iTRAQ、TMT與SILAC：三大標(biāo)記蛋白定量技術(shù)對比解析檢測技術(shù)服務(wù)詳情介紹

一、技術(shù)原理概覽

1、SILAC（Stable Isotope Labeling by Amino acids in Cell culture）

SILAC 基于以穩(wěn)定同位素標(biāo)記的氨基酸（如13C6-Lys、13C6-Arg）在細(xì)胞培養(yǎng)過程中被細(xì)胞代謝吸收并整合進(jìn)dànbáizhì結(jié)構(gòu)，實(shí)現(xiàn)“體內(nèi)”標(biāo)記。通過使用含輕同位素和重同位素的氨基酸分別培養(yǎng)兩組細(xì)胞樣本，當(dāng)細(xì)胞生長至多代后（通常為5-7代），其dànbáizhì被wánquán標(biāo)記。隨后，兩個樣本在蛋白提取階段等量混合，經(jīng)酶解、LC-MS/MS 分析，通過 MS1 層級的質(zhì)量差異區(qū)分不同來源的肽段，計(jì)算重輕信號比值實(shí)現(xiàn)定量。SILAC 屬于“代謝標(biāo)記”的方法，天然地避免了實(shí)驗(yàn)過程中樣本處理誤差的問題。其zuì大優(yōu)勢在于樣本混合發(fā)生在細(xì)胞裂解之前，極大降低了技術(shù)重復(fù)誤差。

2、iTRAQ（Isobaric Tags for Relative and Absolute Quantitation）

iTRAQ 是一種“化學(xué)等質(zhì)量標(biāo)簽”技術(shù)，適用于蛋白酶解后的肽段。其原理是通過將肽段的N端及賴氨酸側(cè)鏈用iTRAQ試劑進(jìn)行化學(xué)標(biāo)記。iTRAQ 試劑由 reporter group（定量部分）、balance group（平衡質(zhì)量）和 peptide reactive group（反應(yīng)基團(tuán)）組成。不同標(biāo)簽在整體質(zhì)量上相同，在MS1階段不可區(qū)分，但在MS2階段會釋放出不同質(zhì)量的 reporter 離子，從而實(shí)現(xiàn)不同樣本的區(qū)分與定量。iTRAQ 目前支持 4-plex 和 8-plex，同時進(jìn)行多個樣本的并行定量，廣泛應(yīng)用于組織、血清等多種樣本類型的dànbáizhì組研究。

3、TMT（Tandem Mass Tags）

TMT 技術(shù)與 iTRAQ 原理類似，均屬于等質(zhì)量標(biāo)簽，定量信息依賴于 MS2 階段。TMT 由于其標(biāo)簽結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)的改進(jìn)，現(xiàn)已支持更高的多重能力，包括 TMT 10-plex、11-plex、16-plex，甚至18-plex。TMT 標(biāo)簽也由 reporter、balance 和 reactive 三部分構(gòu)成，MS2 中通過 reporter ion 的強(qiáng)度實(shí)現(xiàn)相對定量。TMT 的優(yōu)勢在于更高的通量與更強(qiáng)的樣本區(qū)分能力，尤其適用于大規(guī)模臨床隊(duì)列和單細(xì)胞蛋白組學(xué)研究，是當(dāng)前應(yīng)用zuì廣泛的定量標(biāo)記技術(shù)之一。

二、主要優(yōu)缺點(diǎn)對比

三、技術(shù)比較解讀

1、多重能力

（1）TMT 支持zuì高的 16-18 樣本并行分析

（2）iTRAQ 支持 4 或 8 plex

（3）SILAC 為 2-3 重，NeuCode 擁有擴(kuò)展性

2、定量jīngquè性

（1）SILAC 依靠 MS1 的質(zhì)量差定量，更少技術(shù)誤差

（2）iTRAQ/TMT 在 MS2 階段利用 reporter ion，容易受 ratio compression 影響

3、樣本適用性

（1）SILAC 只適合細(xì)胞培養(yǎng)模型

（2）iTRAQ/TMT 適用于細(xì)胞、組織、體液等樣本

4、成本與流程

（1）SILAC 標(biāo)記時間長，重同位素明顯提高成本

（2）iTRAQ/TMT 標(biāo)簽成本高，需經(jīng)驗(yàn)頻道調(diào)整

五、技術(shù)選型建議

SILAC是高jīngquè、重復(fù)性好的蛋白定量技術(shù)，適用于細(xì)胞模型下的動態(tài)研究； iTRAQ 適合中級通量并行分析； TMT 則是當(dāng)下zuì高通量、zuì適合專題研究和專家調(diào)置的投入性技術(shù)。由于三者分別在標(biāo)記方式、定量經(jīng)濟(jì)和樣本適用性上存在明顯差異，科研人員應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求、預(yù)算與樣本條件進(jìn)行合理選型。

作為多年dànbáizhì組學(xué)服務(wù)商，百泰派克生物科技提供包括 SILAC、iTRAQ、TMT 在內(nèi)的全流程標(biāo)簽定量方案：

1、高分辨 Orbitrap 質(zhì)較平臺

2、成熟標(biāo)記和經(jīng)典工藝流程，可實(shí)現(xiàn)重復(fù) CV < 15%

3、全面應(yīng)用案例，適配各類科研需求

4、用戶培養(yǎng)和規(guī)范化工藝輔助

歡迎了解更多，我們望為您的dànbáizhì組研究貢獻(xiàn)zhuānyè能力。在實(shí)際項(xiàng)目中，技術(shù)選型不僅取決于科學(xué)問題的本質(zhì)，也受到實(shí)驗(yàn)平臺能力的影響。百泰派克生物科技擁有高通量TMT/iTRAQ定量平臺與SILAC優(yōu)化體系，結(jié)合一站式質(zhì)譜分析服務(wù)，能夠?yàn)椴煌芯啃枨筇峁﹤€性化解決方案，助力科研高效推進(jìn)。

百泰派克生物科技特色項(xiàng)目

一、蛋白測序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統(tǒng)對dànbáizhì序列進(jìn)行分析，提供基于質(zhì)譜的蛋白測序分析服務(wù)，包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析，Nduāncèxù，Cduāncèxù和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務(wù)。對于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務(wù)，對蛋白序列進(jìn)行分析。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1.采用目前世界上*的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實(shí)現(xiàn)對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測定蛋白N端多達(dá) 70個氨基酸序列;

4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測;

6.測序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、dànbáizhì組學(xué)

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺結(jié)合Nano-LC，提供定量dànbáizhì組學(xué)、靶向dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、翻譯后修飾蛋白組學(xué)等多種dànbáizhì組學(xué)分析服務(wù)。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學(xué)服務(wù)，助力微量樣本蛋白組學(xué)、大樣本群醫(yī)學(xué)及高通量修飾組學(xué)等研究工作。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規(guī)模實(shí)驗(yàn)分析，發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)記物;

2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標(biāo)記方法，適用于分析組織、細(xì)胞、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高，實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)度高;

4.可檢測較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學(xué)分析，分析更系統(tǒng)準(zhǔn)確。

三、單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進(jìn)行單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析，采用金屬元素標(biāo)記物（通常是金屬元素標(biāo)記的特異抗體）標(biāo)記細(xì)胞表面和內(nèi)部的分子，然后用流式細(xì)胞原理分離單個細(xì)胞，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個細(xì)胞的原子質(zhì)量譜，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細(xì)胞表面和內(nèi)部的信號分子表達(dá)量。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1.技術(shù)*，*技術(shù)空白

采用金屬標(biāo)記抗體技術(shù)，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問題?？稍趩渭?xì)胞層面上對多種指標(biāo)同時進(jìn)行表征，百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標(biāo)蛋白。

2.分析數(shù)量大，成本較低

單細(xì)胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細(xì)胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個左右，而流式質(zhì)譜技術(shù)一次（單樣本）就可分析至少10^5的細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)了數(shù)量級的提高，且成本不高于單細(xì)胞RNAseq。

3.應(yīng)用前景大

①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細(xì)胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機(jī)制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標(biāo)簽技術(shù)與其他技術(shù)結(jié)合會有新應(yīng)用方向。除常規(guī)蛋白外，質(zhì)譜流式細(xì)胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測細(xì)胞存活率、細(xì)胞大小、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達(dá)量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實(shí)現(xiàn)10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學(xué)分析平臺進(jìn)行免疫肽組學(xué)分析，可從zuì小的樣品材料中進(jìn)行可重復(fù)的識別和定量。該服務(wù)可以應(yīng)用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標(biāo)。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術(shù)，MALDI TOF，高效色譜分離技術(shù)，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結(jié)構(gòu)分析，到產(chǎn)品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務(wù)，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì)。

百泰派克生物科技七大檢測平臺

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質(zhì)譜多組學(xué)優(yōu)質(zhì)服務(wù)商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測和項(xiàng)目驗(yàn)證等zhuānyè服務(wù)。公司實(shí)驗(yàn)室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導(dǎo)原則，通過CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認(rèn)證，建立了完備的質(zhì)量體系，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份，設(shè)備定期計(jì)量/期間核查，軟件審計(jì)追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術(shù)服務(wù)，支持新藥研發(fā)、藥物申報注冊和生產(chǎn)放行。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的CRO檢測分析服務(wù)；

2.獲國家CNAS實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務(wù)；

3.業(yè)務(wù)范圍覆蓋dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、代謝組學(xué)、生物藥物表征、單細(xì)胞分析、單細(xì)胞質(zhì)譜流式、生信云分析以及多組學(xué)生物質(zhì)譜整合分析等；

4.七大質(zhì)量控制檢測平臺，滿足您一站式服務(wù)需求；

5.服務(wù)3000+企業(yè)，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務(wù)!

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