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北京百泰派克生物科技有限公司資料大小
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25次單克隆抗體(mAbs)由單一的B淋巴細(xì)胞克隆產(chǎn)生,它們與特定的抗原有高度特異性的結(jié)合。除了dànbáizhì結(jié)構(gòu),單克隆抗體的糖鏈也對(duì)其功能、生物分布、免疫原性和穩(wěn)定性有重要影響。因此,對(duì)單克隆抗體的糖型進(jìn)行分析是藥物開發(fā)中的一個(gè)關(guān)鍵步驟。
以下是常用的單克隆抗體糖型分析方法:
1.毛細(xì)管電泳-質(zhì)譜聯(lián)用(CE-MS):
這種方法特別適合于分析N-糖型。毛細(xì)管電泳用于分離糖型,而質(zhì)譜用于結(jié)構(gòu)鑒定。
2.液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS):
可以用于分析N-糖和O-糖。首先利用酶解或化學(xué)方法從抗體上釋放糖,然后使用液相色譜進(jìn)行分離和質(zhì)譜進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。
3.熒光標(biāo)記和HPLC分析:
糖鏈?zhǔn)紫缺会尫挪⑴c熒光標(biāo)簽反應(yīng),然后使用HPLC進(jìn)行分離和定量。
4.糖凝集素結(jié)合測(cè)定(Lectin Blotting):
使用特定的糖凝集素與特定糖結(jié)構(gòu)結(jié)合,可以用于鑒定特定的糖型結(jié)構(gòu)。
5.NMR(核磁共振):
可以提供關(guān)于糖結(jié)構(gòu)的詳細(xì)信息,但需要較大的樣品量,并且技術(shù)要求較高。
6.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) (ELISA):
使用特定的糖型結(jié)合蛋白或抗體來(lái)檢測(cè)和定量糖鏈。
每種技術(shù)都有其優(yōu)勢(shì)和限制。選擇哪種方法通常取決于分析的目的、樣品的可用量、所需的靈敏度和分辨率以及可用的儀器設(shè)備。在藥物開發(fā)的不同階段,可能需要使用多種技術(shù)來(lái)全面評(píng)估產(chǎn)品的糖型異質(zhì)性和一致性。
圖1
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