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上??撇┤鹕锟萍加邢薰?div id="fddldpv" class="member-level">中級會(huì)員 | 第4年
常用的分子生物學(xué)基本技術(shù)簡介2022/11/15
核酸分子雜交技術(shù)由于核酸分子雜交的高度特異性及檢測方法的靈敏性,它已成為分子生物學(xué)中常用的基本技術(shù),被廣泛應(yīng)用于基因克隆的篩選,酶切圖譜的制作,基因序列的定量和定性分析及基因突變的檢測等。其基本原理是具有一定同源性的原條核酸單鏈在一定的條件下(適宜的溫室度及離子強(qiáng)度等)可按堿基互補(bǔ)原成雙鏈。雜交的雙方是待測核酸序列及探針(probe),待測核酸序列可以是克隆的基因征段,也可以是未克隆化的基因組DNA和細(xì)胞總RNA。核酸探針是指用放射性核素、生物素或其他活性物質(zhì)標(biāo)記的,能與特定的核酸序列發(fā)生特異性
上??撇┤鹕飪龃娴脑?xì)胞應(yīng)該如何培養(yǎng)2022/11/11
上??撇┤鹕飪龃娴脑?xì)胞應(yīng)該如何培養(yǎng),我司以客戶為核心,以產(chǎn)品質(zhì)量求生存,以售后服務(wù)求信譽(yù),原代細(xì)胞通過不斷改進(jìn)來提高效率,絕不以犧牲品質(zhì)作為代價(jià)。原代細(xì)胞是指從機(jī)體取出后立即培養(yǎng)的細(xì)胞。有人把培養(yǎng)的第1代細(xì)胞與傳10代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。原代細(xì)胞不僅廣泛應(yīng)用于分子、細(xì)胞生物學(xué)和生物醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)研究,如蛋白質(zhì)組學(xué)、基因組學(xué)、細(xì)胞株(系)研究、DNA,RNA和遺傳學(xué)研究等。一、凍存原代細(xì)胞的培養(yǎng)1.將一管細(xì)胞從液氮罐中取出,注意保護(hù)手和眼睛。2.將凍存管快速的放入37℃水浴中,輕輕握住并
11條PCR引物設(shè)計(jì)原則2022/11/08
1、引物最好在模板cDNA的保守區(qū)內(nèi)設(shè)計(jì)。DNA序列的保守區(qū)是通過物種間相似序列的比較確定的。在NCBI上搜索不同物種的同一基因,通過序列分析軟件(比如DNAman)比對(Alignment),各基因相同的序列就是該基因的保守區(qū)。2、引物長度一般在15-30堿基之間。引物長度(primerlength)常用的是18-27bp,但不應(yīng)大于38bp,因?yàn)檫^長會(huì)導(dǎo)致其延伸溫度大于74℃,不適于TaqDNA聚合酶進(jìn)行反應(yīng)。3、引物GC含量在40%~60%之間,Tm值最好接近72℃。GC含量(compos
什么是人細(xì)胞ELISA試劑盒的基質(zhì)效應(yīng)呢?2022/11/07
在人細(xì)胞ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)中,我們或多或少會(huì)遇到樣本濃度接近試劑盒靈敏度,樣本OD450值低于空白值的現(xiàn)象,尤其是血清和血漿樣本,這可能是基質(zhì)效應(yīng)的結(jié)果。那么什么是基質(zhì)效應(yīng)呢?基質(zhì)是指除目標(biāo)分析物之外的樣品部分。因?yàn)榛|(zhì)成分會(huì)顯著干擾分析過程,影響分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。這些效應(yīng)在業(yè)內(nèi)統(tǒng)稱為矩陣效應(yīng)。這是人細(xì)胞ELISA試劑盒研發(fā)和使用中需要避免的雷。當(dāng)單個(gè)樣品或少量樣品的數(shù)值低于空白值時(shí),可能是實(shí)驗(yàn)操作中出現(xiàn)了問題。這時(shí)候就要增加重復(fù),提高操作技術(shù)。當(dāng)許多樣品低于空白值時(shí),應(yīng)考慮基體效應(yīng)的影響,建
什么是細(xì)胞凋亡,它與細(xì)胞壞死有什么區(qū)別?2022/11/01
細(xì)胞凋亡(apoptosis)指為維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定,由基因控制的細(xì)胞自主的有序的死亡。細(xì)胞凋亡與細(xì)胞壞死不同,細(xì)胞凋亡不是一件被動(dòng)的過程,而是主動(dòng)過程,它涉及一系列基因的激活、表達(dá)以及調(diào)控等的作用,它并不是病理?xiàng)l件下,自體損傷的一種現(xiàn)象,而是為更好地適應(yīng)生存環(huán)境而主動(dòng)爭取的一種死亡過程。細(xì)胞凋亡與壞死的區(qū)別:雖然凋亡與壞死的最終結(jié)果極為相似,但它們的過程與表現(xiàn)卻有很大差別。壞死(necrosis):壞死是細(xì)胞受到強(qiáng)烈理化或生物因素作用引起細(xì)胞無序變化的死亡過程。表現(xiàn)為細(xì)胞脹大,胞膜破裂,細(xì)胞內(nèi)容物
氨基酸的作用與發(fā)展2022/11/01
氨基酸,是含有堿性氨基和酸性羧基的有機(jī)化合物。羧酸碳原子上的氫原子被氨基取代后形成的化合物。氨基酸分子中含有氨基和羧基兩種官能團(tuán)。作用氨基酸在人體內(nèi)通過代謝可以發(fā)揮下列一些作用:①合成組織蛋白質(zhì);②變成酸、激素、抗體、肌酸等含氨物質(zhì);③轉(zhuǎn)變?yōu)樘妓衔锖椭?;④氧化成二氧化碳和水及尿素,產(chǎn)生能量。生理調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)在食物營養(yǎng)中的作用是顯而易見的,但它在人體內(nèi)并不能直接被利用,而是通過變成氨基酸小分子后被利用的。即它在人體的胃腸道內(nèi)并不直接被人體所吸收,而是在胃腸道中經(jīng)過多種消化酶的作用,將高分子蛋白
人(Human)發(fā)熱伴血小板減少綜合征病毒抗體(SFTSV-Ab)2022/10/24
檢測原理試劑盒采用雙抗一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包被發(fā)熱伴血小板減少綜合征病毒抗原的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、HRP標(biāo)記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),與CUTOFF值相比較,從而判定標(biāo)本中發(fā)熱伴血小板減少綜合征病毒抗體(SFTSV-Ab)的存在與否。樣品收集、處理及保存方法1.血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收
提取原代細(xì)胞的方法與詳細(xì)步驟2022/10/13
原代細(xì)胞是通過一定的方法如酶法或機(jī)械法或生長法使細(xì)胞從人體和動(dòng)物的母體器官、組織或液體中分離出來,并在受控環(huán)境條件下分離的細(xì)胞在體外或其他人體和動(dòng)物體內(nèi)生長。原代細(xì)胞的提取方法詳細(xì)步驟:1.整個(gè)操作要在潔凈通風(fēng)的超凈臺(tái)下進(jìn)行,所有的器材要高壓消毒。2.根據(jù)BALB/c小鼠的體重,將小鼠置于盛有75%乙醇的燒杯內(nèi),這一步不僅可以消毒,也可以讓小鼠體毛浸濕,后續(xù)剃去皮毛的時(shí)候不會(huì)沾到剪刀或組織上。3.用鑷子輕輕挑起小鼠的心臟,裝有PBS的注射器插入心尖,同時(shí)在右心耳處剪開一個(gè)小口,緩慢推動(dòng)注射器,隨
小鼠偽狂犬病毒elisa試劑盒?樣本處理及要求2022/10/12
小鼠偽狂犬病毒elisa試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法。用抗體包被于酶標(biāo)板上,實(shí)驗(yàn)時(shí)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中的抗原會(huì)與包被抗體結(jié)合,游離的成分被洗去。依次加入生物素化的抗體和辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素??贵w與結(jié)合在包被抗體上的抗原結(jié)合、生物素與親和素特異性結(jié)合而形成免疫復(fù)合物,游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB),TMB在辣根過氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍(lán)色,加終止液后變成黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長處測OD值,抗原濃度與OD450值之間呈正比,通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中指標(biāo)的濃度。小鼠偽狂犬病毒el
熒光定量PCR的應(yīng)用領(lǐng)域2022/10/09
熒光定量PCR的應(yīng)用領(lǐng)域:1、核酸定量分析:對傳染性疾病進(jìn)行定量定性分析,病原微生物或病毒含量的檢測,比如近期流行的甲型H1N1流感,轉(zhuǎn)基因動(dòng)植物基因拷貝數(shù)的檢測,RNAi基因失活率的檢測等。2、基因表達(dá)差異分析:比較經(jīng)過不同處理樣本之間特定基因的表達(dá)差異(如藥物處理、物理處理、化學(xué)處理等),特定基因在不同時(shí)相的表達(dá)差異以及cDNA芯片或差顯結(jié)果的確證3、SNP檢測:檢測單核苷酸多態(tài)性對于研究個(gè)體對不同疾病的易感性或者個(gè)體對特定藥物的不同反應(yīng)有著重要的意義,因分子信標(biāo)結(jié)構(gòu)的巧妙性,一旦SNP的序
elisa試劑盒的組成和保存問題2022/09/28
上海科博瑞生物ELISA試劑盒冷凍后的處理方式,我司產(chǎn)品免費(fèi)代測、代測服務(wù)只反饋實(shí)驗(yàn)結(jié)果原數(shù)據(jù)信息,不再提供相應(yīng)試劑盒,產(chǎn)品貨源充足、種屬齊全,滿足于生物、化學(xué)等領(lǐng)域定性、定量等研究實(shí)驗(yàn)。敬請來詳詢我司!在ELISA實(shí)驗(yàn)中,ELISA試劑盒是*的存在,我們知道,完整的ELISA試劑盒主要包含:1、酶的底物。2、已包被抗原或抗體的固相載體(免疫吸附劑)。3、酶標(biāo)記的抗原或抗體(結(jié)合物)。4、結(jié)合物及標(biāo)本的稀釋液。5、洗滌液。6、陰性對照品和陽性對照品(定性測定中),參考標(biāo)準(zhǔn)品和控制血清(定量測定中
ELISA試劑盒質(zhì)保的七要素2022/09/28
ELISA試劑盒質(zhì)量保證是個(gè)復(fù)雜的過程,許多重要的環(huán)節(jié)都影響到檢測的質(zhì)量。上海通蔚實(shí)業(yè)有限公司給您分享影響ELISA試劑盒質(zhì)保的七要素。第yi、方法學(xué)的影響ELISA測定模式包括以下幾種:雙抗體夾心法、間接法、雙抗原夾心法、IgM抗體捕捉法、競爭抑制法,其中競爭抑制法(HBeAb,HBcAb等采用)因受操作時(shí)差所引起的bu公平競爭等因素的影響,結(jié)果重復(fù)性較差,質(zhì)量較難控制。**、試劑因素不同批次的ELISA試劑在制作過程中很難保證質(zhì)量*致,即使是通過批批檢的項(xiàng)目其檢測結(jié)果也存在差異,因此必須選擇
影響elisa試劑盒的因素2022/09/28
選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測ELISA試劑盒,嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作,操作前將ELISA試劑盒在室溫下平衡30-60分鐘。標(biāo)本收集與保存:避免使用肉眼可見的溶血標(biāo)本、高脂標(biāo)本和混濁標(biāo)本;2-8℃下,標(biāo)本可放置24-48小時(shí),長期保存需放置-20℃下。請避免反復(fù)凍融。ELISA試劑盒使用中的準(zhǔn)備工作及注意事項(xiàng):ELISA試劑盒中會(huì)有提示,一般需要準(zhǔn)備的有:洗滌液;用前配制;有的ELISA試劑盒會(huì)標(biāo)明,配好的4度下一般可以放一個(gè)月;如果沒有標(biāo)明,盡量用新鮮的,不要多配制。顯色液(有A液和B液的),用前15
原始菌種、菌液的制備及保存的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程2022/09/27
菌種保藏使微生物的代謝活動(dòng)處于最/低的狀態(tài),但又不至于死亡,從而達(dá)到保藏的目的。規(guī)范菌種原始菌液的制備及長期保存。1.定義原始菌液--由凍干菌或冷凍菌直接傳代的孢子或生長菌的原始懸浮液。工作菌液--由原始菌液直接稀釋,或根據(jù)一般試驗(yàn)需要而等量稀釋的特定濃度的孢子或細(xì)菌的懸浮液。2.總則微生物室收到實(shí)驗(yàn)菌種后應(yīng)進(jìn)行活化及純化,并進(jìn)行傳代(芽孢桿菌除外)。每一新菌種在適宜的瓊脂平板上劃線分離,檢查是否純種,觀察菌落形態(tài)并用革蘭氏染色或芽孢染色法進(jìn)行鏡檢,如果是芽孢懸浮液,用常規(guī)方法測定其存活孢數(shù)。經(jīng)
如何降低人細(xì)胞ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)的誤差概率?2022/09/20
如何降低人細(xì)胞ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)的誤差概率?我們知道做實(shí)驗(yàn)時(shí)出錯(cuò)是正常的,但如果做到以下這些可以減少錯(cuò)誤。1、檢驗(yàn)技術(shù)員應(yīng)具備實(shí)驗(yàn)室操作的基本素質(zhì)和實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)。熟練操作實(shí)驗(yàn)儀器和儀器,有一定的總結(jié)和分析問題的能力,能夠及時(shí)妥善地解決實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的意外情況。2、使用經(jīng)過校準(zhǔn)的微量移液器來消除自然誤差。移液器的準(zhǔn)確性對于定量檢測尤為重要。3、仔細(xì)閱讀說明嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行規(guī)范操作。不同批號人細(xì)胞ELISA試劑盒的試劑不能混用。值得改進(jìn)的地方,只有經(jīng)過反復(fù)測試和確認(rèn),才能改進(jìn)。4、*清洗如果板沒有*清洗
人血ELISA試劑盒使用前要做好這些準(zhǔn)備2022/09/14
人血ELISA試劑盒檢測方法的三個(gè)特點(diǎn)如下:1、穩(wěn)定性好:包被抗原的穩(wěn)定性可以保證試劑盒的有效性。早期合成肽包被試劑盒有效期僅為3-4個(gè)月,基因工程抗原包被試劑盒后效期大大延長。2、基因工程抗原會(huì)融合特定的抗原決定簇基因進(jìn)行表達(dá),表達(dá)產(chǎn)物中含有較多的抗原決定簇,可以提高試劑盒的靈敏度和檢出率。3、分子量大:合成肽是用化學(xué)方法制備的。由于工藝的限制,合成肽的數(shù)量有限,只能達(dá)到數(shù)百個(gè)氨基酸。基因工程制備的抗原分子量較大。人血ELISA試劑盒使用前要做好這些準(zhǔn)備:1、各種實(shí)驗(yàn)儀器和材料,如微量移液器、
關(guān)于細(xì)胞株,你可能想要了解這些2022/08/11
細(xì)胞株是通過選擇法或者是克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得的具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志的培養(yǎng)細(xì)胞。簡單地說,它是用單細(xì)胞分離培養(yǎng)或通過篩選的方法,由單細(xì)胞增殖形成的細(xì)胞群。它的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個(gè)培養(yǎng)期間始終存在。原代培養(yǎng)物經(jīng)*傳代成功后即為細(xì)胞系,由原先存在于原代培養(yǎng)物中的細(xì)胞世系所組成。如果不能繼續(xù)傳代,或傳代次數(shù)有限,可稱為有限細(xì)胞系,如可以連續(xù)培養(yǎng),則稱為連續(xù)細(xì)胞系。原代培養(yǎng)的細(xì)胞一般傳至10代左右就不容易傳下去了,細(xì)胞的生長就會(huì)出現(xiàn)停滯,大部分細(xì)胞衰老死亡。但是有極少數(shù)的細(xì)胞能夠度過“危
學(xué)會(huì)人血ELISA試劑盒的保存真的很重要2022/08/09
人血ELISA試劑盒是一種靈敏度高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)性診斷方法。因其試劑穩(wěn)定、儲(chǔ)存方便、操作簡單、結(jié)果判斷客觀等優(yōu)點(diǎn),已被廣泛應(yīng)用于免疫學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域。免疫分析技術(shù)的基礎(chǔ)是抗原和抗體的特異性結(jié)合反應(yīng),因此任何更好的診斷試劑都離不開更好的原料,如抗原、抗體、酶等。以前用于免疫分析的抗原通常是各種純化的抗原,而抗體是用純化的抗原和通過雜交瘤技術(shù)獲得的單克隆抗體對動(dòng)物進(jìn)行免疫后獲得的多克隆抗體,而抗原或抗體標(biāo)記物如酶標(biāo)偶聯(lián)物是通過各種化學(xué)合成方法制備的。近年來,隨著分子生物學(xué)的發(fā)展,利用基因工程
試劑盒的組成與保存方式!2022/08/04
上??撇┤鹕顴LISA試劑盒冷凍后的處理方式,我司產(chǎn)品免費(fèi)代測、代測服務(wù)只反饋實(shí)驗(yàn)結(jié)果原數(shù)據(jù)信息,不再提供相應(yīng)試劑盒,產(chǎn)品貨源充足、種屬齊全,滿足于生物、化學(xué)等領(lǐng)域定性、定量等研究實(shí)驗(yàn)。敬請來詳詢我司!在ELISA實(shí)驗(yàn)中,ELISA試劑盒是*的存在,我們知道,完整的ELISA試劑盒主要包含:1、酶的底物。2、已包被抗原或抗體的固相載體(免疫吸附劑)。3、酶標(biāo)記的抗原或抗體(結(jié)合物)。4、結(jié)合物及標(biāo)本的稀釋液。5、洗滌液。6、陰性對照品和陽性對照品(定性測定中),參考標(biāo)準(zhǔn)品和控制血清(定量測定中
Elisa實(shí)驗(yàn)中的洗滌步驟不可馬虎2022/08/03
Elisa實(shí)驗(yàn)中的洗滌步驟不可馬虎,佰利萊生物來幫忙,在操作Elisa實(shí)驗(yàn)中,每一步都務(wù)必按照說明書進(jìn)行操作,如有不清楚的地方,可咨詢我公司,我司提供全程指導(dǎo),購買我司ELisa試劑盒可提供代測服務(wù)。洗滌在Elisa過程中雖不是一個(gè)反應(yīng)步驟,但卻決定著實(shí)驗(yàn)的成敗。Elisa就是靠洗滌來達(dá)到分離游離的和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的。通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì),以及在反應(yīng)過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。聚苯乙烯等塑料對蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的,而在洗滌時(shí)應(yīng)把這種非特異性
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