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Revvity 影像技術(shù)助力抗腫瘤藥物研發(fā)
今年我們非常榮幸請(qǐng)到圣裘德兒童研究醫(yī)院Dr.JessicaWagner和?？怂拐彩堪┌Y中心的Dr.HarveyHensley為大家分享:使用分子影像技術(shù)在體內(nèi)和體外水平揭示小分子藥物ONC201的抗腫瘤活性和免疫刺激作用。以下是報(bào)告的精彩內(nèi)容：ONC201背景介紹在2013年以前，美國(guó)濱州州立大學(xué)(PennStateUniversity)和濱州赫爾歇醫(yī)療中心(PennStateHersheyMedicalCenter)的研究人員，通過(guò)篩選NCI的免費(fèi)分子庫(kù)得到是一種高效的抗癌分子，即ONC201 -
小動(dòng)物活體成像技術(shù)在外泌體研究中的進(jìn)展
Exosome(外泌體)1983年于綿羊網(wǎng)織紅細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn)，是活細(xì)胞分泌的直徑約為30-150nm的膜性囊泡，包含多種活性分子，如蛋白質(zhì)、脂肪和核酸（mRNA、miRNA及其它非編碼RNA）等，能作為信號(hào)分子傳遞給靶細(xì)胞，從而介導(dǎo)細(xì)胞間的物質(zhì)傳遞與信息交流。天然存在于體液中，包括血液、唾液、尿液和母乳等。外泌體miRNA通過(guò)循環(huán)囊泡傳遞信息，被認(rèn)為是細(xì)胞間信號(hào)交流的第三種途徑。除了miRNA外，研究表明外泌體中的circRNA、lncRNA和蛋白質(zhì)也參與細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)調(diào)控。2013年，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞囊泡 -
小動(dòng)物活體光學(xué)成像技術(shù)在感染性疾病研究中的應(yīng)（三）
（接上篇）三.抗生素及疫苗等抗感染藥物研發(fā)應(yīng)用傳統(tǒng)方式對(duì)抗生素、疫苗等抗感染藥物在活體水平的研發(fā)篩選，需要在給藥后處死小鼠，取出感染部位，再通過(guò)PCR、菌落計(jì)數(shù)、切片觀察等方法對(duì)藥物治療效果進(jìn)行評(píng)價(jià)。這些方式需要耗費(fèi)大量實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、進(jìn)行繁瑣的實(shí)驗(yàn)操作，很難實(shí)現(xiàn)高通量篩選，且不能利用同一只動(dòng)物從頭到尾的獲取實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，因此很難獲取準(zhǔn)確的重復(fù)性數(shù)據(jù)。小動(dòng)物活體光學(xué)成像技術(shù)是一種非侵入式活體觀測(cè)技術(shù)，無(wú)需在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中處死老鼠，并且可以使用同一批老鼠完成不同時(shí)間點(diǎn)的觀測(cè)，因此已廣泛應(yīng)用于抗感染藥物的研發(fā)?？?/div>小動(dòng)物活體光學(xué)成像技術(shù)在感染性疾病研究中的應(yīng)（二）
（接上期）二.監(jiān)測(cè)抗感染免疫反應(yīng)在利用小動(dòng)物活體光學(xué)成像技術(shù)觀測(cè)病原體在動(dòng)物體內(nèi)感染情況的同時(shí)，還可應(yīng)用該技術(shù)觀測(cè)機(jī)體對(duì)病原體入侵的免疫反應(yīng)。此類(lèi)應(yīng)用可以通過(guò)三種方式實(shí)現(xiàn)：1、利用報(bào)告基因標(biāo)記在免疫細(xì)胞中特異性表達(dá)的基因啟動(dòng)子而構(gòu)建轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，以該轉(zhuǎn)基因動(dòng)物為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ停媒?jīng)光學(xué)標(biāo)記的病原體對(duì)其進(jìn)行感染，觀測(cè)病原體感染而引發(fā)的免疫細(xì)胞應(yīng)答；2、利用報(bào)告基因標(biāo)記目的基因的啟動(dòng)子構(gòu)建轉(zhuǎn)基因動(dòng)物，觀測(cè)病原體感染后該基因的表達(dá)情況，了解免疫應(yīng)答的分子機(jī)理；3、利用某種免疫相關(guān)基因被敲除的基因敲除鼠作為實(shí)驗(yàn)熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)常見(jiàn)問(wèn)題解惑答疑
Q：熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)主要有哪些用途？a.啟動(dòng)子結(jié)構(gòu)分析，將啟動(dòng)子區(qū)域序列（通常2k左右）進(jìn)行分段截短，或?qū)μ囟ㄎ稽c(diǎn)進(jìn)行突變，再分別構(gòu)建入luciferase報(bào)告載體，檢測(cè)其啟動(dòng)子活性。b.啟動(dòng)子SNP分析，一些基因的啟動(dòng)子區(qū)域存在單核苷酸多態(tài)性，可運(yùn)用熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)分析其相對(duì)活性。c.驗(yàn)證特定轉(zhuǎn)錄因子同其調(diào)控序列的作用，將該序列（通常為啟動(dòng)子區(qū)域）插入報(bào)告基因載體，同時(shí)在實(shí)驗(yàn)細(xì)胞中共轉(zhuǎn)過(guò)表達(dá)該轉(zhuǎn)錄因子，可分析轉(zhuǎn)錄因子過(guò)表達(dá)是否提高熒光素酶活性。d.可以分析信號(hào)通路是否激活，將該信號(hào)通路的下IL-2具有免疫激活和免疫抑制雙重作用，具體發(fā)揮哪種取決于其受體不同鏈的相應(yīng)信號(hào)。IL-2受體包括α、β、γ三條鏈，其中α鏈（IL-2Rα，CD25）在Treg細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞組成性表達(dá)，使用低劑量IL-2藥物會(huì)優(yōu)先激活Treg細(xì)胞而非CD8+T細(xì)胞，而高劑量IL-2藥物會(huì)帶來(lái)嚴(yán)重的全身毒性，這是開(kāi)發(fā)IL-2的腫瘤治療藥物中一直困擾著人們的難題。NatRevImmunol.2022Oct;22(10):614-628.多家企業(yè)已經(jīng)將IL-2的研發(fā)轉(zhuǎn)向抗炎藥物方向（參考：不死磕“腫瘤”，IL-2轉(zhuǎn)向小動(dòng)物活體光學(xué)成像技術(shù)在感染性疾病研究中的應(yīng)用
Revvity小動(dòng)物活體光學(xué)成像技術(shù)已在生命科學(xué)基礎(chǔ)研究、臨床前醫(yī)學(xué)研究及藥物研發(fā)等領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。在眾多應(yīng)用領(lǐng)域中，感染性疾病研究是活體光學(xué)成像技術(shù)的應(yīng)用熱點(diǎn)之一。在應(yīng)用活體光學(xué)成像技術(shù)進(jìn)行感染性疾病研究中，常用的標(biāo)記方法及應(yīng)用領(lǐng)域包括：1、利用螢火蟲(chóng)熒光素酶基因、海腎熒光素酶基因或細(xì)菌熒光素酶基因標(biāo)記細(xì)菌、病毒、真菌、寄生蟲(chóng)等病原體，在活體水平觀測(cè)這些病原體在動(dòng)物體內(nèi)的感染情況及抗生素、疫苗等藥物的治療效果；2、通過(guò)熒光素酶基因或熒光蛋白基因標(biāo)記免疫細(xì)胞，以及利用特定基因-熒光素酶基因轉(zhuǎn)基應(yīng)用小動(dòng)物活體成像技術(shù)研究 生物藥劑學(xué)和藥代動(dòng)力學(xué)
小動(dòng)物活體光學(xué)成像技術(shù)是將分子及細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)從體外研究水平發(fā)展到活體動(dòng)物研究水平的前沿性臨床前分子影像技術(shù)，該技術(shù)通過(guò)采用生物發(fā)光與熒光探針標(biāo)記研究對(duì)象，借助靈敏的光學(xué)檢測(cè)儀器，直接在活體動(dòng)物水平監(jiān)測(cè)疾病的發(fā)展變化并開(kāi)展相關(guān)藥物的臨床前研發(fā)。小動(dòng)物活體光學(xué)成像目前已廣泛應(yīng)用于生物藥劑學(xué)及藥物動(dòng)力學(xué)相關(guān)研究：以藥物為直接觀測(cè)對(duì)象，借助熒光探針直接標(biāo)記藥物本身，通過(guò)追蹤熒光信號(hào)而反映藥物在體內(nèi)的分布、靶向及代謝情況。如在研究抗體或多肽類(lèi)藥物是否能夠有效靶向腫瘤的實(shí)驗(yàn)中，可以利用熒光染料通過(guò)化學(xué)鍵的
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