PriCells: 細(xì)胞計(jì)數(shù)和活力測(cè)定                                                                         

器材和試劑： 
1. 倒置相差顯微鏡，具有10×物鏡；
2. 標(biāo)注體積刻度的試管（圓錐形底）；
3. 改良的Neubauer血細(xì)胞計(jì)數(shù)器；
4. 計(jì)數(shù)器蓋玻片；
5. 袖珍管或等體積的塑料容器，如試管或離心管；
6. 巴斯德吸管（短型和長(zhǎng)型）；
7. 可調(diào)體積的微量加樣器（100—250μl）；
8. 無(wú)菌槍尖；
9. 無(wú)菌刻度吸管（1—10ml）、洗耳球或自動(dòng)移液裝置；
10. 10g/L臺(tái)盼藍(lán)；
11. Hanks平衡鹽溶液或儲(chǔ)存培養(yǎng)基；

實(shí)驗(yàn)方法：
1. 準(zhǔn)備計(jì)數(shù)器。輕輕地濕潤(rùn)中央網(wǎng)絡(luò)區(qū)域的各個(gè)邊，用兩個(gè)拇指的壓力使蓋玻片水平地從邊緣滑動(dòng)。當(dāng)在中央標(biāo)記區(qū)臨近的任何一邊能看見(jiàn)牛頓環(huán)（彩虹色）時(shí)，蓋玻片位置正確；
2. 1000r/min離心細(xì)胞懸液5min，棄上清。將細(xì)胞重懸于已知體積的培養(yǎng)基中；
3. 用巴斯德吸管來(lái)回吹打細(xì)胞懸液幾次，混勻，確定細(xì)胞均勻分散；
4. 用微量加樣器吸取250μl混勻的細(xì)胞懸液，轉(zhuǎn)入袖珍管。用一個(gè)干凈的加樣器尖吸取等體積臺(tái)盼藍(lán)溶液加入細(xì)胞懸液中。用拇指和食指快速輕彈袖珍管幾次使之混勻。立即用一個(gè)巴斯德吸管尖吸取一滴細(xì)胞懸液，輕輕地將其滴在臨近計(jì)數(shù)區(qū)的蓋玻片邊緣上。毛細(xì)作用使細(xì)胞懸液移到蓋玻片下面，填滿(mǎn)中央和邊緣溝之間的區(qū)域。在蓋玻片的另一邊重復(fù)該操作；
5. 將計(jì)數(shù)器放于顯微鏡載物臺(tái)上，移動(dòng)載物臺(tái)直到將三條平行線(xiàn)界定的25個(gè)小方格的網(wǎng)格位于中央為止。計(jì)25個(gè)小方格內(nèi)的總細(xì)胞數(shù)（染色和未染色的）（它們每一個(gè)又再分為16個(gè)更小的方格便于計(jì)數(shù)）。為了避免將同一個(gè)細(xì)胞重復(fù)計(jì)數(shù)，只數(shù)三線(xiàn)隔開(kāi)的壓上線(xiàn)、左手線(xiàn)和中央?yún)^(qū)的細(xì)胞。如果細(xì)胞數(shù)大可用一個(gè)計(jì)數(shù)器；
6. 數(shù)完總細(xì)胞數(shù)時(shí)，在相同區(qū)域重復(fù)計(jì)數(shù)，只數(shù)藍(lán)染（死）的細(xì)胞。計(jì)算死細(xì)胞的平均數(shù)，從總細(xì)胞數(shù)中扣除死細(xì)胞數(shù)得到活細(xì)胞數(shù)；
7. 應(yīng)用以下公式計(jì)算細(xì)胞群的存活率：
存活率=活細(xì)胞數(shù)/（活細(xì)胞數(shù)+死細(xì)胞數(shù)）×100%
8. 細(xì)胞懸液的細(xì)胞濃度按照一下方法計(jì)算：
1個(gè)大格（25個(gè)小格）的平均細(xì)胞數(shù)×10⁴=細(xì)胞數(shù)/ml
9. 細(xì)胞懸液總細(xì)胞數(shù)=細(xì)胞數(shù)/ml×總體積
10. 細(xì)胞懸液總的活細(xì)胞數(shù)=總細(xì)胞數(shù)×存活率（%）