BY-1376 vero IgRCD4-猴腎細(xì)胞系
- 公司名稱(chēng) 上海乾思生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號(hào) BY-1376
- 產(chǎn)地
- 廠(chǎng)商性質(zhì) 生產(chǎn)廠(chǎng)家
- 更新時(shí)間 2025/8/1 15:07:09
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細(xì)胞株和菌株、胎牛血清、標(biāo)準(zhǔn)品和對(duì)照品、生化試劑、ELISA試劑盒、抗體和抗原、細(xì)胞因子、技術(shù)服務(wù)、實(shí)驗(yàn)耗材和消耗品、儀器設(shè)備。
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
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來(lái)源與構(gòu)建機(jī)制：該細(xì)胞系源自 Vero IgCD4 細(xì)胞，利用 CRISPR/Cas9 技術(shù)靶向切割 IgRCD4 基因的 Fc 段編碼區(qū)，經(jīng)單細(xì)胞克隆篩選獲得純合敲除株（命名中 “?” 表示受體缺失）。測(cè)序驗(yàn)證顯示 IgRCD4 基因存在 2bp 移碼突變，導(dǎo)致受體表達(dá)wan全缺失（流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)陽(yáng)性率＜0.5%），全基因組測(cè)序證實(shí)除靶位點(diǎn)外，與 Vero IgCD4 遺傳相似度＞99.9%，核型穩(wěn)定（2n=60），傳代 50 次無(wú)額外突變累積。
形態(tài)與增殖：體外培養(yǎng)呈典型上皮樣形態(tài)，貼壁生長(zhǎng)時(shí)呈多角形，胞質(zhì)均勻，細(xì)胞排列密度較 Vero IgCD4 更高；懸浮培養(yǎng)適應(yīng)性差，以貼壁生長(zhǎng)為主。37℃、5% CO?條件下，增殖周期約 28-32 小時(shí)，較 Vero IgCD4 縮短 5%-8%（因消除外源受體表達(dá)的代謝負(fù)荷），適應(yīng)含 10% 胎牛血清的 DMEM 培養(yǎng)基，傳代 60 次以上生長(zhǎng)速率衰減＜10%，凍存復(fù)蘇后存活率超 88%。
功能特征：核心特征是 IgRCD4 受體功能缺失：無(wú)法結(jié)合 HIV-1 gp120 蛋白（ELISA 結(jié)合實(shí)驗(yàn)顯示親和力較 Vero IgCD4 降低＞100 倍），HIV-1 感染后 48 小時(shí)病毒滴度＜102 TCID??/mL（僅為 Vero IgCD4 的 0.01%），且無(wú)病毒復(fù)制支持能力（p24 抗原檢測(cè)陰性）。同時(shí)，其保留 Vero 細(xì)胞固有的病毒復(fù)制 machinery，對(duì)非 CD4 依賴(lài)型病毒（如腺病毒）的敏感性與親本 Vero 一致（滴度差異＜10%），確保僅特異性缺失 CD4 介導(dǎo)的感染途徑。
病毒受體功能驗(yàn)證
抗病毒實(shí)驗(yàn)特異性對(duì)照
疫苗評(píng)價(jià)的陰性對(duì)照體系
貼壁培養(yǎng)操作：
復(fù)蘇：凍存管 37℃水浴 1 分鐘解凍，轉(zhuǎn)移至含 10mL 預(yù)熱培養(yǎng)基（DMEM+10% 胎牛血清）的離心管，1000rpm 離心 5 分鐘，重懸后接種至 T75 瓶，37℃、5% CO?培養(yǎng)，24 小時(shí)貼壁率超 90%（無(wú)需篩選壓力）。
換液：接種 48 小時(shí)后首ci換液，去除代謝廢物，此后每 3 天換液一次，維持細(xì)胞密度在 3×10?-1×10?個(gè) /cm2（密度過(guò)高易引發(fā)接觸抑制）。
傳代：融合度達(dá) 80% 時(shí)，棄培養(yǎng)基，PBS 清洗 2 次，加 2mL 細(xì)胞解離液，37℃孵育 2 分鐘，鏡檢細(xì)胞脫落后加 8mL 培養(yǎng)基終止，按 1:5 比例傳代，每 20 代通過(guò)流式檢測(cè)確認(rèn) IgRCD4 陰性（陽(yáng)性率需＜1%）。
病毒感染對(duì)照實(shí)驗(yàn)流程：
細(xì)胞準(zhǔn)備：將 Vero IgCD4 與 Vero IgRCD4?細(xì)胞同步接種 24 孔板（1×10?個(gè) / 孔），培養(yǎng) 24 小時(shí)至融合度 70%。
平行感染：均加入相同滴度的 HIV-1 病毒液（MOI=0.1），37℃吸附 2 小時(shí)，棄病毒液后加含 2% 血清的維持液。
對(duì)比檢測(cè)：48 小時(shí)后同時(shí)檢測(cè)兩組細(xì)胞的病毒復(fù)制（p24 ELISA），計(jì)算感染效率差異倍數(shù)（通常＞1000 倍），驗(yàn)證受體依賴(lài)性。
凍存流程：取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，1000rpm 離心 5 分鐘，凍存液（70% DMEM+20% 胎牛血清 + 10% DMSO）重懸至 8×10?個(gè) /mL，分裝凍存管，程序降溫盒 - 80℃過(guò)夜后移至液氮，保存期超 5 年，復(fù)蘇后傳代 1 次即可用于實(shí)驗(yàn)（無(wú)需篩選壓力）。
優(yōu)勢(shì)：IgRCD4 受體缺失徹di（陽(yáng)性率＜0.5%），對(duì)照特異性強(qiáng)；與 Vero IgCD4 遺傳背景高度一致（差異＜0.1%），排除遺傳干擾；培養(yǎng)無(wú)需篩選藥物，操作簡(jiǎn)便；對(duì)非 CD4 依賴(lài)型病毒敏感性正常，可同時(shí)作為多種實(shí)驗(yàn)的平行對(duì)照。
局限性：僅適用于 CD4 依賴(lài)型病毒研究，應(yīng)用范圍較窄；長(zhǎng)期傳代可能出現(xiàn)受體基因回復(fù)突變（雖概率＜0.1%，仍需定期檢測(cè)）；無(wú)法模擬天然細(xì)胞的受體動(dòng)態(tài)調(diào)控（需結(jié)合原代細(xì)胞驗(yàn)證）。
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