肽序列測定全解析：從原理到應用檢測技術服務詳情介紹

肽序列測定（Peptide Sequencing）基于高分辨質(zhì)譜（MS）技術，通過對蛋白酶解產(chǎn)物的肽段進行質(zhì)量分析、碎片解析與生物信息學比對，推導肽段氨基酸序列，從而揭示dànbáizhì（或多肽）中各氨基酸殘基的線性順序，從而解析dànbáizhì的一級結構。肽序列測定不僅可以揭示dànbáizhì的組成與結構，還可定位翻譯后修飾（PTMs）位點，幫助科研人員研究dànbáizhì的功能、相互作用及其在生命活動中的作用，推動蛋白zhìzǔxué、藥物開發(fā)、疾病機制研究。故從原理到應用，掌握肽序列測定是蛋白組學研究、生命科學探索與生物醫(yī)藥開發(fā)中的重要一步。

一、肽序列測定核心原理

1、 蛋白酶解

使用yídànbáiméi、Lys-C、Glu-C等特異性酶將蛋白切割成適合質(zhì)譜分析的肽段。酶解反應控制溫度、pH、酶量及時間，確保生成理想長度和覆蓋度的肽段。

2、離子化與質(zhì)譜檢測

肽段通過電噴霧（ESI）或基質(zhì)輔助激光解吸（MALDI）技術離子化。高分辨質(zhì)譜（如Orbitrap、FTICR）對肽段分子離子進行質(zhì)荷比（m/z）檢測，獲得肽段的整體質(zhì)量信息。

3、母離子選擇與碎片化（MS/MS）

選定特定母離子（前體肽段），在碰撞室中通過碰撞誘導解離（CID）、高能碰撞解離（HCD）或電子轉(zhuǎn)移解離（ETD）生成b、y離子系列，解析肽段序列信息。

4、數(shù)據(jù)分析與序列推導

結合數(shù)據(jù)庫搜索（如Mascot、MaxQuant）或de novo測序算法，解析碎片圖譜，推導肽段氨基酸序列，并定位翻譯后修飾（PTMs）位點。

二、肽序列測定的完整實驗流程

肽測序的實驗步驟主要包括以下八個環(huán)節(jié)：

1、樣品制備與蛋白提取

（1）使用含緩沖鹽、去垢劑和還原劑的裂解液，結合超聲、機械破碎等方法提取蛋白。

（2）還原（DTT）與烷基化（IAA）處理破壞二硫鍵，確保蛋白wánquán展開。

（3） jīngquè定量（BCA/Bradford/紫外法），控制蛋白濃度。

2、 蛋白酶解

（1） 單酶（Trypsin）或多酶（Trypsin+Lys-C、Glu-C）組合。

（2）反應條件：37°C，pH 7.8–8.0，12–16小時。

3、多肽純化與脫鹽

（1）使用C18固相萃?。⊿PE）去除鹽離子和雜質(zhì)。

（2）對復雜樣品采用凝膠切割或SDS-PAGE純化。

4、液相色譜分離（LC）

（1） 采用納流LC（nano-LC）結合C18反相柱，基于疏水性分離肽段。

（2） 梯度優(yōu)化（流動相水-乙腈+酸），提高分辨率和檢測靈敏度。

5、 離子化與質(zhì)譜檢測

（1）在線LC-ESI-MS/MS（液相色譜-電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜）。

（2） 高分辨質(zhì)譜（Orbitrap、FTICR）提供亞ppm質(zhì)量精度。

6、母離子選擇與碎片生成

（1）動態(tài)排除與自動增益控制（AGC），確保檢測低豐度肽段。

（2） 碎片模式：CID（適合常規(guī)碎片）、HCD（豐富碎片）、ETD（保護修飾信息）。

7、數(shù)據(jù)采集與序列解析

（1）數(shù)據(jù)庫搜索：匹配理論碎片譜（質(zhì)量偏差MS1：±10 ppm，MS2：±0.02 Da）。

（2）de novo測序：直接從碎片譜推導未知序列。

（3）多引擎（Mascot、MaxQuant、Byonic）與AI輔助（如Prosit）提高解析效率。

8、修飾定位與多維驗證

結合保留時間、碎片圖譜、同位素分布，定位磷酸化、糖基化等修飾位點。

三、肽序列測定的應用領域與前沿趨勢

1、應用領域

（1） 蛋白zhìzǔxué研究：系統(tǒng)解析細胞、組織、血漿等樣品蛋白組。

（2）翻譯后修飾研究：定位磷酸化、乙?；?、糖基化、泛素化等關鍵修飾位點，揭示功能調(diào)控機制。

（3）新抗原發(fā)現(xiàn)：在腫瘤miǎnyìzhìliáo、疫苗研發(fā)中發(fā)現(xiàn)新抗原肽段。

（4）生物標志物開發(fā)：篩選疾病相關肽段，用于早篩、診斷和療效預測。

（5）生物制藥質(zhì)量控制：驗證蛋白藥物純度與批次一致性。

2、前沿趨勢

（1） 單細胞與空間層次肽測序：推動單細胞、組織空間維度蛋白組學研究。

（2） 多技術融合：結合MS/MS、質(zhì)譜成像（MSI）、原位質(zhì)譜（DESI-MS），實現(xiàn)全景蛋白組解析。

（3） AI與深度學習輔助：提升復雜樣本中肽段鑒定和修飾定位的精度與效率。

作為蛋白組學和多肽測序領域的lǐngxiān服務商，百泰派克生物科技依托*的高分辨質(zhì)譜平臺（Orbitrap Fusion Lumos、Q-Exactive HF-X、MALDI-TOF/TOF）、自主開發(fā)的樣品制備和數(shù)據(jù)分析流程，為全球科研人員和企業(yè)客戶提供：從樣品到結果的全鏈路多肽測序解決方案； jīngzhǔn檢測低豐度、多修飾肽段，提升數(shù)據(jù)質(zhì)量；AI與多引擎算法（MaxQuant、Byonic、Mascot）提高解析準確率與效率； zhuānyè團隊定制化支持，解決復雜樣本中的多肽測序難題。

百泰派克生物科技特色項目

一、蛋白測序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統(tǒng)對dànbáizhì序列進行分析，提供基于質(zhì)譜的蛋白測序分析服務，包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析，Nduāncèxù，Cduāncèxù和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務。對于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務，對蛋白序列進行分析。

※服務優(yōu)勢：

1.采用目前世界上*的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實現(xiàn)對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;

4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測;

6.測序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、蛋白zhìzǔxué

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺結合Nano-LC，提供定量蛋白zhìzǔxué、bǎxiàngdàn白zhìzǔxué、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種蛋白zhìzǔxué分析服務。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白zhìzǔxué服務，助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫(yī)學及高通量修飾組學等研究工作。

※服務優(yōu)勢：

1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規(guī)模實驗分析，發(fā)現(xiàn)新的生物標記物;

2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標記方法，適用于分析組織、細胞、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高，實驗結果重復度高;

4.可檢測較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學分析，分析更系統(tǒng)準確。

三、單細胞質(zhì)譜流式技術分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進行單細胞質(zhì)譜流式技術分析，采用金屬元素標記物（通常是金屬元素標記的特異抗體）標記細胞表面和內(nèi)部的分子，然后用流式細胞原理分離單個細胞，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個細胞的原子質(zhì)量譜，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細胞表面和內(nèi)部的信號分子表達量。

※服務優(yōu)勢：

1.技術*，*技術空白

采用金屬標記抗體技術，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問題。可在單細胞層面上對多種指標同時進行表征，百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。

2.分析數(shù)量大，成本較低

單細胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個左右，而流式質(zhì)譜技術一次（單樣本）就可分析至少10^5的細胞，實現(xiàn)了數(shù)量級的提高，且成本不高于單細胞RNAseq。

3.應用前景大

①流式質(zhì)譜結果可以給出細胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標簽技術與其他技術結合會有新應用方向。除常規(guī)蛋白外，質(zhì)譜流式細胞技術還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測細胞存活率、細胞大小、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現(xiàn)10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析，可從zuì小的樣品材料中進行可重復的識別和定量。該服務可以應用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術，MALDI TOF，高效色譜分離技術，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結構分析，到產(chǎn)品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì)。

百泰派克生物科技七大檢測平臺

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質(zhì)譜多組學優(yōu)質(zhì)服務商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導原則，通過CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認證，建立了完備的質(zhì)量體系，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份，設備定期計量/期間核查，軟件審計追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術服務，支持新藥研發(fā)、藥物申報注冊和生產(chǎn)放行。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎的CRO檢測分析服務；

2.獲國家CNAS實驗室認可，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務；

3.業(yè)務范圍覆蓋蛋白zhìzǔxué、多肽組學、代謝組學、生物藥物表征、單細胞分析、單細胞質(zhì)譜流式、生信云分析以及多組學生物質(zhì)譜整合分析等；

4.七大質(zhì)量控制檢測平臺，滿足您一站式服務需求；

5.服務3000+企業(yè)，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務!

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