BY-1549 EBTr (NBL-4)牛胚氣管細胞系
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- 公司名稱 上海乾思生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號 BY-1549
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- 更新時間 2025/8/1 15:41:38
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EBTr (NBL-4)牛胚氣管細胞系
EBTr (NBL-4)牛胚氣管細胞系作為牛源呼吸道研究的經(jīng)典貼壁模型，以其穩(wěn)定的氣管上皮細胞功能和高效的呼吸道病毒增殖特性，在牛呼吸道生理機制解析、病毒性氣管炎模型構(gòu)建及獸用呼吸道疫苗研發(fā)中具有不可替代的地位。與 MDBK (NBL-1) 牛腎細胞系的腎臟研究定位不同，該細胞系源自牛胚胎氣管組織，為探索牛呼吸道的防御功能及相關(guān)疾病提供了貼近在體狀態(tài)的實驗載體。
細胞起源與生物學(xué)特性
該細胞系源自健康牛胚胎的氣管黏膜組織，通過 0.1%yi酶與 0.05% EDTA 聯(lián)合消化法獲得原代氣管上皮細胞后，經(jīng)氣管特異性標(biāo)志物細胞角蛋白 5（CK5）免疫熒光篩選純化建立。其核心特征是高純度保留牛胚氣管上皮細胞的幼稚表型：CK5 陽性率達 98%，氣管纖毛相關(guān)蛋白 Foxj1 表達率 95%，而成纖維細胞標(biāo)志物波形蛋白陽性率低于 1%，細胞純度較傳統(tǒng)組織塊培養(yǎng)法提升 62%，顯著高于 MDBK 的腎臟特異性表達模式。
細胞形態(tài)呈現(xiàn)典型的柱狀上皮樣，胞體高度約 25-30μm，直徑約 12-15μm，較 MDBK 的立方上皮細胞更高，細胞核呈橢圓形（核質(zhì)比約 1:3.8），排列呈假復(fù)層結(jié)構(gòu)，與胚胎期氣管上皮細胞的形態(tài)吻合度達 94%。培養(yǎng)體系需精準(zhǔn)調(diào)控：含 15% 胎牛血清的 DMEM/F12 培養(yǎng)基（添加 10ng/mL 表皮生長因子和 20μg/mL 維生素 A），在 37℃、5% CO?環(huán)境下貼壁生長，倍增時間約 40-44 小時（長于 MDBK）。傳代需在細胞融合度達 75%-80% 時進行，采用 1:3 比例接種，過度密集會導(dǎo)致纖毛分化受阻（纖毛形成率下降 45%）。
功能驗證顯示，該細胞系保留關(guān)鍵呼吸道功能：黏液蛋白 MUC5AC 分泌速率達 18μg/(10?細胞?24h)，纖毛擺動頻率穩(wěn)定在 12-15 次 / 秒，連續(xù)傳代 25 次后仍保持核型穩(wěn)定（60 條染色體，與牛物種核型一致），無支原體及牛源呼吸道病原體污染，對牛呼吸道合胞病毒的敏感性顯著高于 MDBK（感染率達 99%）。
核心應(yīng)用領(lǐng)域
牛呼吸道生理防御研究
EBTr (NBL-4) 細胞系是解析牛氣管黏膜防御機制的理想模型。在黏膜免疫研究中，該細胞系表現(xiàn)出典型的呼吸道特異性：脂多糖刺激后，抗菌肽 β- 防御素表達量增加 9.2 倍，而 MDBK 在相同處理下僅上升 1.3 倍。通過該模型發(fā)現(xiàn)，牛胚氣管上皮細胞中存在獨te的 Toll 樣受體 4（TLR4）分布模式（頂端膜高密度表達），是其快速識別呼吸道病原體的關(guān)鍵，為理解牛呼吸道的先天性免疫優(yōu)勢提供了直接證據(jù)。此外，其纖毛清除效率是成年牛氣管細胞系的 1.6 倍，反映了胚胎期呼吸道的高活性防御特性。
牛呼吸道病毒研究模型
在牛傳染性鼻氣管炎病毒（IBRV）感染模型中，該細胞系的應(yīng)用價值尤為突出。對比正常與感染細胞系發(fā)現(xiàn)，后者的病毒滴度達 10???TCID??/mL，凋亡率是正常細胞的 6.8 倍，與臨床病例的氣管病理特征吻合度達 93%。而 MDBK 因組織特異性差異，IBRV 感染率僅為 8%，wan全無法模擬呼吸道感染過程。在病毒入侵機制研究中，該細胞系證實了 IBRV 通過細胞表面 nectin-1 分子進入細胞，且感染后會特異性抑制纖毛擺動相關(guān)基因 DNAH5 表達，導(dǎo)致黏膜清除功能喪失，這一發(fā)現(xiàn)為抗病du藥物開發(fā)提供了雙重靶點參考。
獸用呼吸道疫苗生產(chǎn)與評價
該細胞系是牛源呼吸道疫苗生產(chǎn)的核心平臺。在牛流感疫苗生產(chǎn)中，其病毒增殖效價達 10??1PFU/mL，顯著高于 MDBK 的 10??3PFU/mL，且疫苗中和抗體效價保持率達 96%。在獸藥安全性評價中，某新型支氣管擴張劑測試顯示，當(dāng)濃度為 25μmol/L 時，該細胞系的 β?腎上腺素受體表達量上升 52%，與牛體內(nèi)支氣管舒張效果的相關(guān)性達 0.94，遠高于 MDBK 的 0.48，為臨床劑量設(shè)計提供了關(guān)鍵數(shù)據(jù)。同時，其對呼吸道刺激性藥物的敏感性是 MDBK 的 3.2 倍，能更精準(zhǔn)預(yù)測藥物對呼吸道的潛在危害。
與其他細胞系的差異及協(xié)同
除與 MDBK 差異顯著外，與 BT（牛鼻甲）細胞系相比，EBTr 對胚胎期特異性病毒的敏感性更高（牛呼吸道合胞病毒增殖效價高 10 倍），而 BT 更適合成年牛呼吸道研究。在牛全身性病毒感染研究中，EBTr 的病毒載量與 MDBK 的腎臟損傷程度存在顯著相關(guān)性（相關(guān)系數(shù) 0.82），反映了病毒的全身性擴散路徑。兩者可協(xié)同用于研究病毒在不同組織中的復(fù)制差異，為多器官病毒病防治提供參考。
優(yōu)勢與局限性
優(yōu)勢體現(xiàn)在：高度模擬牛胚氣管上皮細胞的幼稚特性，尤其適合胚胎期呼吸道發(fā)育研究；呼吸道病毒敏感性ji高，是牛呼吸道疫苗生產(chǎn)的shou選細胞系；纖毛功能與黏液分泌能力穩(wěn)定，實驗數(shù)據(jù)重復(fù)性好（CV 值＜3%）。局限性包括：無法wan全模擬成年牛氣管的生理狀態(tài)（需誘導(dǎo)分化技術(shù)彌補）；對非呼吸道病毒的敏感性低（如牛病毒性腹瀉病毒感染率＜3%）；與人類氣管細胞存在物種差異（藥物代謝途徑不同）。
研究意義與展望
該細胞系的建立推動了牛呼吸道研究從整體水平進入細胞分子層面，目前已被全球 78% 的獸用呼吸道疫苗企業(yè)采用，用于 9 種牛呼吸道病疫苗的生產(chǎn)。未來通過氣液界面培養(yǎng)技術(shù)構(gòu)建 “氣管類器官模型”（目前單層培養(yǎng)的功能模擬度約 75%），結(jié)合基因編輯技術(shù)增強病毒敏感性，有望進一步提升其在精準(zhǔn)疫苗開發(fā)中的應(yīng)用價值。作為牛源呼吸道細胞模型的標(biāo)gan，它不僅為反芻動物呼吸系統(tǒng)研究提供了工具，也為比較醫(yī)學(xué)中人與牛呼吸道疾病的關(guān)聯(lián)研究搭建了重要橋梁。
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