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ATCC細胞原蟲污染原因

時間:2017-6-28閱讀:2015
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培養(yǎng)液可輕微渾濁,在顯微鏡下細小的點狀物數(shù)量非常多,輕微活動,ATCC細胞雖然可以生長但繁殖速度卻明顯減慢,而且細胞狀態(tài)不好,邊緣不清楚,細胞不透亮。他們與細胞可共生但會與細胞爭奪營養(yǎng)。這種共生是非常普遍的,但他們的數(shù)量小,細胞占優(yōu)勢所以不會影響到細胞的正常生長,只有當他們到達一定的數(shù)量時就會影響到細胞的生長,zui終形成惡性循環(huán)。

ATCC細胞污染的可能原因:配液消毒問題、操作問題、環(huán)境問題等等。

關(guān)于培養(yǎng)基的無菌狀況,取培養(yǎng)基至培養(yǎng)瓶中(不加細胞),37 度試培養(yǎng)一段時間后觀察。如果沒有細菌生長 就是操作的問題。也可以在培養(yǎng)基中事先加入雙抗(硫酸鏈霉素和氨芐青霉素)。但雙抗有時會影響細胞的狀態(tài),所以在做轉(zhuǎn)染、檢測細胞某項指標前一定要撤去雙抗,以避免影響實驗結(jié)果。

ATCC細胞實驗前,超凈臺/實驗間紫外照射30min,細胞培養(yǎng)室有24h的空氣消毒裝置更好了。操作前70%酒精擦超凈臺消毒,酒精擦手,擦培養(yǎng)瓶,擦培養(yǎng)基瓶以及各種瓶子的口,總之,所有進超凈臺的物品都用酒精擦拭一遍。拿培養(yǎng)瓶和培養(yǎng)液時候盡量托下面拿,切忌不要拿瓶頸部位。有一點要注意的是,超凈臺里面的東西一定要盡量少放,東西太多活影響超凈臺內(nèi)空氣流通及空氣除菌。實驗過程中盡量避免打鬧說笑。

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