實驗室細(xì)胞培養(yǎng)中常見的生物污染包括細(xì)菌污染、霉菌污染、支原體污染、黑點污染、真菌污染和原生動物污染。

1、細(xì)菌污染

細(xì)菌在普通倒置顯微鏡下呈黑色和細(xì)砂狀。根據(jù)感染菌的種類不同，可能會呈現(xiàn)不同的形狀，培養(yǎng)液一般會變得渾濁、黃色，對細(xì)胞生長有明顯影響。

2、霉菌污染

正常情況下，培養(yǎng)基在 37℃ 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)兩三天，在倒置顯微鏡下仍保持透明，無雜質(zhì)。一旦出現(xiàn)絮狀雜質(zhì)，顯微鏡下可見絲狀和團(tuán)塊狀漂浮物，菌絲明顯。此時，雖然細(xì)胞仍在生長，但它們的生命狀態(tài)會在長時間后逐漸惡化。

3、支原體污染

支原體是隱蔽的污染物，不能通過過濾去除。顯微鏡下沒有任何可見的支原體污染跡象，比如細(xì)胞病變和濁度或 pH 值變化（即使在嚴(yán)重污染的培養(yǎng)基中），這樣就會導(dǎo)致我們產(chǎn)生錯誤的安全感。而在牛血清中，支原體是最常見的微生物之一。

4、黑點污染

黑色的游動點能穿透濾膜并在空氣中擴(kuò)散。它們在低倍鏡下顯示為黑色圓點，在高倍鏡下顯示為可移動的黑色斑點。培養(yǎng)液也不渾濁，一般影響較小，因此細(xì)胞仍可使用。通常，黑點污染后，細(xì)胞生長良好，運動物體無明顯增加，培養(yǎng)基的顏色和透明度無明顯變化。在同一批血清培養(yǎng)的細(xì)胞中也可以發(fā)現(xiàn)類似的現(xiàn)象。

5、真菌污染

真菌污染后，培養(yǎng)基一般清澈，保持原色。細(xì)絲可以在顯微鏡下觀察到。最初，一些真菌類似于死細(xì)胞碎片，但其中許多清晰可見，看起來像珊瑚，比較容易區(qū)分。此外，它們會慢慢長出細(xì)細(xì)的黑色細(xì)絲，因為它們生長得比較慢，不像細(xì)菌那樣容易被發(fā)現(xiàn)，一旦發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基被污染，它們將很難存活。

6、原生動物污染

原生動物污染后，細(xì)胞培養(yǎng)基變得輕微渾濁。在顯微鏡下，大量的小點來回移動。雖然此時細(xì)胞仍能生長，但繁殖速度減慢，細(xì)胞生長狀態(tài)不好，邊緣不清，變得不透明。原生動物與細(xì)胞形成共生關(guān)系。同時，原生動物與細(xì)胞競爭營養(yǎng)。這種共生現(xiàn)象非常普遍，但以細(xì)胞為主，因為原生動物的數(shù)量相對較少，因而對細(xì)胞的正常生長沒有影響，只有當(dāng)它們達(dá)到一定數(shù)量時，才最終爆發(fā)成為惡性循環(huán)。