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PriCells: 混合劑技術(shù)純化人外周血單核細(xì)胞

時間:2021-11-2 閱讀:215
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PriCells: 混合劑技術(shù)純化人外周血單核細(xì)胞                                                              


試劑和器材: 
1. 抗凝血劑:100mmol/L 乙二胺四乙酸或38g/L檸檬酸鈉;
2. Hepes緩沖生理鹽水(HBS):8.5g/L NaCl、10mmol/L Hepes-NaOH,pH7.4;
3. OptiPrepTM;
4. 臺式低速離心機;
5. 巴斯德吸管(短型和長型);


實驗方法:
1. 用乙二胺四乙酸(2mmol/L終濃度)或檸檬酸鈉(38g/L終濃度)作為抗凝劑來收集靜脈血;
2. 在合適的帶帽離心管(可容納5—10ml樣品的15ml管)中,全血與OptiPrepTM(分別為10倍體積和1.25倍體積)輕柔但*地混合(反復(fù)顛倒幾下);
3. 在頂端加入約0.5ml Hepes緩沖生理鹽水,并且在20℃,1500g下離心30min;
4. 用緩慢減速程序或不制動的方法使轉(zhuǎn)子減速;
5. 從凹液面向下吸取外周血單核細(xì)胞直至距細(xì)胞沉淀約1cm處;
6. 用2倍體積的Hepes緩沖生理鹽水稀釋收集到的外周血單核細(xì)胞,再在250g—500g離心5—10min以沉淀細(xì)胞;

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