(zhuǎn)錄多種非編碼rna(包括tRNA、5SrRNA

動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)介紹2017/05/06: 動物細(xì)胞培養(yǎng)已成為生物制藥領(lǐng)域zui重要的關(guān)鍵技術(shù)之一，并以其研究的深入和進(jìn)展推動生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)的迅速發(fā)展。專家預(yù)言：蛋白治療藥物如糖蛋白、抗體和多肽藥物僅僅只是剛剛開始進(jìn)入市場，預(yù)計在下一個10年或20年會有更為快速的發(fā)展。屆時，蛋白治療藥物的迅速增長和市場需求將遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過*的生產(chǎn)能力。動物細(xì)胞培養(yǎng)規(guī)模化生產(chǎn)重組蛋白和抗體的工藝選擇可考慮使用當(dāng)前較成熟的工業(yè)化支持技術(shù)平臺，以縮短產(chǎn)品工藝研發(fā)的時間，加快工業(yè)化進(jìn)程。當(dāng)前已獲FDA批準(zhǔn)的生物技術(shù)產(chǎn)品以及公開發(fā)表的生產(chǎn)工藝中，占有主流優(yōu)勢的是攪拌式生物

細(xì)胞融合（Cell fusion）實(shí)驗2017/05/06: 實(shí)驗原理誘導(dǎo)細(xì)胞融合的主要方法有：病毒誘導(dǎo)融合，化學(xué)融合劑誘導(dǎo)融合和電融合。1.病毒誘導(dǎo)融合：有許多種類的病毒能介導(dǎo)細(xì)胞融合，zui常用的是滅活的仙臺病毒（HVJ），為RNA病毒。病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合的過程有：首先是細(xì)胞表面吸附許多病毒粒子，接著細(xì)胞發(fā)生凝集，幾分鐘至幾十分鐘后，病毒粒子從細(xì)胞表面消失，而就在這個部位鄰接的細(xì)胞的細(xì)胞膜融合，胞漿相互交流，zui后形成融合細(xì)胞。2.化學(xué)融合劑誘導(dǎo)融合：化學(xué)融合劑主要有脂肪酸衍生物、脂質(zhì)體、鈣離子、水溶性高分子化合物、水溶性蛋白質(zhì)和多肽，其中zui常用的

細(xì)胞培養(yǎng)室管理規(guī)定2017/05/06: 1、細(xì)胞培養(yǎng)室操方法。2．實(shí)驗人員進(jìn)入該實(shí)驗室進(jìn)行實(shí)驗工作時，必須更換、穿戴好工作服、鞋、帽、口罩。有關(guān)細(xì)胞培養(yǎng)的操作均在超凈臺上進(jìn)行，嚴(yán)格按無菌程序操作。3．實(shí)驗人員在進(jìn)行實(shí)驗前必須熟悉實(shí)驗內(nèi)容、操作步驟及各類儀器的性能和操作方法，嚴(yán)格執(zhí)行操作規(guī)程，并做好必要的安全防護(hù)。4．嚴(yán)禁將與實(shí)驗無關(guān)的易燃、易爆及其他有毒有害物品帶入實(shí)驗室；在本實(shí)驗室內(nèi)不得進(jìn)行微生物等其它易污染物的培養(yǎng)。5．細(xì)胞培養(yǎng)室中的昂貴設(shè)備，未經(jīng)許可，不得擅自開關(guān)。精密儀器必須經(jīng)過專門培訓(xùn)方能上機(jī)操作，并嚴(yán)格遵守操作規(guī)程。6．實(shí)

染色體G-帶的分帶技術(shù)2017/04/24: 實(shí)驗原理關(guān)于G-帶形成的機(jī)理，到目前為止還沒有*定論，但有人提出了以蛋白質(zhì)構(gòu)象改變?yōu)榛A(chǔ)的顯帶機(jī)理。此機(jī)理認(rèn)為，帶紋所反映的是蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的差異，這種差異與DNA的功能活動相適應(yīng)。G-帶的形成與Giemsa染料的組成及染色特性分不開。Giemsa染料是由亞甲藍(lán)(美藍(lán))、天藍(lán)和曙紅組成的復(fù)合染料，除曙紅外，均為噻臻類染料，它只與DNA中的PO43-基結(jié)合而不與蛋白質(zhì)結(jié)合，所以染色體著色首先是兩個噻臻分子與DNA的結(jié)合，在此基礎(chǔ)上結(jié)合一個曙紅分子;形成2:1噻臻-曙紅沉淀物。其次要有一個有助于染料沉淀

管式離心機(jī)工作原理2017/04/14: 管式離心機(jī)物料由底部進(jìn)液口射入高速旋轉(zhuǎn)的轉(zhuǎn)鼓，全鋼制結(jié)構(gòu)，雙層鋼板防護(hù),轉(zhuǎn)鼓上部是撓性主軸調(diào)整旋轉(zhuǎn)后形成強(qiáng)大的離心力場，使料液沿轉(zhuǎn)鼓內(nèi)壁向上流動，管式離心機(jī)的實(shí)際生產(chǎn)能力視分離介質(zhì)和分離效果而定。樣品在與空氣高速旋轉(zhuǎn)摩擦產(chǎn)生的溫度上升的幅度是很小的,離心力場的作用下密度較大的固體微粒逐漸沉積在轉(zhuǎn)鼓內(nèi)壁形成沉渣層。電動機(jī)通過傳送帶：比重大的液相形成外環(huán)，高速管式離心機(jī)流動到轉(zhuǎn)鼓上部從各自的排液口排出，微量固體沉積在轉(zhuǎn)鼓壁上，速度模式可選RPM或者g（RCF）。介質(zhì)腐蝕性強(qiáng)等物料的提取、濃縮、澄清較

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