293T人胚腎細(xì)胞系(SV40T基因修飾)
293T人胚腎細(xì)胞系(SV40T基因修飾)是由人胚腎 293 細(xì)胞經(jīng) SV40T 基因修飾而來,憑借其高效的外源基因表達(dá)能力和病毒包裝特性,成為生命科學(xué)研究領(lǐng)域應(yīng)用較為廣泛的細(xì)胞系之一。該細(xì)胞系源于人胚胎腎細(xì)胞,1973 年由 Alex van der Eb 首ci通過轉(zhuǎn)染 5 型腺病毒 DNA 片段獲得 293 細(xì)胞,后經(jīng) Mario Capecchi 團(tuán)隊引入 SV40 大 T 抗原基因,成功構(gòu)建出 293T 細(xì)胞,極大提升了細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率與蛋白表達(dá)能力。
從細(xì)胞生物學(xué)特性來看,293T 細(xì)胞呈貼壁生長,顯微鏡下呈多邊形或梭形,細(xì)胞間連接緊密,具有上皮樣細(xì)胞形態(tài)特征。SV40T 抗原的表達(dá)賦予其du特優(yōu)勢,該抗原可與宿主細(xì)胞內(nèi)的 DNA 復(fù)制起始位點結(jié)合,促進(jìn)外源 DNA 的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄,使得 293T 細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率較原始 293 細(xì)胞提升數(shù)倍,瞬時轉(zhuǎn)染效lü最高可達(dá) 80% 以上。同時,293T 細(xì)胞具備強大的蛋白合成與分泌能力,能夠高效表達(dá)包括膜蛋白、分泌蛋白在內(nèi)的多種重組蛋白,且蛋白修飾加工過程接近人體生理狀態(tài),產(chǎn)出的蛋白具有良好的生物學(xué)活性。此外,293T 細(xì)胞對多種病毒載體具有良好的兼容性,是生產(chǎn)慢病毒、腺病毒等基因治療載體的首xuan細(xì)胞系,其包裝產(chǎn)生的病毒顆粒滴度高、感染性強,可有效介導(dǎo)基因遞送。
在細(xì)胞培養(yǎng)方面,293T 細(xì)胞對培養(yǎng)條件要求相對寬松。常用含 10% 胎牛血清(FBS)、1% 雙抗(青mei素 - 鏈mei素)的高糖 DMEM 培養(yǎng)基,高糖環(huán)境可為細(xì)胞快速增殖提供充足能量。培養(yǎng)環(huán)境需維持在 37℃、5% CO?的恒溫恒濕培養(yǎng)箱中,當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到 80% 左右時,按 1:3 - 1:5 的比例進(jìn)行傳代,傳代周期約為 2 - 3 天。新接種的細(xì)胞在 6 - 12 小時內(nèi)即可完成貼壁,24 小時后便能進(jìn)入快速增殖階段。需要注意的是,293T 細(xì)胞生長速度較快,若不及時傳代,細(xì)胞會因密度過大而出現(xiàn)形態(tài)改變、增殖能力下降等問題,且培養(yǎng)過程中需嚴(yán)格遵循無菌操作,防止支原體污染,以免影響細(xì)胞活性和實驗結(jié)果。
憑借卓yue的性能,293T 細(xì)胞系在生命科學(xué)各領(lǐng)域發(fā)揮著關(guān)鍵作用。在基因功能研究中,科研人員通過將目的基因轉(zhuǎn)染至 293T 細(xì)胞,快速探究基因的表達(dá)調(diào)控機制及生物學(xué)功能;在抗體藥物研發(fā)方面,利用 293T 細(xì)胞表達(dá)重組抗體,可實現(xiàn)高效的抗體生產(chǎn)與優(yōu)化,目前多款上市的單克隆抗體藥物均借助該細(xì)胞系完成研發(fā)與生產(chǎn)。在基因治療領(lǐng)域,293T 細(xì)胞作為病毒載體生產(chǎn)的 “主力軍”,為 CAR - T 細(xì)胞治療、罕見病基因治療等提供了安全有效的載體工具,推動了基因治療技術(shù)從實驗室走向臨床應(yīng)用。不過,在使用 293T 細(xì)胞系時,需警惕細(xì)胞系的遺傳穩(wěn)定性問題,長期傳代可能導(dǎo)致細(xì)胞基因變異,影響實驗結(jié)果的一致性,因此實驗前需對細(xì)胞系進(jìn)行 STR 分型鑒定和基因表達(dá)譜分析,確保細(xì)胞系的質(zhì)量和實驗數(shù)據(jù)的可靠性。
以上信息僅供參考,詳細(xì)信息請聯(lián)系我們。