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BD 流式細胞儀在實驗前的準備工作

來源:北京眾力挽生物科技有限公司   2025年07月18日 10:38  
  BD 流式細胞儀是集激光技術(shù)、電子物理、光電測量、計算機及細胞熒光化學技術(shù)于一體的多參數(shù)細胞分析儀器,廣泛應用于生命科學研究和臨床診斷領(lǐng)域。其核心功能是通過液流系統(tǒng)將細胞或微粒排列成單列,依次通過激光束檢測點,利用光學系統(tǒng)激發(fā)熒光標記物并捕獲散射光與熒光信號,最終通過電子系統(tǒng)將光信號轉(zhuǎn)換為數(shù)字信號進行多維度分析。
  其液流系統(tǒng)由鞘液管、樣品管和噴嘴組成,通過流體動力學聚焦使細胞懸浮液形成直徑約3-10μm的穩(wěn)定液柱,確保每個細胞獨立通過激光檢測區(qū)。光學系統(tǒng)采用氬離子激光器(488nm)或氪離子激光器(647nm),激發(fā)細胞表面或內(nèi)部的熒光染料(如FITC、PE)。前向散射光(FSC)反映細胞體積,側(cè)向散射光(SSC)揭示胞內(nèi)顆粒結(jié)構(gòu),而熒光信號強度則對應標記抗原或核酸的濃度。光電倍增管(PMT)將光信號轉(zhuǎn)換為電脈沖,經(jīng)模數(shù)轉(zhuǎn)換后生成FCS格式數(shù)據(jù)文件。
  BD 流式細胞儀在實驗前準備:
  1、儀器校準與質(zhì)檢
  開機預熱:提前30分鐘開機,使激光和檢測系統(tǒng)穩(wěn)定。
  光路校準:使用標準熒光微球(如Flow Check或CytoGlow)調(diào)整激光延遲、靈敏度及PMT電壓,確保液流居中。
  檢查背景噪聲:運行緩沖液(如PBS),確保散射光和熒光通道的基線平穩(wěn),無異常信號。
  2、樣本制備
  細胞濃度:調(diào)整細胞濃度至5×10?~1×10?cells/mL(過高易導致堵塞,過低降低檢測效率)。
  單細胞懸液:機械法(研磨)或酶消化法(如膠原酶)處理組織,過濾去除團塊。
  3、染色與孵育:
  表面抗體:4℃避光孵育15~30分鐘,PBS洗滌后重懸。
  胞內(nèi)染色:破膜劑(如BD Fix&Perm)處理后孵育胞內(nèi)抗體。
  活性染料:如PI(死細胞染色)或Calcein-AM(活細胞標記)。
  4、對照設(shè)置:
  空白對照:未染色的細胞用于確定熒光閾值。
  單標對照:單個熒光標記的樣本用于調(diào)整補償(Compensation)。
  同型對照:用于排除非特異性結(jié)合(如ISO型抗體)。

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