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SILAC定量蛋白質(zhì)組學(xué)全流程解析:從同
參考價 | ¥ 600 |
訂貨量 | ≥1件 |
- 公司名稱 北京百泰派克生物科技有限公司
- 品牌 百泰派克
- 型號
- 產(chǎn)地 中國
- 廠商性質(zhì) 其他
- 更新時間 2025/7/22 11:11:06
- 訪問次數(shù) 15
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業(yè)務(wù)范圍主要圍繞蛋白和小分子代謝物檢測兩大板塊,從事蛋白質(zhì)和小分子代謝物的理化性質(zhì)分析及結(jié)構(gòu)解析等相關(guān)技術(shù)服務(wù),為客戶提供高性價比、高效率的技術(shù)服務(wù)。
價格 | 詢價 |
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SILAC定量蛋白質(zhì)組學(xué)全流程解析:從同位素標(biāo)記到質(zhì)譜定量檢測技術(shù)服務(wù)詳情介紹
在眾多定量dànbáizhì組學(xué)技術(shù)中,SILAC定量dànbáizhì組學(xué)(Stable Isotope Labeling by Amino acids in Cell culture)以其高精度、低偏倚的特性,在細(xì)胞水平的蛋白表達(dá)比較中占據(jù)重要地位。通過在細(xì)胞培養(yǎng)階段引入穩(wěn)定同位素標(biāo)記氨基酸,SILAC實現(xiàn)了dànbáizhì的"天然"標(biāo)記,避免了體外化學(xué)修飾帶來的系統(tǒng)誤差。本文將系統(tǒng)解析SILAC從細(xì)胞標(biāo)記、樣本制備、質(zhì)譜分析到數(shù)據(jù)處理的完整流程,幫助科研人員全面掌握該技術(shù)的關(guān)鍵要點。
一、SILAC定量dànbáizhì組學(xué)原理
SILAC利用13C或15N等穩(wěn)定同位素標(biāo)記氨基酸(如13C6-賴氨酸、13C6-jīngānsuān),在無內(nèi)源氨基酸的培養(yǎng)基中喂養(yǎng)細(xì)胞,使其在合成dànbáizhì過程中將重標(biāo)記氨基酸整合進(jìn)肽鏈中。實驗中通常將對照組細(xì)胞培養(yǎng)于輕標(biāo)記培養(yǎng)基,處理組細(xì)胞則培養(yǎng)于重標(biāo)記條件下。收集后等量混合,統(tǒng)一進(jìn)行酶解與LC-MS/MS分析。質(zhì)譜檢測通過輕/重肽段的相對峰面積比實現(xiàn)蛋白表達(dá)定量。
二、SILAC定量dànbáizhì組學(xué)全流程
1、細(xì)胞系選擇
SILAC的前提是細(xì)胞能在無血清、無氨基酸基礎(chǔ)培養(yǎng)基(如DMEM-SILAC)中正常生長與分裂。常用的HeLa、HEK293、A549等細(xì)胞系已在SILAC實驗中廣泛驗證,具有良好的標(biāo)記效率與蛋白表達(dá)穩(wěn)定性。
2、培養(yǎng)基配置與更換
輕(Light)培養(yǎng)基含天然賴氨酸與jīngānsuān;重(Heavy)培養(yǎng)基則替換為13C6-賴氨酸和13C6,15N4-jīngānsuān。標(biāo)記通常需連續(xù)傳代6次以上(約5~7天),以達(dá)到>97%的同位素?fù)饺肼省?/p>
3、標(biāo)記效率驗證
通過初步LC-MS/MS分析或使用MALDI質(zhì)譜可對同位素?fù)饺胄蔬M(jìn)行評估。若低于95%,建議延長培養(yǎng)時間或優(yōu)化細(xì)胞狀態(tài),以確保后續(xù)數(shù)據(jù)可靠性。
4、樣本制備與蛋白提取
在輕重標(biāo)記完成后,按照蛋白總量等比例混合細(xì)胞裂解液。裂解通常采用RIPA緩沖液或SDS裂解緩沖液,加入蛋白酶抑制劑防止降解。提取的蛋白樣本需定量一致,后續(xù)進(jìn)行還原、烷基化及yídànbáiméi酶解處理。
5、LC-MS/MS質(zhì)譜分析
酶解產(chǎn)物經(jīng)C18固相萃取柱脫鹽后,注入高分辨納流LC-MS/MS系統(tǒng)(如Orbitrap Fusion、Q Exactive等)。質(zhì)譜參數(shù)需優(yōu)化以解析輕/重肽段之間的微小質(zhì)量差異。一般使用DDA(Data Dependent Acquisition)模式獲得MS1和MS2數(shù)據(jù),實現(xiàn)蛋白鑒定與定量。
6、數(shù)據(jù)處理與定量分析
MaxQuant是SILAC數(shù)據(jù)分析的主流軟件,支持自動識別輕/重肽段并進(jìn)行配對定量??奢敵龅鞍紫鄬Ρ磉_(dá)變化、顯著性分析及差異蛋白列表。進(jìn)一步結(jié)合Perseus進(jìn)行統(tǒng)計分析、功能富集、通路注釋等。
三、SILAC定量dànbáizhì組學(xué)的優(yōu)勢與局限性
1、優(yōu)勢
(1)內(nèi)源性標(biāo)記,避免外源修飾誤差
(2)定量重復(fù)性好,適合時間序列與干預(yù)實驗
(3)缺失值較少,定量一致性強
2、局限性
(1)僅適用于可培養(yǎng)細(xì)胞系
(2)不適合組織、血液等復(fù)雜樣本
(3)標(biāo)記氨基酸成本高,實驗周期長
百泰派克生物科技建立了高效穩(wěn)定的SILAC定量dànbáizhì組學(xué)平臺,覆蓋從細(xì)胞標(biāo)記、樣本制備到高分辨質(zhì)譜分析與數(shù)據(jù)解讀全流程。我們具備多種常用細(xì)胞系的SILAC優(yōu)化培養(yǎng)體系,并結(jié)合Orbitrap質(zhì)譜平臺與MaxQuant分析流程,為藥物篩選、信號通路研究等項目提供jīngzhǔn可靠的數(shù)據(jù)支持。
SILAC作為一種代謝標(biāo)記的dànbáizhì組定量策略,憑借其高度jīngzhǔn與內(nèi)源一致性的特點,已在細(xì)胞機制研究中發(fā)揮重要作用。未來,SILAC定量dànbáizhì組學(xué)有望與磷酸化組、互作組等組學(xué)手段結(jié)合,拓展更豐富的應(yīng)用場景。在項目規(guī)劃初期即引入成熟的SILAC平臺,如百泰派克生物科技的定制化服務(wù),將極大提升數(shù)據(jù)質(zhì)量與實驗效率。
百泰派克生物科技特色項目
一、蛋白測序
百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統(tǒng)對dànbáizhì序列進(jìn)行分析,提供基于質(zhì)譜的蛋白測序分析服務(wù),包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析,Nduāncèxù,Cduāncèxù和全序列分析,以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務(wù)。對于未知理論序列的dànbáizhì,提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務(wù),對蛋白序列進(jìn)行分析。
※服務(wù)優(yōu)勢:
1.采用目前世界上*的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;
2.可實現(xiàn)對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;
3.可測定蛋白N端多達(dá) 70個氨基酸序列;
4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;
5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug,即可完成檢測;
6.測序不受N端封閉,PEC和和糖基化等N端修飾的影響。
二、dànbáizhì組學(xué)
百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺結(jié)合Nano-LC,提供定量dànbáizhì組學(xué)、靶向dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、翻譯后修飾蛋白組學(xué)等多種dànbáizhì組學(xué)分析服務(wù)。此外,百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學(xué)服務(wù),助力微量樣本蛋白組學(xué)、大樣本群醫(yī)學(xué)及高通量修飾組學(xué)等研究工作。
※服務(wù)優(yōu)勢:
1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規(guī)模實驗分析,發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)記物;
2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標(biāo)記方法,適用于分析組織、細(xì)胞、血液等多種樣品;
3.質(zhì)譜分析靈敏度高,實驗結(jié)果重復(fù)度高;
4.可檢測較低豐度蛋白,線性范圍廣;
5.zhuānyè生物信息學(xué)分析,分析更系統(tǒng)準(zhǔn)確。
三、單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析
百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進(jìn)行單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析,采用金屬元素標(biāo)記物(通常是金屬元素標(biāo)記的特異抗體)標(biāo)記細(xì)胞表面和內(nèi)部的分子,然后用流式細(xì)胞原理分離單個細(xì)胞,再用電感耦合等離子體質(zhì)譜(ICP-MS)分析單個細(xì)胞的原子質(zhì)量譜,zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細(xì)胞表面和內(nèi)部的信號分子表達(dá)量。
※服務(wù)優(yōu)勢:
1.技術(shù)*,*技術(shù)空白
采用金屬標(biāo)記抗體技術(shù),避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問題。可在單細(xì)胞層面上對多種指標(biāo)同時進(jìn)行表征,百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標(biāo)蛋白。
2.分析數(shù)量大,成本較低
單細(xì)胞RNAseq受成本等因素限制,所有樣本細(xì)胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個左右,而流式質(zhì)譜技術(shù)一次(單樣本)就可分析至少10^5的細(xì)胞,實現(xiàn)了數(shù)量級的提高,且成本不高于單細(xì)胞RNAseq。
3.應(yīng)用前景大
①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細(xì)胞亞群的變化,在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景;
②將金屬標(biāo)簽技術(shù)與其他技術(shù)結(jié)合會有新應(yīng)用方向。除常規(guī)蛋白外,質(zhì)譜流式細(xì)胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾;
③可檢測細(xì)胞存活率、細(xì)胞大小、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達(dá)量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。
四、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)
百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現(xiàn)10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學(xué)分析平臺進(jìn)行免疫肽組學(xué)分析,可從zuì小的樣品材料中進(jìn)行可重復(fù)的識別和定量。該服務(wù)可以應(yīng)用于大規(guī)模的研究,旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案,深入挖掘未知的靶標(biāo)。
五、生物藥物表征
百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術(shù),MALDI TOF,高效色譜分離技術(shù),提供一系列完善的生物藥物分析方案,從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結(jié)構(gòu)分析,到產(chǎn)品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務(wù),幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì)。
百泰派克生物科技七大檢測平臺
百泰派克生物科技-生物制品表征,生物質(zhì)譜多組學(xué)優(yōu)質(zhì)服務(wù)商
北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務(wù)。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導(dǎo)原則,通過CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認(rèn)證,建立了完備的質(zhì)量體系,數(shù)據(jù)冷熱/異地備份,設(shè)備定期計量/期間核查,軟件審計追蹤,為客戶提供一體化解決方案和技術(shù)服務(wù),支持新藥研發(fā)、藥物申報注冊和生產(chǎn)放行。
1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系,zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的CRO檢測分析服務(wù);
2.獲國家CNAS實驗室認(rèn)可,為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務(wù);
3.業(yè)務(wù)范圍覆蓋dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、代謝組學(xué)、生物藥物表征、單細(xì)胞分析、單細(xì)胞質(zhì)譜流式、生信云分析以及多組學(xué)生物質(zhì)譜整合分析等;
4.七大質(zhì)量控制檢測平臺,滿足您一站式服務(wù)需求;
5.服務(wù)3000+企業(yè),10000+客戶的選擇;
6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務(wù)!