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在使用單細(xì)胞鋪板可能會出現(xiàn)的問題
首先，了解一下單細(xì)胞鋪板的必要性!
從經(jīng)濟(jì)和的角度來說，需要根據(jù)實驗?zāi)康倪x擇不同規(guī)格的培養(yǎng)板。如在進(jìn)行藥物對待測細(xì)胞半抑制率(IC50)測試時，通常使用96孔板，一方面可以設(shè)置濃度梯度;另外還可一次性測多個藥物，減少實驗誤差。
下面我們再來了解一下單細(xì)胞鋪板可能會出現(xiàn)的問題
1、細(xì)胞計數(shù)前后出現(xiàn)較大誤差?
考慮細(xì)胞沉降導(dǎo)致懸液不勻;懸液體積過大或過小;稀釋倍數(shù)太高或太低等原因造成。
2、如何克服細(xì)胞懸液不均勻的問題?
盡量將細(xì)胞吹打為單個，防止抱團(tuán)，且用移液槍充分吹打，使其均勻懸浮在培養(yǎng)基中。
3、一般加多少細(xì)胞懸液合適?
由于加入計數(shù)室的量，過少會導(dǎo)致計數(shù)室內(nèi)出現(xiàn)氣泡，過多則會使得計數(shù)板上的蓋玻片不緊貼計數(shù)板，使得高度變高，體積變大;計數(shù)室體積為9mm3，所以一般加15ul左右。
4、計數(shù)時，細(xì)胞稀釋倍數(shù)如何控制?
若是計數(shù)室細(xì)胞過稀或過密，會造成較大誤差，一般適濃度為5～10×105細(xì)胞/ml。如一般10cm皿的細(xì)胞約300-500萬個，一些細(xì)胞個體小也能達(dá)到1000-2000萬，可根據(jù)所需細(xì)胞數(shù)目取出部分作稀釋或連續(xù)稀釋后計數(shù)。舉例來說可將100ul細(xì)胞懸液加入到900ul培養(yǎng)基中，混勻后進(jìn)行計數(shù)，計數(shù)所得乘以10即為實際細(xì)胞密度。
5、計數(shù)的原則有哪些?
計數(shù)時對壓在外圈邊線的細(xì)胞遵循“計上不計下，計左不計右”的統(tǒng)計學(xué)原則，遇到兩個以上的細(xì)胞組成的細(xì)胞團(tuán)計為一個細(xì)胞。