匯智和源生物技術(shù)(蘇州)有限公司
IPHASE/匯智和源人CYP450酶誘導(dǎo)mRNA水平檢測試劑盒(SYBR法)研發(fā)成功
檢測樣品:酶誘導(dǎo)
檢測項(xiàng)目:CYP450酶誘導(dǎo)mRNA水平檢測
方案概述:酶誘導(dǎo)是指細(xì)胞在底物影響下進(jìn)行特定酶合成量增加的作用。藥物代謝主要發(fā)生在肝臟和腸道。其中肝臟代謝主要由位于肝細(xì)胞滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的細(xì)胞色素P450(Cytochrome P450,CYP)催化,少部分由非CYP酶(如UGT酶)催化代謝。據(jù)統(tǒng)計(jì),臨床上超過90%的藥物由CYP450酶代謝。
酶誘導(dǎo)是指細(xì)胞在底物影響下進(jìn)行特定酶合成量增加的作用。藥物代謝主要發(fā)生在肝臟和腸道。其中肝臟代謝主要由位于肝細(xì)胞滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的細(xì)胞色素P450(Cytochrome P450,CYP)催化,少部分由非CYP酶(如UGT酶)催化代謝。據(jù)統(tǒng)計(jì),臨床上超過90%的藥物由CYP450酶代謝。
PART.01 CYP450酶誘導(dǎo)機(jī)理及試驗(yàn)方法
現(xiàn)已證明CYP450酶表達(dá)受孕烷X受體 (PXR)、組成型雄烷受體 (CAR)、芳烴受體(AHR)等核受體調(diào)控。這3個核受體均為轉(zhuǎn)錄因子,當(dāng)與配體結(jié)合激活后,核受體會從細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)入細(xì)胞核中。其中,PXR和AhR分別與細(xì)胞核內(nèi)的視黃醛X受體(RXR)和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(ARNT)形成異源二聚體,進(jìn)而結(jié)合在相應(yīng)靶基因上(如CYP酶),調(diào)節(jié)CYP酶的表達(dá)。AhR參與CYP1A2的誘導(dǎo);PXR主要參與CYP3A4的誘導(dǎo),其次是2C亞家族;CAR與PXR的誘導(dǎo)譜非常重疊,此外有研究表明CAR還可以誘導(dǎo)CYP2B6。因此,在藥物早研期間,可只評估CYP1A2,CYP2B6 和 CYP3A4的誘導(dǎo)作用。
由于CYP酶誘導(dǎo)的試驗(yàn)是從“轉(zhuǎn)錄”、“翻譯”、“蛋白質(zhì)翻譯后修飾”直至成為活性CYP酶蛋白,所以CYP酶試驗(yàn)系統(tǒng)必須是肝細(xì)胞而非其亞結(jié)構(gòu)如肝微粒體或肝S9。隨后在CYP450酶誘導(dǎo)試驗(yàn)時,通常需要結(jié)合酶活性和mRNA兩個水平上的結(jié)果做結(jié)論。當(dāng)僅做酶活性試驗(yàn)時,若藥物同時存在酶抑制現(xiàn)象時,可能會掩蓋誘導(dǎo)作用;而測量mRNA水平則能更真實(shí)地反應(yīng)誘導(dǎo)源頭上的效應(yīng),且更為敏感,直觀地避免了酶活性檢測存在的問題。
鑒于此,為滿足客戶精準(zhǔn)地了解其早研藥物的酶誘導(dǎo)作用,IPHASE技術(shù)人員成功研發(fā)人CYP450酶誘導(dǎo)表達(dá)檢測試劑盒(SYBR法)!
PART.02 IPHASE產(chǎn)品
IPHASE作為創(chuàng)新藥體外研究生物試劑,技術(shù)人員以SYBR染料法,采用ΔΔCT-定量PCR的方式檢測CYP1A2、CYP2B6和CYP3A4這三個CYP酶基因經(jīng)奧美拉唑、苯巴筆脫和利福平誘導(dǎo)后其mRNA水平的變化,發(fā)現(xiàn)其mRNA倍數(shù)變化均顯著增加,滿足藥物相互作用指導(dǎo)原則,說明IPHASE人CYP450酶誘導(dǎo)mRNA水平檢測試劑盒(SYBR法)能夠滿足客戶在mRNA水平上進(jìn)行酶誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)。
IPHASE人CYP450酶誘導(dǎo)mRNA水平檢測試劑盒(SYBR法)提供給客戶提供進(jìn)行qPCR試驗(yàn)的擴(kuò)增試劑,CYP1A2、CYP2B6和CYP3A4這三個CYP酶基因以及一個內(nèi)參基因GAPDH的特異性引物。經(jīng)驗(yàn)證,IPHASE所提供的特異性引物擴(kuò)增效率高,且熔解曲線無雜峰,滿足客戶的試驗(yàn)需求。
圖1.CYP1A2引物擴(kuò)增效率圖
注:R2=98.4%;Eff%=106.401%
(R2越接近100%擴(kuò)增效率越好;Eff擴(kuò)增效率越接近90%~110%越好,下同)
圖2.CYP2B6引物擴(kuò)增效率圖
注:R2=98.5%;Eff%=95.791%
圖3.CYP2B6熔解曲線圖
圖4.CYP3A4熔解曲線圖
圖5.內(nèi)參基因GADPH標(biāo)準(zhǔn)曲線圖
IPHASE/匯智和源憑借多年的研發(fā)經(jīng)驗(yàn),推出了多領(lǐng)域、多種類的科研試劑,為藥物早期研發(fā)提供篩選工具,為生命科學(xué)領(lǐng)域的探索提供新材料、新方法和新手段,為食品、藥品、化學(xué)品等的遺傳毒性研究提供便捷產(chǎn)品,望廣大科研工作者咨詢。
發(fā) 文 章 得 獎 勵
凡使用本公司產(chǎn)品,在國內(nèi)及國際刊物上發(fā)表論文(論文發(fā)表日起一年內(nèi)),并注明產(chǎn)品屬于匯智和源/IPHASE所有,即可申請獎勵。根據(jù)發(fā)表刊物影響因子不同,給予不同金額獎品:
非SCI論文及IF≤5分,500元禮品;
5分<IF≤8分 800元;
8分<IF≤10分 1000元;
IF≥10分 2000元;
注:禮品卡也可兌換同等金額產(chǎn)品購買抵用券;
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匯智和源,致力于為創(chuàng)新藥研發(fā)企業(yè)及生命科學(xué)研究機(jī)構(gòu)提供高品質(zhì)的生物試劑,IPHASE為公司核心品牌,品牌宗旨“Innovative Reagents For Innovative Research”。
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