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ELISA和WB區(qū)別2024/04/24: ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）用到了免疫學(xué)原理和化學(xué)反應(yīng)顯色，待測的樣品多是血清、血漿、尿液、細(xì)胞或組織培養(yǎng)上清液，因而沒有用到組織包埋、切片等技術(shù)，這是與免疫組化的主要區(qū)別，操作上開始需要將抗原或抗體結(jié)合到固相載體表面，從而使后來形成的抗原-抗體-酶-底物復(fù)合物粘附在載體上，這就是“吸附”的含義。免疫組化和elisa所用到的原理大致相同，只是因?yàn)樗鶛z測的樣品不同，從而在操作方法上有所不同。elisa多用于定量分析，其靈敏度非常高。Westernbolt（蛋白質(zhì)印跡法）先要進(jìn)行SDS-PAGE，

針頭式過濾器的使用方法2024/04/22: 1.確保針頭式過濾器的濾芯是干凈和完好的，不存在損壞或污垢。確保濾座和濾頭也是完好的，沒有任何堵塞或損壞。收集所需的工具和材料，如螺絲刀、密封膠、連接管等。2.安裝過濾器:根據(jù)需要選擇合適的位置來安裝過濾器。確保過濾器安裝的位置能夠方便操作和維護(hù)，并且不會(huì)對其他設(shè)備的正常工作造成于擾。根據(jù)管道的直徑，選擇合適的連接管，并使用密封膠確保連接緊密。使用螺絲刀將過濾器固定在合適的位置上。3.準(zhǔn)備濾芯:將濾芯按照過濾要求選擇合適的型號，并確保濾芯的有效期沒有過期。如果需要，將濾芯浸泡在清水中一段時(shí)間以去

爬片的特點(diǎn)與注意事項(xiàng)2024/04/19: 爬片又名細(xì)胞爬片，是指讓玻片浸在細(xì)胞培養(yǎng)基內(nèi)，細(xì)胞在玻片上生長，主要用于組織學(xué)，免疫組織學(xué)，冰凍切片，細(xì)胞涂片，原位雜交等。細(xì)胞爬片特點(diǎn)1.玻片表面經(jīng)過TC處理，雙面均可使用.2.ybeita射線滅菌,保證無菌.3.使用便捷,只需打開包裝,將爬片放入孔板內(nèi),將細(xì)胞懸液滴到爬片上即可培養(yǎng).4.爬片厚度為0.17mm,直徑為8mm/14mm/20mm/25mm.分別適用于48孔細(xì)胞培養(yǎng)板/24孔細(xì)胞培養(yǎng)板/12孔細(xì)胞培養(yǎng)板/6孔細(xì)胞培養(yǎng)板5.吸附強(qiáng)：該玻片表面具有陽離子電荷,可以通過靜電作用吸附冰凍

B27和N2添加劑之間的區(qū)別2024/04/15: B27添加劑和N2添加劑是用于神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)的不同類型的營養(yǎng)因子，它們的主要區(qū)別在于成分和用途。B27添加劑是一種無血清培養(yǎng)液中的營養(yǎng)因子，含有更多的添加成分，有利于干細(xì)胞的恢復(fù)和維持。它通常用于人的神經(jīng)干細(xì)胞原代培養(yǎng)。相比之下，N2添加劑是用于神經(jīng)元培養(yǎng)的無血清培養(yǎng)液中的營養(yǎng)因子，適用于鼠的神經(jīng)元培養(yǎng)。在某些情況下，如人的神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)，可以先用B27添加劑進(jìn)行成球，之后更換為N2添加劑進(jìn)行長期培養(yǎng)。需要注意的是，Invitrogen出品的B27添加劑有四種類型，建議選用不含視黃酸(RA)的那

細(xì)胞凋亡檢測實(shí)驗(yàn)原理2024/04/07: 細(xì)胞死亡根據(jù)其性質(zhì)、起源及生物學(xué)意義區(qū)分為凋亡和壞死兩種不同類型。凋亡普遍存在于生命界，在生物個(gè)體和生存中起著非常重要的作用。它是細(xì)胞在一定生理?xiàng)l件下一系列順序發(fā)生事件的組合，是細(xì)胞遵循一定規(guī)律自己結(jié)束生命的自主控制過程。細(xì)胞凋亡具有可鑒別的形態(tài)學(xué)和生物化學(xué)特征。在形態(tài)上可見凋亡細(xì)胞與周圍細(xì)胞脫離接觸，細(xì)胞變園，細(xì)胞膜向內(nèi)皺縮、胞漿濃縮、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張、細(xì)胞核固縮破裂呈團(tuán)塊狀或新月狀分布、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和細(xì)胞膜進(jìn)一步融合將細(xì)胞分成多個(gè)完整包裹的凋亡小體，凋亡小體最后被吞噬細(xì)胞吞噬消化。在凋亡過程中細(xì)胞內(nèi)容物

超濾管的使用方法有哪些？2024/04/01: 1、預(yù)處理新超濾管：使用前用純水浸泡，冰箱預(yù)冷10min。然后將水倒出，置于冰上預(yù)冷2-5min，加樣。舊超濾管：倒出管內(nèi)的乙醇浸泡液，用純水沖洗干凈10遍（注意水流速盡量平緩，防止沖破濾膜），置于冰上預(yù)冷2-5min，加樣。2、加樣如超濾管中有少許殘留水可將超濾管內(nèi)管倒置1000×g離心1min，移液槍移取適量樣本加入超濾管中。3、離心配平，12000×g離心（15-30min），等達(dá)到目的轉(zhuǎn)速后方可離開。4、樣本收集外管濾液為除去部分蛋白的樣本上清，如需取濃縮后樣本用于其他實(shí)驗(yàn)，則另取外管，

如何正確使用封板膜？2024/03/25: 一、準(zhǔn)備在使用封板膜前，要先清理需要封板的表面，確保表面干凈，不沾有灰塵、油污和水分。最好使用干凈的軟布或絨布擦拭表面，如果表面難以清潔，可以先用清洗劑進(jìn)行清洗。二、使用過程1、將封板膜取出，留出約10cm左右的長度，貼在需要封板的表面上；2、緩緩地將封板膜按照表面的輪廓向下貼，同時(shí)慢慢剝離保護(hù)紙，將封板膜按壓在表面上；3、在封板膜的表面使用橡皮擦輕輕擦拭，將少量氣泡排出來，注意不要用力過猛，避免將氣泡擠到封板膜的下面；4、當(dāng)封板膜整體貼滿表面后，再用刮板或硬卡片將封板膜表面多余的氣泡排除。三、

B27無血清培養(yǎng)基和普通培養(yǎng)基的區(qū)別？2024/03/20: B27無血清培養(yǎng)基是一種常用于體外細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基。提供一種不含動(dòng)物血清成分的培養(yǎng)基，以避免可能存在的病原體污染和其他質(zhì)量問題。B27無血清培養(yǎng)基的配方包括多種營養(yǎng)元素、維生素、氨基酸和生長因子，可以用于支持多種類型的細(xì)胞生長和分化。與普通培養(yǎng)基之間的區(qū)別：1、可以消除動(dòng)物源性物質(zhì)引起的潛在風(fēng)險(xiǎn)。在含血清培養(yǎng)基中，常常會(huì)存在病毒、細(xì)菌和真菌等微生物，它們會(huì)對細(xì)胞的健康造成威脅。使用B27無血清培養(yǎng)基可以更大程度地減少這些風(fēng)險(xiǎn)。2、還可以提高細(xì)胞培養(yǎng)的一致性。傳統(tǒng)的含血清培養(yǎng)基中，血清的來源和成分

干型透析袋的使用和注意事項(xiàng)2024/03/18: 使用方法：①把透析袋剪成適當(dāng)長度(10cm左右)的小段。②用60℃去離子水中水浴30分鐘-1小時(shí)，再用去離子水膜內(nèi)沖洗3次。③使用時(shí)，一端用下沉透析袋夾子夾緊，灌滿水后，用手指適當(dāng)加壓，檢查不漏，方可裝入樣品。通常要留三分之一至一半的空間，以防透析過程中，袋外的水和緩沖液過量進(jìn)入袋內(nèi)將袋漲破。裝完樣品后，用上浮夾子夾緊袋口，可在袋內(nèi)放一玻璃珠，以使透析袋處于懸浮狀態(tài)，即可進(jìn)行透析。為了加快透析速度，除多次更換透析液外，還可使用磁力攪拌器。透析的容器要大一些，可以使用大燒杯、大量筒和塑料桶。注意事

細(xì)胞篩網(wǎng)的使用方法2024/03/11: 準(zhǔn)備濾器：選擇合適的細(xì)胞篩網(wǎng)，并根據(jù)需要在濾器上加上濾紙，使其更容易使用。準(zhǔn)備細(xì)胞懸液或培養(yǎng)基：將細(xì)胞懸液或培養(yǎng)基倒入容器中，并加入需要的藥物、酶、抗生素等。過濾細(xì)胞：將濾器輕輕地壓在溫和的細(xì)胞懸液或培養(yǎng)基中，讓其均勻地經(jīng)過細(xì)胞篩網(wǎng)的孔。收集過濾的細(xì)胞：過濾后的細(xì)胞可以直接通篩網(wǎng)被收集或者用無菌的器具從容器中進(jìn)行收集。細(xì)胞培養(yǎng)：若需要培養(yǎng)篩選的細(xì)胞，則將其收集到未被污染的細(xì)胞培養(yǎng)基中，并按照培養(yǎng)基配方進(jìn)行培養(yǎng)。此外，細(xì)胞篩網(wǎng)的使用還需注意以下幾點(diǎn)：1.細(xì)胞篩網(wǎng)的類型。細(xì)胞篩網(wǎng)通常分為單層和多層兩

蛋白酶K的原理和應(yīng)用2024/03/05: 新型蛋白酶K（ProteinaseK）的基因序列來源于林伯氏白色念球菌（Tritirachiumalbumlimber）的蛋白酶K基因，經(jīng)過了基因定點(diǎn)突變和酵母細(xì)胞分泌表達(dá)、色譜純化。經(jīng)過蛋白質(zhì)工程化的新型蛋白酶K提高了比活性和純度，不含有細(xì)菌內(nèi)毒素，應(yīng)用范圍比天然蛋白酶K更廣泛。新型蛋白酶K是現(xiàn)有蛋白酶中活性最高的品種，在pH4到pH12的條件下均有活性，反應(yīng)溫度介于0～75oC之間。在常用濃度的SDS、尿素或EDTA存在時(shí)亦很穩(wěn)定。酶切割位點(diǎn)在脂肪族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽鍵，可以用于

不同類型透析袋的區(qū)別2024/02/26: 一、即用型透析袋即用型透析袋的制造過程沒有重金屬污染及硫化物，無需預(yù)處理，只需用去離子水清洗即可使用，滿足對截留分子量精確性和膜純度的應(yīng)用。1.韌性膜材料，不易破損2.雜質(zhì)含量極少，可無需預(yù)處理，只需用去離子水清洗即可使用3.孔徑標(biāo)準(zhǔn)均一4.對溶質(zhì)的吸附性小5.可選分子量范圍廣100-3000006.多種扁平寬度可選7.生物技術(shù)膜，不含硫化物及金屬雜質(zhì)二、普通干型透析袋1.PH穩(wěn)定范圍:5-92.污染物水平:硫化物3.化學(xué)兼容性:與很多鹽兼容，比如CaCl2,(NH4)2SO4；還可與分子生物學(xué)

牛血清白蛋白在實(shí)驗(yàn)中的作用2024/02/18: 牛血清白蛋白（BSA）在生化實(shí)驗(yàn)中有廣泛的應(yīng)用,接下來為大家介紹其中兩種作用。牛血清白蛋白測定蛋白濃度：按50：1配置BCA工作液。10ulC液（蛋白標(biāo)準(zhǔn)）+90ulPBS液稀釋成0.5mg/ml的蛋白標(biāo)準(zhǔn)液。再分別以0、1、2、4、8、12、16、20ul將蛋白標(biāo)準(zhǔn)液加入96孔板的第1~8標(biāo)準(zhǔn)孔中，在其他樣品孔中加入10ul待測樣品。分別加PBS定容至20ul。各孔中加入200ulBCA工作液，室溫放置2小時(shí)。用酶標(biāo)儀測定蛋白濃度：測定A562，依標(biāo)準(zhǔn)曲線算出蛋白濃度。牛血清白蛋白SDS-PA

配置瓊脂糖凝膠的方法2024/01/29: 1.用于制備膠液的錐形瓶體積應(yīng)為膠液體積的2-4倍，緩慢向緩沖液中加入瓊脂糖，邊加邊攪拌，防止瓊脂糖聚集。記錄瓶體和溶液總重量。2.微波爐高火加熱30s，根據(jù)配制的溶液體積調(diào)整加熱時(shí)間。加熱時(shí)間與微波爐、瓶體大小和瓊脂糖濃度有關(guān)。3.搖勻瓊脂糖溶液。4.再次高火加熱30s，搖勻瓊脂糖溶液。5.將溶液再次放回微波爐，高火加熱至沸騰（大約10-35s）。接觸移動(dòng)時(shí)瓊脂糖膠液可能會(huì)劇烈沸騰，小心操作，避免燙傷。從微波爐拿出后，室溫冷卻1-2min，輕輕搖晃使液體里的氣泡溢出。6.重新放回微波爐，高火加

配置培養(yǎng)基過程中常見的問題2024/01/22: 一、培養(yǎng)基顏色不正確（1）含有酸堿指示劑的培養(yǎng)基，若顏色不正確，通常是由于pH不正確導(dǎo)致的，加熱過度、錯(cuò)誤的滅菌方式等都會(huì)導(dǎo)致此項(xiàng)問題。（2）加熱過度導(dǎo)致某些成分分解或糖焦化，如SC培養(yǎng)基(SC增菌液)加熱過度會(huì)變紅，含糖量高的培養(yǎng)基，加熱過度通常會(huì)出現(xiàn)顏色加深，呈焦糖色或棕褐色。（3）某些成分變質(zhì)，如血液久置易變黑，制成的平板顏色偏棕黑色。二、培養(yǎng)基產(chǎn)生沉淀（1）某些培養(yǎng)基原本就含有不溶性沉淀，如TTB，MC培養(yǎng)基等，配方中含有大量不溶性碳酸鈣。（2）滅菌前未充分溶解，如Fraser培養(yǎng)基中含

冰凍切片免疫熒光實(shí)驗(yàn)2024/01/15: 1、冰凍切片固定冰凍切片37℃烘烤10至20分鐘，控干水分，置于4%多聚甲醛固定30min。于PBS緩沖液中晃動(dòng)洗滌3次，每次5分鐘。2、抗原修復(fù)將切片浸沒在升滿EDTA抗原修復(fù)緩沖液（PH8.0）的修復(fù)盆中，置于微波爐內(nèi)進(jìn)行抗原修復(fù)，修復(fù)條件：中火8min至沸——?；?min保溫——中低火7min（整個(gè)過程需防止修復(fù)液過度蒸發(fā)，切勿干片。自然冷卻后，將切片置于PBS緩沖液中。然后在搖床上，晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。3、畫圈血清封閉切片稍甩干后，用組化筆在組織周圍畫圈，滴加組織自發(fā)熒光淬滅劑A

RNA提取原理與詳細(xì)步驟2024/01/08: 原理用Trizol的溶液提取，將總RNA與DNA和蛋白質(zhì)分離。Trizol是一種酸性溶液，含有硫氰酸胍(GITC)、苯酚和氯仿。GITC不可逆地使蛋白質(zhì)和RNase變性。隨后進(jìn)行離心。在酸性條件下，總RNA保留在上層水相中，而大部分DNA和蛋白質(zhì)保留在中間相或下層有機(jī)相中。然后通過用異丙醇沉淀回收總RNA。RNase酶可以通過加入吡咯碳酸二乙酯(DEPC)來滅活。步驟組織：每100毫克新鮮組織加入1毫升TRIzol試劑，使用無菌手術(shù)刀在冰上切碎，并用無菌勻漿器或其他設(shè)備勻漿。細(xì)胞：如果是細(xì)胞培養(yǎng)

蛋白酶K的作用及保存方法2024/01/02: 作用：蛋白酶K在原位雜交技術(shù)中通常用于雜交前的處理，它具有消化包圍靶DNA蛋白質(zhì)的作用，以增強(qiáng)探針與靶核酸結(jié)合的機(jī)會(huì)，提高雜交信號。但蛋白酶K濃度過高、消化時(shí)間過長或孵育溫度過高時(shí)，都會(huì)對細(xì)胞結(jié)構(gòu)有一定的破壞，導(dǎo)致組織切片脫落，細(xì)胞核的消失，從而影響雜交結(jié)果。EDTA緩沖液可以代替蛋白酶K的作用，解決上述出現(xiàn)的問題，并能達(dá)到理想的染色效果。保存方法：保存在-20℃的冰箱里，避免反復(fù)凍融，有效保證12個(gè)月。孵育溫度為55-65℃，理想孵育溫度為58℃，孵育時(shí)間為15分鐘至48小時(shí)，理想孵育時(shí)間為2

免疫熒光實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞爬片如何使用2023/12/25: 首先是玻片的處理，普通的蓋玻片用砂輪劃成自己要的大小的小方塊，先用洗衣粉洗干凈，用水沖靜烤干，然后泡酸過夜，撈酸后流水洗凈，烤干，置于器皿中高壓滅菌，然后再烤箱中大約8小時(shí)烤干備用。爬片可以在培養(yǎng)皿六孔板或24孔板中都可，我選擇在培養(yǎng)皿中爬。一為節(jié)約經(jīng)費(fèi)（培養(yǎng)皿可以重復(fù)利用）二來覺得培養(yǎng)皿口大，操作比較方便。培養(yǎng)皿消毒同上，消毒時(shí)記得消兩把鑷子具體操作是：用胰酶消化好細(xì)胞，充分吹打，使之成單細(xì)胞懸液（注意：這一點(diǎn)很重要，關(guān)系到將來爬出來片子的質(zhì)量）取出消毒的培養(yǎng)皿，可以先加少量培養(yǎng)基（以使玻片與

胎牛血清的功能有哪些？2023/12/20: 胎牛血清應(yīng)取自剖腹產(chǎn)的胎牛;新牛血清取自出生24小時(shí)之內(nèi)的新生牛;小牛血清取自出生10-30天的小牛。胎牛血清是高的，因?yàn)樘ヅ＿€未接觸外界，血清中所含的抗體、補(bǔ)體等對細(xì)胞有害的成分最少。胎牛血清的功能：胎牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中用量最大的天然培養(yǎng)基，含有豐富的細(xì)胞生長必需的營養(yǎng)成份，常用于動(dòng)物細(xì)胞的體外培養(yǎng)，具有極為重要的功能。1.提供對維持細(xì)胞指數(shù)生長的激素，基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物，以及主要的低分子營養(yǎng)物。2.提供結(jié)合蛋白，能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等，能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)

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