細胞系活性檢測方法之乳酸脫氫酶（LDH）釋放法

時間：2017/1/5閱讀：15415

LDH是活細胞漿內(nèi)酶，當細胞損傷，細胞膜通透性變化時，會將LDH釋放到培養(yǎng)液中。因此培養(yǎng)液中該酶的活性與被裂解的細胞系數(shù)量成正比。由LDH催化的酶促反應在催化乳酸生成丙酮酸的過程中使氧化型輔酶I（NAD）變成還原型輔酶I（NADH+H），后者再通過遞氫體一吩嗪二甲酯硫酸鹽（PMS）還原碘硝基氯化四氯唑（INT），INT接受氫離子被還原成紫紅色的化合物，酶標儀檢測其OD值。與結晶紫染色法和MTT比色法進行靈敏度、重復性和相關性比較，該法簡便，靈敏度高，敏感性、客觀性、試劑成本及測定速度等都要優(yōu)于結晶紫染色法和MTT比色法。

LDH法常用于NK細胞系、CTL細胞活性檢測，從而評價機體免疫功能；與免疫常用方法Cr釋放法相比，操作省時和不存在同位素污染等優(yōu)點，引起人們很大興趣。但此法影響因素較多，諸如培養(yǎng)基、pH值、溫度及加底物顯色時間和終止劑等，實際操作不易掌握。

類似以上通過檢測細胞內(nèi)酶活性的變化從而間接判斷細胞活性的方法還有很多，如酸性磷酸酶法（Acid phosphatasi assay，APA），利用酯酶的熒光素雙醋酸酯（FDA）法等。

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細胞系活性檢測方法之乳酸脫氫酶（LDH）釋放法

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