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蛋白磷酸化是細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中的核心事件,對于許多生物過程,如細胞周期、增殖、分化和代謝等都具有至關(guān)重要的作用。為了深入理解這些過程,確定哪些蛋白被磷酸化,以及準確的磷酸化位點是關(guān)鍵的。近年來,科研界已經(jīng)開發(fā)出了多種技術(shù)來解決這一挑戰(zhàn)。
圖1. 酸化定量蛋白組學(xué)分析流程
其中,質(zhì)譜技術(shù)(MS)是目前zuì為先進和廣泛應(yīng)用的方法。經(jīng)過特定的樣品準備流程,磷酸化的肽段可以被富集并通過質(zhì)譜分析,這不僅能鑒定出磷酸化蛋白,更能jīngquè地確定磷酸化位點。隨著質(zhì)譜技術(shù)的進步,對于單一樣品,我們現(xiàn)在甚至可以檢測到數(shù)千個磷酸化位點。
除了質(zhì)譜技術(shù),免疫印跡法(Western Blot)也是常用的技術(shù)。通過使用針對特定磷酸化位點的抗體,我們可以直接檢測目標蛋白的磷酸化狀態(tài)。這種方法適用于特定的磷酸化事件,但可能不適合大規(guī)模篩查。
磷酸化酶底物陣列是另一種有趣的技術(shù)。這種方法通過固定成千上萬的合成肽段在一個芯片上,并使用放射性或熒光標記的蛋白激酶來檢測磷酸化事件。這種方法快速且具有高通量,但可能對于某些特定的磷酸化事件不夠敏感。
盡管上述技術(shù)各有優(yōu)缺點,但結(jié)合使用可以為研究者提供全面的磷酸化圖譜。隨著技術(shù)的進步,我們對蛋白磷酸化網(wǎng)絡(luò)的了解也日益加深,這為開發(fā)新的治療策略、藥物靶點和生物標志物提供了巨大的機會。
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