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細(xì)胞培養(yǎng)一般包括哪些操作？2023/09/07
一、復(fù)蘇1.把凍存管從液氮中取出來，立即投入37℃水浴鍋中，輕微搖動。液體都融化后(大概1-1.5分鐘)，拿出來噴點(diǎn)酒精放到超凈工作臺里。2.把上述細(xì)胞懸液吸到裝10ml培養(yǎng)基的15ml的離心管中(用培養(yǎng)基把凍存管洗一遍，把粘在壁上的細(xì)胞都洗下來)，1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。3.把上清液倒掉，加1ml培養(yǎng)基把細(xì)胞懸浮起來。吸到裝有10ml培養(yǎng)基的10cm培養(yǎng)皿中后左右輕輕搖動，使培養(yǎng)皿中的細(xì)胞均勻分布。4.標(biāo)好細(xì)胞種類和日期、培養(yǎng)人名字等，放到CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，細(xì)胞貼壁后換培養(yǎng)基。5.3天換一次培
影響PCR結(jié)果的因素有哪些？2023/09/04
（1）引物及濃度：①長度：15～30bp。②堿基：G+C含量以40%～60%為宜，ATGC最好隨機(jī)分布，避免5個以上的堿基成串排列。③避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)、兩條引物間互補(bǔ)，特別是3′端的互補(bǔ)。④引物3′端的堿基，特別是最末及倒數(shù)第二個堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對。⑤與其它序列無明顯同源性。⑥濃度為0.1～1μmol或10～100pmol。（2）酶及其濃度：催化一典型的PCR反應(yīng)約需酶量2.5U（指總反應(yīng)體積為100μl時），濃度過高可引起非特異性擴(kuò)增，濃度過低則合成產(chǎn)物量減少。（3）dNTP的質(zhì)量與
移液管如何使用2023/08/31
1、檢查移液管的管口和尖嘴有無破損，若有破損則不能使用。2、洗凈儀器，先用自來水淋洗后，用鉻酸洗滌液浸泡。操作方法如下：用右手拿移液管或吸量管上端合適位置，食指靠近管上口，中指和無名指張開握住移液管外側(cè)，拇指在中指和無名指中間位置握在移液管內(nèi)側(cè)，小指自然放松；左手拿洗耳球，持握拳式，將吸耳球握在掌中，尖口向下，握緊吸耳球，排出球內(nèi)空氣，將吸耳球尖口插入或緊接在移液管上口，注意不能漏氣。慢慢松開左手手指，將洗滌液慢慢吸入管內(nèi)，直至刻度線以上部分，移開吸耳球，迅速用右手食指堵住移液管上口，等待片刻后
關(guān)于細(xì)胞因子ELISA試劑盒的試驗條件2023/08/30
細(xì)胞因子ELISA試劑盒液體類標(biāo)本：包含血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。血清：室溫血液自然凝結(jié)10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。細(xì)心搜集上清。保存過程中如有沉積形成，應(yīng)再次離心。血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求挑選EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。細(xì)心搜集上清。保存過程中如有沉積形成，應(yīng)再次離心。尿液：用無菌管搜集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。細(xì)心搜集上清。保存過程中如有
瓊脂糖凝膠電泳的制備過程2023/08/29
瓊脂糖是實驗室常用的試劑之一，但是瓊脂糖凝膠電泳的制備過程也不簡單，接下來就為大家詳細(xì)介紹一下制備過程。一、用稱量紙片電子天平取0.3g的瓊脂粉；二、配30ML的1*10的TBST緩沖液與100ml的三角燒瓶里；三、倒入瓊脂粉搖勻，并轉(zhuǎn)到微波爐中加熱溶解；四、用手套取出到?jīng)鏊陨粤罌鲋翜責(zé)岷螅s60℃），加入核酸酶（Eb替代物）2ul；要邊加邊搖勻，使之充分搖勻；五、取電泳槽內(nèi)的有機(jī)玻璃內(nèi)槽(制膠槽)洗干凈,晾干，放入制膠玻璃板.取透明膠帶將玻璃板與內(nèi)槽兩端邊緣封好，形成模子。將內(nèi)槽置于水平位置
ELISA試劑盒樣本稀釋原則2023/08/21
標(biāo)本的稀釋原則：首先通過文獻(xiàn)檢索的方式了解待測樣本的大致含量，確定適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)。只有稀釋至標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍內(nèi)，檢測的結(jié)果才是準(zhǔn)確的。稀釋的過程中，應(yīng)做好詳細(xì)的記錄。zui后計算濃度時，稀釋了“N”倍，標(biāo)本的濃度應(yīng)再乘以“N”。標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋原則：2瓶，每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml，蓋好后靜置10分鐘以上，然后反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為300pg/ml，做系列倍比稀釋后，分別稀釋300pg/ml，150pg/ml，75pg/ml，37.5pg/ml，18.5pg/ml，9pg/ml，4.
免疫熒光染色原理及步驟2023/08/18
免疫熒光又稱免疫熒光抗體。免疫熒光實驗原理是將熒光素標(biāo)記在相應(yīng)的抗體上，直接與相應(yīng)抗原反應(yīng)。其優(yōu)點(diǎn)是方法簡便、特異性高，非特異性熒光染色少，相對使用標(biāo)記抗體用量偏大。利用抗原抗體反應(yīng)進(jìn)行組織或細(xì)胞內(nèi)抗原物質(zhì)的定位。下面詳細(xì)介紹免疫熒光染色步驟：1.滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于待檢標(biāo)本片上，10min后棄去，使標(biāo)本保持一定濕度。2.滴加適當(dāng)稀釋的熒光標(biāo)記的抗體溶液，使其覆蓋標(biāo)本，置于有蓋搪瓷盒內(nèi)，保溫一定時間(參考：30min)。3.取出玻片，置玻片架上，先用0.01mol/L，p
塑料離心管的特點(diǎn)2023/08/14
實驗室常用的離心管有塑料的和玻璃的，一般塑料的用的較多，因為玻璃的離心管不能用在高速或者超速離心機(jī)上。塑料的離心管有PP（聚丙烯）、PC(聚碳酸酯)，PE(聚乙烯)等材質(zhì)。PP的管子性能相對來說比較好。塑料離心管為透明或者半透明，可以直觀的看到樣品離心情況。接下來就介紹一下各種材質(zhì)塑料離心管的特點(diǎn)：PP（聚丙烯）：半透明，化學(xué)及溫度穩(wěn)定性較好，但是在低溫下會變脆，所以在離心時不要在4℃以下。PC(聚碳酸酯)：透明度較好，硬度大，可以高溫消毒，但不耐強(qiáng)酸強(qiáng)堿以及一些有機(jī)溶劑如酒精之類。主要用于5萬
木瓜蛋白酶的性質(zhì)及酶活測定方法2023/08/08
木瓜蛋白酶（Papain），又稱木瓜酶，是一種蛋白水解酶。木瓜蛋白酶是番木瓜（Carieapapaya）中含有的一種低特異性蛋白水解酶，廣泛地存在于番木瓜的根、莖、葉和果實內(nèi)，其中在未成熟的乳汁中含量。木瓜蛋白酶的活性中心含半胱氨酸，屬于巰基蛋白酶，它具有酶活高、熱穩(wěn)定性好、天然衛(wèi)生安全等特點(diǎn)。化學(xué)性質(zhì)木瓜蛋白酶是一種在酸性、中性、堿性環(huán)境下均能分解蛋白質(zhì)的蛋白酶。它的外觀為白色至淺黃色的粉末，微有吸濕性；木瓜蛋白酶溶于水和甘油，水溶液為無色或淡黃色，有時呈乳白色；幾乎不溶于乙醇、氯/仿等有機(jī)溶
液氮儲存細(xì)胞的安全性如何保證？2023/08/07
存放注意事項：1.禁止將罐口密封，以免液氮持續(xù)蒸發(fā)的氮?dú)鉄o法排出導(dǎo)致液氮罐爆炸；2.定時檢測液位高度，及時補(bǔ)充液氮，避免液氮蒸發(fā)后細(xì)胞凍存溫度不夠?qū)е率Щ睿?.禁止密閉空間存儲，避免空間內(nèi)氮?dú)夂扛邿o氧氣，導(dǎo)致人員缺氧窒息；4.做好個人防護(hù)，避免深低溫液氮直接接觸皮膚導(dǎo)致凍傷。取出注意事項：1.做好個人防護(hù)，不可徒手去拿從液氮罐中出來的細(xì)胞凍存管；2.取出時不要直接將提桶、提籃拿出液氮罐，可放在罐口位置，瀝干提桶、提籃的液氮；3.細(xì)胞凍存管取出后可放-80°冰箱或放倒在吸水紙上，使?jié)B入液氮緩慢揮
小鼠腫瘤壞死因子α試劑盒的原理和操作方法2023/08/03
實驗原理試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被腫瘤壞死因子α(TNF-α)捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的腫瘤壞死因子α(TNF-α)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計算樣品濃度。操作步驟1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和
ELISA試劑盒組成與常見ELISA試劑盒分類2023/07/31
ELISA快速檢測技術(shù)越來越多的用于疾病診斷、食品安全檢測中，那么ELISA試劑盒的主要組成成份是什么呢？根據(jù)ELISA試劑盒的應(yīng)用范圍，可將ELISA試劑盒分為拿幾種呢？ELISA試劑盒主要的組成成份如下：(1)已包被抗原或抗體的固相載體(免疫吸附劑)；(2)C的抗原或抗體(結(jié)合物)；(3)酶的底物；(4)陰性對照品和陽性對照品(定性測定中)，參考標(biāo)準(zhǔn)品和控制血清(定量測定中)；(5)結(jié)合物及標(biāo)本的稀釋液；(6)洗滌液，在板式ELISA中，常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水；(7)
PVDF膜的特點(diǎn)2023/07/27
PVDF膜是一種用于各種實驗室和工業(yè)應(yīng)用的膜，用于過濾、分離和純化生物和化學(xué)樣品。PVDF代表聚偏二氟乙烯，它是一種具有高化學(xué)和熱穩(wěn)定性的合成聚合物，使其適用于廣泛的應(yīng)用。PVDF膜通常用于蛋白質(zhì)和核酸轉(zhuǎn)移、蛋白質(zhì)印跡以及其他需要高蛋白質(zhì)結(jié)合能力和低背景干擾的應(yīng)用。特點(diǎn)：PVDF膜具有多種特性，使其在實驗室和工業(yè)應(yīng)用中廣受歡迎。1、化學(xué)和熱穩(wěn)定性：PVDF可耐受大多數(shù)化學(xué)品、有機(jī)溶劑和溫度，使其適用于惡劣環(huán)境。2、高蛋白結(jié)合能力：PVDF膜對蛋白質(zhì)具有高親和力，使其成為蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移和蛋白質(zhì)印跡應(yīng)用
透析袋的選擇和使用2023/07/24
透析袋的選擇1，正確選擇合適的截留分子量截留分子量的選擇是以預(yù)留在膜內(nèi)的大分子的分子量和將要被除去的小分子污染物的分子量為基礎(chǔ)的。為達(dá)到合理有效的分離，需分離的兩種物質(zhì)分子量的比率至少為25，選擇截留分子量的經(jīng)驗法則：選擇截留分子量值約為要保留的大分子分子量的一半，以獲得至少90%的保留率。2，正確選擇扁平寬度透析袋扁平寬度的選擇取決于樣品體積和透析容量。較小的透析管透析更快；較大的透析管因擴(kuò)散距離較長透析較慢。為易于使用，建議使用總長（包括閉合夾和頂部空間）為大約10-15厘米的透析袋。3，透
吐溫80的用法及用量分析2023/07/20
吐溫80又稱聚山梨酯80，是一種非離子型表面活化劑及乳化劑，化學(xué)式為C24H44O6(C2H4O)n。易溶于水，溶于乙醇、植物油、乙酸乙醇、甲醇、甲苯，不溶于礦物油。低溫時成膠裝，受熱后復(fù)原；有特臭，味微苦。用法及用量分析：1、吐溫80為油酸酯，有很好的乳化作用，一般用作乳化劑、潤濕劑。建議用量：1%-2%（僅供參考，以實際應(yīng)用為準(zhǔn)）。2、吐溫80是制劑學(xué)上常用的增溶劑，根據(jù)有關(guān)參考文獻(xiàn)表示一般用量為1%-2%。3、吐溫80加入量：如果按1%濃度計算，所需吐溫80加入量為10ml；同理，若按2%
PBS怎么配？2023/07/19
PBS作為生物實驗中的試劑，PBS是磷酸緩沖鹽溶液，一般作為溶劑，起溶解保護(hù)試劑的作用。一般的有活性的生物制劑都要用它來稀釋。它具有鹽平衡、可調(diào)整適宜pH、可以緩沖pH等特點(diǎn)。PBS、蒸餾水和生理鹽水三種溶劑該怎么選擇呢？蒸餾水不具有鹽平衡作用，可以破壞生物蛋白的結(jié)構(gòu)及生物特性；而生理鹽水不具有調(diào)整pH的作用，對完整的、具有活性的物質(zhì)不能保證其在最適條件下參與生物反應(yīng)。在實驗室也常見PB、PBST溶液。PB溶液的成分通常有磷酸鈉和磷酸鉀。若只是化學(xué)反應(yīng),用PB溶液就行。在PB的基礎(chǔ)上按照一定比例
引物在 PCR 反應(yīng)中的作用是什么？2023/07/18
引物是一段短的單鏈RNA或DNA片段，可結(jié)合在核酸鏈上與之互補(bǔ)的區(qū)域回，其功能是作為核苷酸答聚合作用的起始點(diǎn)，核酸聚合酶可由其3′端開始合成新的核酸鏈。體外人工設(shè)計的引物被廣泛用于聚合酶鏈反應(yīng)、測序和探針合成等。PCR是利用DNA在體外攝氏95°高溫時變性會變成單鏈，低溫（經(jīng)常是60°C左右）時引物與單鏈按堿基互補(bǔ)配對的原則結(jié)合，再調(diào)溫度至DNA聚合酶最適反應(yīng)溫度（72°C左右），DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補(bǔ)鏈。
新生牛血清的成分2023/07/17
1.蛋白質(zhì)新生牛血清中的主要成份中除包括可攜帶金屬離子、脂肪酸和自身是激素類蛋白外，主要還有白蛋白，球蛋白。纖維粘連素細(xì)胞促進(jìn)細(xì)胞附著;胎牛血清中含胎球蛋白促細(xì)胞依附;轉(zhuǎn)鐵蛋白可以結(jié)合鐵離子，減少其毒性會被細(xì)胞利用的可能。2.多肽血小板促生長因子能促細(xì)胞分裂，據(jù)專人介紹新生牛血清是多肽家族的重要成員，多肽擁有著重要的作用，比如它可以促進(jìn)細(xì)胞增殖因子數(shù)量的增加，不僅如此，它還能夠促成纖維細(xì)胞生長因子以及神經(jīng)細(xì)胞生長因子等，據(jù)悉，雖然從數(shù)量上來看新生牛血清的含量比例少，但它能夠促進(jìn)細(xì)胞的增長。3.激
DNA瓊脂糖凝膠電泳時上樣緩沖液的量應(yīng)該為多少？2023/07/14
瓊脂糖凝膠電泳上樣量，一般取決于瓊脂糖凝膠的大小和濃度，以及DNA的濃度和純度等因素。通常而言，瓊脂糖凝膠電泳的上樣量應(yīng)該在0.1至1.0μg之間。如果上樣量太低，DNA條帶可能會過于模糊且難以讀取，無法得出準(zhǔn)確的結(jié)果；而如果上樣量太高，則會使得DNA條帶過于密集而無法區(qū)分，也會影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。因此，確定適當(dāng)?shù)纳蠘恿渴沁M(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳實驗的關(guān)鍵因素之一。下面是一些常見的上樣量推薦：1.載體DNA：10ng至1μg2.PCR產(chǎn)物：10ng至1μg3.高分子DNA：約50-100ng4.短DNA
瓊脂粉的來源和用途2023/07/13
瓊脂粉是一種半乳糖單元的復(fù)合硫酸化聚合物，從軟骨球藻、裙帶菜和相關(guān)紅藻中提取。它被用作制備微生物固體培養(yǎng)基的凝膠，用作散裝瀉藥，用于制備乳劑，并用作免疫擴(kuò)散和免疫電泳的支持介質(zhì)。瓊脂粉無臭或有輕微的特征氣味。非圓形瓊脂通常以由薄的、膜狀的、凝集的條帶或切割的、片狀的或粒狀的形式形成。它可能是淡黃橙色、黃灰色至淡黃色或無色。潮濕時堅硬，干燥時易碎。粉狀瓊脂為白色至黃白色或淡黃色。當(dāng)在顯微鏡下在水中檢查時，瓊脂粉末看起來更透明。在水合氯醛溶液中，粉末狀瓊脂比水更透明，或多或少呈顆粒狀、條紋狀、棱角狀
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