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用于研究HUVEC的iPSC多能性和毛細(xì)血管網(wǎng)絡(luò)形成的高級體外3D模型
檢測樣品:3D生物打印 3D培養(yǎng) 高級體外3D模型
檢測項(xiàng)目:iPSC多能性和毛細(xì)血管網(wǎng)絡(luò)形成
方案概述:將人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)和人真皮成纖維細(xì)胞(HDFs)共培養(yǎng)和誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(iPSCs)單培養(yǎng) 分別包埋于選定的生物材料中7d。
介紹
由于整個(gè) 3D 矩陣中細(xì)胞自組裝和重組的差異,3D 生物打印和共培養(yǎng)類器官最近受到了廣泛關(guān)注。 單一培養(yǎng)類器官傾向于在 3D 中聚集以最D化粘附并最小化能量,而共培養(yǎng)則根據(jù)細(xì)胞間粘附的差異進(jìn)行重組
(Foty,2005 年;Napolitano,2007 年)。 一般來說,不同的細(xì)胞類型在細(xì)胞重組過程中也會相互顯著影響。 例如,單獨(dú)的內(nèi)皮祖細(xì)胞不會形成血管組織,但當(dāng)與人真皮成纖維細(xì)胞(HDF) 或平滑肌細(xì)胞類型共培養(yǎng)時(shí),血管內(nèi)皮管可以在多孔生物材料或生物墨水中形成 (Unger, 2007)。 一項(xiàng)使用人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC) 的研究表明,這些細(xì)胞在沒有成纖維細(xì)胞的情況下無法形成內(nèi)皮細(xì)胞腔,這凸顯了共培養(yǎng)系統(tǒng)的重要性(Newman,2011)。
在研究過程中,對HUVEC培養(yǎng)的相關(guān)標(biāo)記進(jìn)行了分析。分化簇31(CD31)是一種內(nèi)皮細(xì)胞特異性標(biāo)記物,用于二維和三維培養(yǎng)中監(jiān)測內(nèi)皮細(xì)胞的分化、自組裝和血管生成。CD31在HUVECs表面表達(dá),并已知在類有機(jī)分子內(nèi)自組織(Wu,2004)。occludens-1(ZO-1)是一種細(xì)胞質(zhì)蛋白,作為支架分子,是上皮細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞 緊密連接的組成部分。ZO-1氨基末端能與claudins和α-catenin/cadherins結(jié)合,羧基末端能與肌動蛋白細(xì)胞骨架相互作用(Itoh,1997)。表明在上皮細(xì)胞中,ZO-1是三維形成管腔所必需的。在排列的HUVEC三維培養(yǎng)中,ZO-1在緊密連接的功能性內(nèi)皮形成中發(fā)揮重要作用(Kang,2018)。
多能性標(biāo)記OCT4、SOX2和NANOG在維持胚胎干細(xì)胞和誘導(dǎo)多能性干細(xì)胞(iPSCs)的穩(wěn)定中起著關(guān)鍵作用。證據(jù)表明,在分化和發(fā)育過程中,它們表達(dá)模式的改變控制著細(xì)胞的命運(yùn)(Wang,2012)。例如,OCT4 調(diào)節(jié)BMP4通路并與之相互作用,以指DING不同的發(fā)育命運(yùn)。高水平的OCT4能在缺乏BMP4的情況下自我更新,但在存在BMP4的情況下指DING中胚層。低水平的OCT4在沒有BMP4的情況下誘導(dǎo)胚胎外胚層分化,但在 有BMP4的情況下明確胚胎外譜系。SOX2抑制中胚層分化, 而NANOG抑制胚胎外胚層分化(Rizzino, 2016)。這表明了在3D基質(zhì)中嵌入iPSCs或在2D中培養(yǎng)時(shí)保持這些多能性標(biāo)記的重要性。
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