原代細(xì)胞*，蓋玻片需要過(guò)酸，并且自來(lái)水、蒸餾水沖洗干凈。兩張或者以上的玻片很容易因?yàn)楹缥饔谜车揭黄穑苋菀讻_不干凈，很容易把兩張*重疊在一起的玻片當(dāng)成一張，一定要看清楚，晾干片子是在消毒飯盒中進(jìn)行，飯盒底面放上紗布，將玻片斜靠在飯盒側(cè)壁，玻片正面不要接觸紗布，否則會(huì)粘上毛毛的。然后高壓蒸汽滅菌，烤箱中烤干。
第二，爬片前用多聚賴(lài)氨酸或者層粘蛋白或者膠原溶液處理玻片，未處理過(guò)的細(xì)胞不容易貼壁，細(xì)胞系還好，原代細(xì)胞很少能貼得牢。這一步至關(guān)重要，否則在后面用PBS洗片時(shí)很容易將細(xì)胞洗掉。用這些促進(jìn)細(xì)胞貼壁的溶液處理玻片后，放到培養(yǎng)皿之前需要用培養(yǎng)基沖洗一到三遍！層粘蛋白和膠原還好，多聚賴(lài)氨酸有幾次我沒(méi)沖結(jié)果細(xì)胞全部不貼壁。
第三，傳代消化下來(lái)的細(xì)胞一定不要過(guò)多稀釋?zhuān)瑢庖稽c(diǎn)的細(xì)胞懸液吹打混勻后滴在玻片上，幾個(gè)小時(shí)后再追加培養(yǎng)基。
第四，玻片在培養(yǎng)皿中容易漂起，如果事先在皿中鋪上液體很可能會(huì)不容易揭下來(lái)，或者揭下來(lái)時(shí)出印子在鏡下很難看。漂起的玻片很容易兩面都培養(yǎng)出細(xì)胞的，這時(shí)背面的細(xì)胞必須去除，挺難操作的，用PBS沖洗可能會(huì)傷到正面的細(xì)胞，用小鑷子夾玻片很容易夾碎，也很容易脫落，小心點(diǎn)好。
第五，將玻片拿出后一定要記好哪邊是正面，做玻片時(shí)將玻片切成長(zhǎng)方形的。目前市場(chǎng)售的多為18mm x 18mm的蓋玻片，或者24mmx24mm的蓋玻片，正方形，很難分辨反正面，在某個(gè)角上打個(gè)缺口，對(duì)正方形是不中用的?？梢杂眯∩拜喦幸幌赂某砷L(zhǎng)方形，至于在某個(gè)角上用砂輪做個(gè)標(biāo)記，理論上很簡(jiǎn)單，實(shí)際操作有難度。
第六，上面步驟都沒(méi)問(wèn)題后，玻片就需要進(jìn)一步處理了，這里有幾個(gè)細(xì)節(jié)，分述如下：
1.PBS對(duì)玻片是沖洗還是浸泡，我個(gè)人認(rèn)為浸泡好，我吃過(guò)沖洗的虧，每一步后都要沖洗2-3次，有時(shí)還沒(méi)等試驗(yàn)做完，大部分細(xì)胞已經(jīng)被沖掉了，呵呵！我當(dāng)時(shí)欲哭無(wú)淚啊！
2.4%的多聚甲醛或者別的固定液的溫度是多少，有人認(rèn)為4°C的好，有人認(rèn)為37°C的好，我個(gè)人感覺(jué)，嬌貴的原代細(xì)胞先在常溫下固定較好，然后放到4°C冰箱中。我發(fā)現(xiàn)直接用4°C的溶液會(huì)造成細(xì)胞冷休克，從片上脫落。
3.用中性樹(shù)膠粘蓋玻片與載玻片時(shí)，盡量少滴樹(shù)膠，一點(diǎn)點(diǎn)就夠了，而且至少半個(gè)小時(shí)以上才能粘牢，防止在水中脫落。否則蓋玻片就會(huì)移動(dòng)，背面會(huì)出現(xiàn)樹(shù)膠的印子，鏡下很難看，而且擦不掉的。