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原代細(xì)胞取材的基本要求和注意事項(xiàng)

時(shí)間:2017/1/3閱讀:3787
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原代細(xì)胞取材的基本要求和注意事項(xiàng)

人和動物細(xì)胞的取材是原代細(xì)胞培養(yǎng)成功的首要條件,是進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)的*步,若取材不當(dāng),將會直接影響細(xì)胞的體外培養(yǎng),現(xiàn)將取材的基本要求和注意事項(xiàng)敘述如下:

一、取材的基本要求

  (1)取材要注意新鮮和保鮮 新鮮組織易于培養(yǎng)成功,取材時(shí)應(yīng)盡量在4~6h內(nèi)能制作成細(xì)胞,盡快入箱培養(yǎng),若不能即時(shí)培養(yǎng),應(yīng)將組織浸泡于培養(yǎng)液內(nèi),于4℃存放。若組織塊較大,應(yīng)在清除表面血、壞死組織、脂肪和結(jié)締組織后,切碎于培養(yǎng)液內(nèi)4℃存放,但時(shí)間不能超過24h。對于已切碎的組織或血液、淋巴組織應(yīng)加入含10%二甲基亞砜的培養(yǎng)基,按細(xì)胞凍存方式于液氮中冷凍保存。

 ?。?)取材應(yīng)嚴(yán)格無菌 所取標(biāo)本材料應(yīng)在無菌條件下進(jìn)行,為了確保無菌,對所取材料若疑有污染的可能,應(yīng)將所取組織在含高濃度抗菌素(400單位/mL)甚至加入適量的兩性霉素B或10%達(dá)克寧液的培養(yǎng)液內(nèi)于4℃下存放2小時(shí)以上,再用PBS洗2~3次,以確保所取材料無菌。要用無菌包裝的器皿或事先消毒好的帶少許培養(yǎng)液(內(nèi)含400單位/mL抗菌素)的小瓶等便于攜帶的物品來取材,所取材料應(yīng)避免接觸有毒有害的化學(xué)物質(zhì),如碘、汞等。

  (3)取材和原代細(xì)胞制作時(shí),要用鋒利的器械,如手術(shù)刀或剃須刀片切碎組織,盡可能減少對細(xì)胞的機(jī)械損傷。  
 

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