SP Sepharose FF   SP-瓊脂糖凝膠 FF （100ml）

3.4 酶標抗體稀釋度的優(yōu)化
抗原包被濃度為4ug/ml,將酶標抗體做系列稀釋：1：100，1：200；1：300；1：400；1：500；1：600；1：1000；經(jīng)孵育、洗滌后、顯色終止后，用自動酶標儀分析（表7），選擇A值為1.5左右的酶標抗體稀釋度為zui適工作濃度。

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3.5 酶標抗體保護液的優(yōu)化
低濃度的酶標抗體極容易受到高溫、微生物、以及蛋白酶的影響而失活，嚴重影響產(chǎn)品的貨架期，過去通常將酶標抗體凍干保存，然而這樣的保存，不僅由于在凍干的過程中會影響酶標抗體的活性，而且在臨床應(yīng)用中頗為不便。適當?shù)木彌_液以及添加無關(guān)蛋白質(zhì)、糖、防腐劑以及一些含氨基的化合物等都會對對酶標抗體的活性起一定的保護作用，因此我們設(shè)計了一組保護劑用于保護酶標抗體，與未添加任何糖蛋白的酶標抗體做對照，將經(jīng)保護的酶標抗體及未保護的酶標抗體置于37℃烘箱中放置6天，考察保護液對酶標抗體的影響。
3.6 底物液的優(yōu)化
常用的作為酶聯(lián)免疫吸附試劑有OPD和TMB系統(tǒng)，由于OPD有致癌的危險性以及用前需要溶解等諸多缺點，因此我們選用TMB作為底物系統(tǒng)，采用文獻報道的方法：取適量的TMB溶解在DMSO中，然后加入適量的超純水，配制作為底物B液；溶解適量的過氧化氫尿素于100mM磷酸-檸檬酸緩沖液中，配制作為底物A液，用前將底物A液及底物B液等體積混合。
在文獻報道的基礎(chǔ)上，我們適當調(diào)整了TMB的用量以及過氧化氫尿素的用量，并加入了酶促進劑，與文獻報道的底物進行比較。實驗方案為：將活化的辣根過氧化物酶分別作1：1000；1：10000；1：100000；1：200000；1：400000；1：800000等系列稀釋，比較兩種不同配方的底物的靈敏度（表10）。

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