無(wú)標(biāo)記定量方法：基于質(zhì)譜的蛋白質(zhì)定量分析策略檢測(cè)技術(shù)服務(wù)詳情介紹

在現(xiàn)代生命科學(xué)研究中，dànbáizhì定量是深入理解生理功能、疾病機(jī)制及藥物靶點(diǎn)的關(guān)鍵手段。不同于僅檢測(cè)蛋白是否存在，定量分析能揭示蛋白表達(dá)水平的動(dòng)態(tài)變化，對(duì)于生物標(biāo)志物篩選、疾病亞型分類和機(jī)制研究具有重要價(jià)值。質(zhì)譜（Mass Spectrometry, MS）作為dànbáizhì組學(xué)的核心技術(shù)，其定量策略大致可分為標(biāo)記定量（Label-Based）和無(wú)標(biāo)記定量（Label-Free）。其中，無(wú)標(biāo)記定量方法因其流程簡(jiǎn)化、樣本適應(yīng)性強(qiáng)和成本控制優(yōu)勢(shì)，在近年來(lái)獲得了廣泛關(guān)注與應(yīng)用。

一、什么是無(wú)標(biāo)記定量（Label-Free Quantification, LFQ）？

1、原理概述

無(wú)標(biāo)記定量是不依賴任何同位素或化學(xué)標(biāo)記的質(zhì)譜定量策略。研究者直接對(duì)不同樣本中的蛋白酶解產(chǎn)物進(jìn)行質(zhì)譜分析，利用MS1階段的離子峰強(qiáng)度或肽段譜圖數(shù)量（spectral counting）來(lái)估算dànbáizhì的相對(duì)豐度。與標(biāo)記定量方法相比，LFQ避免了標(biāo)記步驟的干擾和成本，提高了實(shí)驗(yàn)的靈活性，尤其適合探索性研究和臨床大隊(duì)列樣本的初步篩查。

2、核心優(yōu)勢(shì)

• 無(wú)需特殊試劑：省去了標(biāo)記試劑的采購(gòu)和優(yōu)化步驟，簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)流程。

• 樣本類型廣泛：適用于細(xì)胞、組織、血清、尿液等復(fù)雜樣品。

• 成本效益高：更適合大樣本量、多條件的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。

• 方法重復(fù)性強(qiáng)：在穩(wěn)定儀器平臺(tái)和優(yōu)化流程支持下，數(shù)據(jù)具有良好一致性。

二、LFQ實(shí)驗(yàn)流程及關(guān)鍵步驟

1、樣品處理與蛋白酶解

LFQ對(duì)實(shí)驗(yàn)前處理的一致性要求較高。樣品需在相同條件下提取蛋白、定量、還原烷基化，并使用yídànbáiméi進(jìn)行規(guī)范酶解。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的每一步都需嚴(yán)格控制批間差異，以避免非生物學(xué)變異干擾后續(xù)分析。

2、LC-MS/MS數(shù)據(jù)采集

常用的數(shù)據(jù)采集模式包括DDA（Data-Dependent Acquisition）與DIA（Data-Independent Acquisition）：

• DDA模式依賴于質(zhì)譜對(duì)高強(qiáng)度信號(hào)的實(shí)時(shí)選擇，適合標(biāo)準(zhǔn)dànbáizhì組分析；

• DIA模式將所有肽段離子信息連續(xù)采集，提高了低豐度蛋白的覆蓋率與數(shù)據(jù)一致性。

高分辨率質(zhì)譜平臺(tái)（如Orbitrap、TIMS-TOF）對(duì)無(wú)標(biāo)記定量的準(zhǔn)確性和深度具有決定性影響。

3、數(shù)據(jù)處理與定量分析

主流LFQ定量分析軟件如MaxQuant、Proteome Discoverer、DIA-NN等，提供從原始數(shù)據(jù)讀取、峰面積提取、歸一化到統(tǒng)計(jì)分析的一體化流程。

??數(shù)據(jù)處理需重點(diǎn)關(guān)注以下幾個(gè)方面：

• 對(duì)齊和歸一化：不同樣本間保留時(shí)間的對(duì)齊及強(qiáng)度歸一化，降低系統(tǒng)偏差；

• 缺失值處理：合理*或剔除缺失值，避免誤判差異蛋白；

• 統(tǒng)計(jì)分析：常用t檢驗(yàn)、ANOVA等方法識(shí)別顯著差異蛋白；

• 功能注釋：結(jié)合GO/KEGG等數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行富集分析，挖掘潛在生物學(xué)意義。

三、無(wú)標(biāo)記定量方法的典型應(yīng)用場(chǎng)景

無(wú)標(biāo)記定量在生物醫(yī)學(xué)研究中有廣泛用途，尤其在以下領(lǐng)域表現(xiàn)突出：

• 腫瘤組織蛋白表達(dá)分析：比較癌癥患者腫瘤組織與鄰近正常組織的蛋白表達(dá)差異，初步篩選潛在生物標(biāo)志物。

• 藥物處理前后蛋白變化監(jiān)測(cè)：評(píng)估藥物干預(yù)對(duì)細(xì)胞蛋白表達(dá)的影響，輔助解釋藥物作用機(jī)制與副作用風(fēng)險(xiǎn)。

• 疾病亞型分型研究：分析不同疾病亞型間的dànbáizhì組差異，為個(gè)性化治療提供數(shù)據(jù)支持。

無(wú)標(biāo)記定量作為蛋白組學(xué)中高效、靈活的定量手段，正逐步從實(shí)驗(yàn)室研究走向轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)與產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用。它降低了質(zhì)譜定量的技術(shù)門檻，為更多生命科學(xué)研究者打開了蛋白表達(dá)量化的大門。在研究不斷精細(xì)化、樣本來(lái)源日趨復(fù)雜的jīntiān，LFQ的策略與工具也在持續(xù)演進(jìn)?？茖W(xué)家需要結(jié)合研究目標(biāo)、樣本條件與資源狀況，合理選擇zuì適合的定量方法。百泰派克生物科技面向科研與產(chǎn)業(yè)客戶提供高質(zhì)量的定量蛋白組分析服務(wù)，助力科研從數(shù)據(jù)走向發(fā)現(xiàn)。

百泰派克生物科技特色項(xiàng)目

一、蛋白測(cè)序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測(cè)序系統(tǒng)對(duì)dànbáizhì序列進(jìn)行分析，提供基于質(zhì)譜的蛋白測(cè)序分析服務(wù)，包括對(duì)dànbáizhì的氨基酸組成分析，Nduāncèxù，Cduāncèxù和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務(wù)。對(duì)于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測(cè)序法的dànbáizhì從頭測(cè)序服務(wù)，對(duì)蛋白序列進(jìn)行分析。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1.采用目前世界上優(yōu)良的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實(shí)現(xiàn)對(duì)所測(cè)定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測(cè)定蛋白N端多達(dá) 70個(gè)氨基酸序列;

4.可測(cè)定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測(cè);

6.測(cè)序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、dànbáizhì組學(xué)

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺(tái)結(jié)合Nano-LC，提供定量dànbáizhì組學(xué)、靶向dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、翻譯后修飾蛋白組學(xué)等多種dànbáizhì組學(xué)分析服務(wù)。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學(xué)服務(wù)，助力微量樣本蛋白組學(xué)、大樣本群醫(yī)學(xué)及高通量修飾組學(xué)等研究工作。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1 .高通量定量蛋白分析:多對(duì)照組大規(guī)模實(shí)驗(yàn)分析，發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)記物;

2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標(biāo)記方法，適用于分析組織、細(xì)胞、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高，實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)度高;

4.可檢測(cè)較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學(xué)分析，分析更系統(tǒng)準(zhǔn)確。

三、單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進(jìn)行單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析，采用金屬元素標(biāo)記物（通常是金屬元素標(biāo)記的特異抗體）標(biāo)記細(xì)胞表面和內(nèi)部的分子，然后用流式細(xì)胞原理分離單個(gè)細(xì)胞，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個(gè)細(xì)胞的原子質(zhì)量譜，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細(xì)胞表面和內(nèi)部的信號(hào)分子表達(dá)量。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1.技術(shù)優(yōu)良，*技術(shù)空白

采用金屬標(biāo)記抗體技術(shù)，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問題?？稍趩渭?xì)胞層面上對(duì)多種指標(biāo)同時(shí)進(jìn)行表征，百泰派克生物科技可做到同時(shí)檢測(cè)51個(gè)目標(biāo)蛋白。

2.分析數(shù)量大，成本較低

單細(xì)胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細(xì)胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個(gè)左右，而流式質(zhì)譜技術(shù)一次（單樣本）就可分析至少10^5的細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)了數(shù)量級(jí)的提高，且成本不高于單細(xì)胞RNAseq。

3.應(yīng)用前景大

①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細(xì)胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機(jī)制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標(biāo)簽技術(shù)與其他技術(shù)結(jié)合會(huì)有新應(yīng)用方向。除常規(guī)蛋白外，質(zhì)譜流式細(xì)胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測(cè)細(xì)胞存活率、細(xì)胞大小、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達(dá)量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實(shí)現(xiàn)10,000個(gè)以上I型多肽和10,000個(gè)以上II型多肽的鑒定和識(shí)別。通過(guò)我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學(xué)分析平臺(tái)進(jìn)行免疫肽組學(xué)分析，可從zuì小的樣品材料中進(jìn)行可重復(fù)的識(shí)別和定量。該服務(wù)可以應(yīng)用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標(biāo)。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術(shù)，MALDI TOF，高效色譜分離技術(shù)，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級(jí)結(jié)構(gòu)分析，到產(chǎn)品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務(wù)，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì)。

百泰派克生物科技七大檢測(cè)平臺(tái)

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質(zhì)譜多組學(xué)優(yōu)質(zhì)服務(wù)商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測(cè)和項(xiàng)目驗(yàn)證等zhuānyè服務(wù)。公司實(shí)驗(yàn)室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導(dǎo)原則，通過(guò)CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認(rèn)證，建立了完備的質(zhì)量體系，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份，設(shè)備定期計(jì)量/期間核查，軟件審計(jì)追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術(shù)服務(wù)，支持新藥研發(fā)、藥物申報(bào)注冊(cè)和生產(chǎn)放行。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的CRO檢測(cè)分析服務(wù)；

2.獲國(guó)家CNAS實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務(wù)；

3.業(yè)務(wù)范圍覆蓋dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、代謝組學(xué)、生物藥物表征、單細(xì)胞分析、單細(xì)胞質(zhì)譜流式、生信云分析以及多組學(xué)生物質(zhì)譜整合分析等；

4.七大質(zhì)量控制檢測(cè)平臺(tái)，滿足您一站式服務(wù)需求；

5.服務(wù)3000+企業(yè)，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務(wù)!

無(wú)標(biāo)記定量方法：基于質(zhì)譜的蛋白質(zhì)定量分析策略檢測(cè)技術(shù)服務(wù)詳情介紹