2-8℃ 避光

開蓋后組份按要求條件保存。

6個月

微孔板，酶標儀

血清、血漿、細胞、組織

微孔板，酶標儀

1.酶標儀
2.離心機
3.水浴鍋
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒

1.蒸餾水

1.離心管
2.96孔板
3.吸頭
4.一次性手套

1.二硝基苯肼顯色液溶解以后，如果仍然有結(jié)晶析出，應(yīng)棄用。
2.由于賴氏法的特點，在繪制標準曲線時每個點做三管的重復測定，求出各標準管的吸光度均值，減去“0”號管吸光度均值后，對照賴氏單位繪制標準曲線。
3.血清中AST活性在室溫可以保存2天，4℃保存1周，-20℃保存1個月。
4.成批樣本測定時，一般無需每份樣本都做自身血清對照，以試劑空白管代替即可。但對于超過正常范圍的血清樣本，應(yīng)該進行復測。復測時，每份樣本都應(yīng)做自身血清對照。
5.嚴重黃疸、脂血或溶血的血清，可能會引起測定管吸光度增高，因此檢測該類樣本時應(yīng)做自身血清標本對照。
6.當樣本的酶活力大于190卡門單位時，應(yīng)將樣本進行5-10倍稀釋后再進行測定。

準備樣品：
① 血漿、血清樣品：血漿、血清按照常規(guī)方法制備，可以直接用于本試劑盒的測定，
-20℃保存1個月有效，用于AST/GOT的檢測。
② 細胞或組織樣品：取恰當細胞或組織進行勻漿，低速離心取上清，-20℃保存1個
月有效，用于AST/GOT的檢測。
③ (選做)樣品準備完畢后可以用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度，以便于后續(xù)
計算單位蛋白重量組織或細胞內(nèi)的AST/GOT含量。

制作AST標準曲線：
1. 取丙酮酸標準品一支，準確加入丙酮酸標準品稀釋液1ml，配制成丙酮酸標準品100mM，4℃保存?zhèn)溆谩?br>2. 臨用前，取適量100mM丙酮酸標準品和標準品稀釋液按1：49的比例混合，配制成2mM的丙酮酸標準品。
3. 按下表制備標準曲線。
4. 混勻，向各管中加入二硝基苯肼顯色液20ul，混勻37℃孵育20分鐘后，加入AST顯色基液200μl，混勻。
5. 室溫放置5分鐘，酶標儀505nm處，以蒸餾水調(diào)零，讀取各孔吸光度。各孔吸光度均減去”0”號孔吸光度，所得吸光度差值(縱坐標)與對應(yīng)的卡門酶活力單位(橫坐標)作圖。

AST酶促反應(yīng)：
1. 按照下表設(shè)置對照孔、測定孔，溶液應(yīng)按照順序依次加入，并注意避免產(chǎn)生氣泡。如果樣品中的酶活性過高，可以減少樣品用量或適當稀釋后再進行測定。
2. AST檢測：混勻，室溫放置5min。酶標儀505nm處檢測吸光度，以蒸餾水調(diào)零，讀取各孔吸光度值。

計算：
以標準孔活力單位為橫坐標，以吸光度值為縱坐標，繪制標準曲線。
測定管吸光度減去對照管吸光度后（A測定-A對照），從標準曲線查得AST活力單位。

參考范圍：
成年健康人血清AST：8-28卡門單位/ml