葡聚糖凝膠 LH-20 Sepandex LH-2

Sepandex G-10、G-25糖凝膠是在水溶液中使用，若要用有機(jī)溶劑作為流動(dòng)相，需要通過(guò)羥丙基化將Sepandex G轉(zhuǎn)化為可在有機(jī)溶劑中溶脹的羥丙基葡聚糖凝膠，Sepandex LH-20。

葡聚糖凝膠 LH-20 Sepandex LH-2

水木清華2006在小木蟲的回答

1 Sephadex LH20是一種價(jià)錢較高的填料，使用請(qǐng)千萬(wàn)注意，很貴的喲！

（當(dāng)然，老板有錢的話就另當(dāng)別論）
2 先講Sephadex LH20 的原理。 Sephadex LH20的分離原理主要有兩方
面：以凝膠過(guò)濾作用為主，兼具反相分配的作用（在反相溶劑中）。因?yàn)槟z
過(guò)濾作用，所以大分子的化合物保留弱，先被洗脫下來(lái)，小分子的化合物保留
強(qiáng)，zui后出柱。如果使用反相溶劑洗脫， Sephadex LH20對(duì)化合物還起反相
分配的作用，所以極性大的化合物保留弱，先被洗脫下來(lái)，極性小的化合物保
留強(qiáng)，后出柱。如果使用正相溶劑洗脫，這主要靠凝膠過(guò)濾作用來(lái)分離。
3 再講Sephadex LH20 洗脫溶劑。聽(tīng)我講完 第2點(diǎn)后，其實(shí)就應(yīng)該清楚Seph
adex LH20 洗脫溶劑因分為兩類：反相和正相兩種。用得zui多的是反相溶劑
洗脫，以甲醇--水系統(tǒng)zui為常見(jiàn)，先用水，逐漸增加甲醇比例，zui后用10
0％甲醇沖柱。正相系統(tǒng)以氯仿--甲醇zui為常見(jiàn)，先用50％氯仿--甲醇，
逐漸增加甲醇比例，zui后用100％甲醇沖柱。
4 接下來(lái)講樣品的處理和洗脫溶劑的選擇。如果樣品極性大，這選用反相溶劑
洗脫（甲醇--水），樣品用zui少體積的甲醇--水（盡可能甲醇少一些）溶
解，過(guò)濾后，濕法上樣（一定要濾喔！要是把Sephadex LH20 堵啦，就得將
Sephadex LH20 的柱頭部分棄去，很心痛呀）。如果樣品極性小，這選用正
相溶劑洗脫（lv仿--甲醇），樣品用zui少體積的氯仿--甲醇溶解，過(guò)濾
后，濕法上樣。
5 分離的技巧，zui后說(shuō)說(shuō)我的使用心得
（1） 流速不可太快，切切不可新急，所謂欲速則不達(dá)。
（2）柱子盡可能長(zhǎng)， Sephadex LH20 柱長(zhǎng)的增加將*地改善分離，所不
要吝惜填料，寧可將填料全裝在一根大柱子中，不要將填料裝成幾根小柱。所
謂集中優(yōu)勢(shì)兵力，打擊敵人。
（3） 餾分一定要接的細(xì)，可1／10，或1／20 個(gè)保留體積接成一餾分。
（4） 洗脫體積一般為2-3個(gè)保留體積，對(duì)特殊保留強(qiáng)的化合物，可洗脫5個(gè)保
留體積。
（5）鞣質(zhì)成分死吸附嚴(yán)重，如不在乎填料者，可用Sephadex LH20 分鞣質(zhì)
（6）Sephadex LH20 對(duì)黃酮類成分的分離效果，方法很成型，有大量
文獻(xiàn)參考。
（7）填料反復(fù)使用，每次用完，一般可用甲醇將柱子洗干凈，然后用下一次分
離的起步溶劑將甲醇替換出來(lái)，待用。