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這樣進行單細胞分離實際操作更有效
閱讀：285 發(fā)布時間：2022-9-8
目前，單細胞多組學分析正在如火如荼地進行著，在各大雜志上發(fā)表了一些重磅的研究成果。也許你也很想嘗試一下，但是在那之前，你需要把單細胞分離出來。理想狀態(tài)下的單細胞分離速度快、效率高，而實際操作可能效率低、時間長。從異質(zhì)細胞群體中分離單細胞主要有人工分離、熒光激活細胞分選和微流控技術(shù)三種方法。當然，除了成熟的方法外，還不斷涌現(xiàn)出新的精確度和特異度分離的新方法。
如果您想要的細胞在懸浮狀態(tài)中含量相對較高，流式分選是您理想的選擇。如果樣本為實體組織，則可將膠原蛋白及其它細胞外蛋白質(zhì)分解。但是酶消化對細胞的影響很大，甚至可能改變基因的轉(zhuǎn)錄狀態(tài)。將組織細胞制成懸液后，利用熒光標記進行細胞分離。再進一步獲得單細胞就比較困難了，可能需要借助微流體設(shè)備。
1.為了保持細胞活力，縮短單細胞懸液制備時間
2.考慮使用細胞篩過濾細胞團塊或雙細胞。
3.注意選擇包括分選和收集溶液的緩沖液。
4.如果您打算在分選后進行細胞培養(yǎng)，則使用對數(shù)生長期細胞，并確定最佳培養(yǎng)條件。
5.轉(zhuǎn)染細胞的分選通常在轉(zhuǎn)染后72小時進行，以便提高細胞群的存活率
6.如果用熒光抗體分離稀有細胞，染色前應(yīng)將抗體離心，以除去任何熒光顆粒，這些熒光顆?？赡軙徽`認為是靶細胞。
7.就單細胞基因組應(yīng)用而言，不要忘記在分選之后將平板離心，以確保細胞位于孔底。
8.選擇用于評估分選細胞數(shù)量和質(zhì)量的可靠分析技術(shù)。