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定量質譜法(Quantitative Mass Spectrometry)主要用于測量生物樣品中dànbáizhì或其他分子成分的含量,以揭示其在特定生物過程或疾病狀態(tài)中的作用。該方法通過質譜儀對目標分子的質量、豐度以及相關特性進行高靈敏度的檢測,并結合標準化的定量手段,實現對復雜生物體系中分子信息的jīngzhǔn測量。與傳統(tǒng)的定量方法(如酶聯免疫吸附試驗或dànbáizhì免疫印跡)相比,該技術的dútè優(yōu)勢在于其高特異性、寬動態(tài)范圍和高通量特性,能夠在一次實驗中同時分析數百至數千種dànbáizhì或代謝物。它已被廣泛應用于生命科學的多個領域,包括疾病機制研究、藥物靶點篩選、生物標志物發(fā)現以及臨床診斷開發(fā)。具體而言,這項技術能夠用于分析dànbáizhì的表達水平、翻譯后修飾(如磷酸化、乙?;龋┑膭討B(tài)變化、dànbáizhì復合物的組成以及它們在不同生物條件下的變化規(guī)律。例如,在腫瘤研究中,研究者通過定量質譜法發(fā)現了一系列特異性高、診斷性能優(yōu)異的癌癥標志物,為早期診斷和治療方案優(yōu)化提供了可靠依據。此外,定量質譜法也能夠揭示dànbáizhì相互作用網絡及信號通路變化,為復雜疾病的分子機制研究提供重要支持。
一、定量質譜法的技術原理及關鍵步驟
定量質譜法的核心原理在于,通過質譜儀對生物分子進行jīngzhǔn的質量測定,并通過對質譜信號的處理和標準化,實現分子濃度的定量。一般來說,該方法包含以下關鍵步驟:
1. 樣品制備
生物樣品的復雜性是質譜分析的主要挑戰(zhàn),因此樣品制備通常包括dànbáizhì的提取、酶解為肽段,以及對樣品中雜質的去除。
2. 標記與非biāojìdìng量
根據研究需求,可以選擇標記或非標記策略。標記方法包括穩(wěn)定同位素標記(如SILAC)、同位素編碼標簽(iTRAQ/TMT)等,通過化學修飾或代謝同位素摻入實現不同樣品的區(qū)分。非標記方法則基于質譜信號的峰強度或面積進行比較,適用于高通量篩選研究。
3. 液相色譜分離
為提高分析的靈敏度和分辨率,通常采用液相色譜(LC)對樣品中的復雜肽段進行分離,再將分離后的肽段送入質譜儀進行檢測。
4. 質譜檢測與數據采集
質譜儀通過對肽段的電離、質量分析和離子檢測生成質譜圖,記錄每種肽段的質量和豐度信息。
5. 數據分析與定量
通過zhuānyè的生物信息學工具對質譜數據進行處理,可計算每個目標分子的豐度,生成直觀的定量結果。
二、技術應用及意義
定量質譜法已廣泛應用于dànbáizhì組學研究、藥物研發(fā)及臨床診斷領域。在基礎研究中,它能夠揭示細胞在不同狀態(tài)下的dànbáizhì表達差異及功能變化;在藥物開發(fā)中,該技術能夠快速篩選潛在的藥物靶點,評估藥物與靶點的結合能力,并監(jiān)測藥物在體內的代謝路徑;在臨床診斷中,該技術對早期疾病標志物的發(fā)現與驗證有著bùkětìdài的作用。例如,利用定量質譜法進行翻譯后修飾研究,可以解碼細胞信號傳導機制,為個性化醫(yī)療提供重要指導。
三、注意事項與常見問題
在實際操作中,定量質譜法的準確性和可靠性依賴于樣品質量、實驗設計和數據處理的規(guī)范性。樣品制備過程中可能引入的污染和變性風險需特別注意,同時質譜儀的校準和穩(wěn)定性對實驗結果的質量至關重要。此外,數據分析中,肽段識別與定量算法的優(yōu)化直接影響到定量結果的準確性。為確保研究結果的可靠性,建議研究者在關鍵步驟中嚴格執(zhí)行標準化操作流程。
百泰派克生物科技為客戶提供定量蛋白組分析的全流程支持服務,選擇百泰派克,您將獲得高質量的技術支持與數據交付,助力實現科研目標,推動科學發(fā)現邁向新的高度。
百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統(tǒng)對dànbáizhì序列進行分析,提供基于質譜的蛋白測序分析服務,包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析,Nduāncèxù,Cduāncèxù和全序列分析,以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務。對于未知理論序列的dànbáizhì,提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務,對蛋白序列進行分析。
※服務優(yōu)勢:
1.采用目前世界上優(yōu)良的質譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;
2.可實現對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;
3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;
4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;
5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug,即可完成檢測;
6.測序不受N端封閉,PEC和和糖基化等N端修飾的影響。
百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質譜平臺結合Nano-LC,提供定量dànbáizhì組學、靶向dànbáizhì組學、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種dànbáizhì組學分析服務。此外,百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學服務,助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫(yī)學及高通量修飾組學等研究工作。
※服務優(yōu)勢:
1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規(guī)模實驗分析,發(fā)現新的生物標記物;
2.體內體外多種dànbáizhì標記方法,適用于分析組織、細胞、血液等多種樣品;
3.質譜分析靈敏度高,實驗結果重復度高;
4.可檢測較低豐度蛋白,線性范圍廣;
5.zhuānyè生物信息學分析,分析更系統(tǒng)準確。
百泰派克生物科技采用Fluidigm質譜流式系統(tǒng)進行單細胞質譜流式技術分析,采用金屬元素標記物(通常是金屬元素標記的特異抗體)標記細胞表面和內部的分子,然后用流式細胞原理分離單個細胞,再用電感耦合等離子體質譜(ICP-MS)分析單個細胞的原子質量譜,zuì后將原子質量譜數據轉換為細胞表面和內部的信號分子表達量。
※服務優(yōu)勢:
1.技術優(yōu)良,*技術空白
采用金屬標記抗體技術,避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問題。可在單細胞層面上對多種指標同時進行表征,百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。
2.分析數量大,成本較低
單細胞RNAseq受成本等因素限制,所有樣本細胞匯總的分析數目一般在2x10^4個左右,而流式質譜技術一次(單樣本)就可分析至少10^5的細胞,實現了數量級的提高,且成本不高于單細胞RNAseq。
3.應用前景大
①流式質譜結果可以給出細胞亞群的變化,在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景;
②將金屬標簽技術與其他技術結合會有新應用方向。除常規(guī)蛋白外,質譜流式細胞技術還可用于蛋白翻譯后修飾;
③可檢測細胞存活率、細胞大小、mRNA轉錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。
百泰派克生物科技的基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發(fā)現一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析,可從zuì小的樣品材料中進行可重復的識別和定量。該服務可以應用于大規(guī)模的研究,旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案,深入挖掘未知的靶標。
百泰派克基于高分辨率質譜技術,MALDI TOF,高效色譜分離技術,提供一系列完善的生物藥物分析方案,從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結構分析,到產品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質生物藥物分析服務,幫助生物醫(yī)藥生產商提高生物藥物品質。
北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導原則,通過CNAS/ISO9001雙重質量體系認證,建立了完備的質量體系,數據冷熱/異地備份,設備定期計量/期間核查,軟件審計追蹤,為客戶提供一體化解決方案和技術服務,支持新藥研發(fā)、藥物申報注冊和生產放行。
1.公司采用ISO9001質量控制體系,zhuānyè提供以質譜為基礎的CRO檢測分析服務;
2.獲國家CNAS實驗室認可,為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質量研究服務;
3.業(yè)務范圍覆蓋dànbáizhì組學、多肽組學、代謝組學、生物藥物表征、單細胞分析、單細胞質譜流式、生信云分析以及多組學生物質譜整合分析等;
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