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BY-0799 BALB/3T3 clone A31小鼠胚胎成纖維細(xì)胞系

具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
  • 公司名稱 上海乾思生物科技有限公司
  • 品牌 其他品牌
  • 型號 BY-0799
  • 產(chǎn)地
  • 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
  • 更新時(shí)間 2025/7/14 11:37:02
  • 訪問次數(shù) 286

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供貨周期 現(xiàn)貨

BALB/3T3 clone A31小鼠胚胎成纖維細(xì)胞系

BALB/3T3 clone A31小鼠胚胎成纖維細(xì)胞系源自 BALB/c 小鼠 14 天胚齡的胚胎組織,是保留正常成纖維細(xì)胞生物學(xué)特性和接觸抑制功能的經(jīng)典細(xì)胞模型,在細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)、致癌機(jī)制研究及病毒增殖研究中具有不可替代的價(jià)值,為解析成纖維細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化過程提供了標(biāo)準(zhǔn)化的體外研究工具。

該細(xì)胞系呈現(xiàn)典型的胚胎成纖維細(xì)胞形態(tài)與表型特征。顯微鏡下,細(xì)胞呈長梭形或多邊形,以貼壁生長為主,排列呈平行束狀或漩渦狀,細(xì)胞體積較大(長徑 25-40μm),核質(zhì)比適中,細(xì)胞核呈橢圓形,染色質(zhì)呈細(xì)顆粒狀,可見 1-2 個(gè)核仁,核分裂象每 10 個(gè)高倍視野 2-3 個(gè),胞質(zhì)豐富,呈弱嗜堿性,可見細(xì)絲狀胞質(zhì)突起,電鏡下可見胞質(zhì)內(nèi)含有豐富的微絲和粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng),符合成纖維細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)特點(diǎn)。免疫表型分析顯示,細(xì)胞高表達(dá)間葉組織標(biāo)志物 vimentin(陽性率 98%)和纖維連接蛋白(fibronectin,陽性率 95%),流式細(xì)胞術(shù)檢測顯示其 vimentin 表達(dá)強(qiáng)度顯著高于成體成纖維細(xì)胞,而不表達(dá)上皮細(xì)胞標(biāo)志物 CK18 和肌細(xì)胞標(biāo)志物 α-SMA,證實(shí)其純成纖維細(xì)胞特性。
體外培養(yǎng)體系中,BALB/3T3 clone A31 細(xì)胞展現(xiàn)出嚴(yán)格的接觸抑制和密度依賴性增殖特性。最適培養(yǎng)條件為含 10% 胎牛血清的 DMEM 培養(yǎng)基,在 37℃、5% CO?環(huán)境下,傳代周期約 72 小時(shí),倍增時(shí)間約 48 小時(shí),顯著慢于腫瘤細(xì)胞系。其最xian著特點(diǎn)是具有完善的接觸抑制功能,當(dāng)細(xì)胞匯合度達(dá) 80% 時(shí),增殖幾乎wan全停止(增殖率下降至 5% 以下),避免細(xì)胞重疊生長,這種特性與其高表達(dá)細(xì)胞間黏附分子 E - 鈣粘蛋白相關(guān)(表達(dá)量是轉(zhuǎn)化細(xì)胞的 3 倍)。軟瓊脂克隆形成率極低(<0.1%),證實(shí)其非惡性表型,連續(xù)傳代 30 次內(nèi),細(xì)胞形態(tài)和增殖特性無明顯改變,超過 50 代后可能出現(xiàn)自發(fā)轉(zhuǎn)化(克隆形成率升至 5%),凍存復(fù)蘇存活率超 95%,復(fù)蘇后 48 小時(shí)即可恢復(fù)正常形態(tài)和增殖。
細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)中,BALB/3T3 clone A31 細(xì)胞是檢測化學(xué)致癌物和促癌劑的金標(biāo)準(zhǔn)。經(jīng)甲基膽蒽(MCA)等致癌物處理后,細(xì)胞可發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化,表現(xiàn)為接觸抑制消失、形態(tài)變?yōu)槎嘟切?、排列紊亂,軟瓊脂克隆形成率升至 30%,接種裸鼠后成瘤率達(dá) 80%。轉(zhuǎn)化細(xì)胞的表型改變包括 vimentin 表達(dá)量增加 2 倍,E - 鈣粘蛋白表達(dá)下降 60%,與腫瘤細(xì)胞表型一致。該細(xì)胞系對促癌劑(如佛波酯 TPA)敏感,致癌物啟動(dòng)后經(jīng) TPA 處理,轉(zhuǎn)化效率可提升 5-10 倍,這種兩階段轉(zhuǎn)化模型被廣泛用于致癌機(jī)制研究,其轉(zhuǎn)化灶形成實(shí)驗(yàn)的靈敏度可達(dá) 0.1μg/mL(MCA 濃度),顯著高于其他細(xì)胞系。
病毒增殖研究證實(shí)其對多種病毒的易感特性。感染實(shí)驗(yàn)顯示,該細(xì)胞可支持鼠肉瘤病毒(MSV)、多瘤病毒及水皰性口炎病毒(VSV)的復(fù)制,MSV 感染后 72 小時(shí)可觀察到典型的轉(zhuǎn)化灶(細(xì)胞堆積生長),病毒滴度達(dá) 10?PFU/mL,顯著高于其他成纖維細(xì)胞系。電鏡觀察顯示,病毒在細(xì)胞內(nèi)可完成完整的復(fù)制周期,多瘤病毒感染后可見核內(nèi)病毒顆粒裝配,與腫瘤細(xì)胞相比,其病毒釋放效率更高(約 60%),因無內(nèi)源性病毒污染,適合制備高滴度病毒懸液。
分子機(jī)制研究揭示其轉(zhuǎn)化相關(guān)的信號通路變化。正常細(xì)胞中,Ras/ERK 通路處于嚴(yán)格調(diào)控狀態(tài),磷酸化 ERK(p-ERK)水平較低,經(jīng)致癌物處理后,Ras 基因發(fā)生突變(常見 G12V 突變),導(dǎo)致 p-ERK 水平升高 8 倍,細(xì)胞增殖失控。Western blot 分析顯示,轉(zhuǎn)化細(xì)胞中抑癌基因 p53 表達(dá)下降 50%,癌基因 c-Fos 表達(dá)增加 4 倍,這種分子改變與人類纖維肉瘤的基因表達(dá)譜高度相似。與其他成纖維細(xì)胞系相比,其轉(zhuǎn)化過程中的基因表達(dá)變化更穩(wěn)定,批次間差異小于 10%,適合標(biāo)準(zhǔn)化的分子機(jī)制研究。
在生物材料相容性評估中,該細(xì)胞系被用于檢測材料的細(xì)胞毒性。MTT 實(shí)驗(yàn)顯示,其對毒性物質(zhì)的敏感性顯著高于其他細(xì)胞系,0.1% ben酚即可使細(xì)胞存活率下降 50%,這種高敏感性使其成為 ISO 標(biāo)準(zhǔn)推薦的生物材料 cytotoxicity 測試細(xì)胞。材料浸提液處理后,細(xì)胞形態(tài)改變和增殖抑制率可直觀反映材料的生物相容性,與體內(nèi)植入實(shí)驗(yàn)結(jié)果的一致性達(dá) 85%,顯著高于其他檢測模型。
傷口愈合模型研究中,BALB/3T3 clone A31 細(xì)胞的遷移能力為研究成纖維細(xì)胞功能提供了工具。劃痕實(shí)驗(yàn)顯示,細(xì)胞在損傷后 24 小時(shí)遷移距離達(dá)傷口寬度的 50%,48 小時(shí)基本完成愈合,遷移過程依賴于基質(zhì)金屬蛋白酶 - 2(MMP-2)的活性(抑制劑處理可使遷移率下降 60%)。轉(zhuǎn)化生長因子 -β1(TGF-β1)處理可使遷移率提升 40%,同時(shí)促進(jìn)膠原蛋白合成(合成量增加 3 倍),模擬體內(nèi)傷口修復(fù)過程,這種特性使其可用于創(chuàng)傷修復(fù)藥物的篩選。
衰老研究中,該細(xì)胞系展現(xiàn)出典型的復(fù)制性衰老特征。連續(xù)傳代至 50 代后,細(xì)胞出現(xiàn)衰老形態(tài)(體積增大、扁平),β- 半乳糖苷酶染色陽性率達(dá) 80%,端粒長度較年輕細(xì)胞縮短 50%,p16INK4a 表達(dá)量增加 10 倍,這些衰老標(biāo)志物的變化為研究細(xì)胞衰老機(jī)制提供了清晰的模型。與成體成纖維細(xì)胞相比,其衰老過程更可控,衰老相關(guān)分泌表型(SASP)更穩(wěn)定,適合衰老相關(guān)疾病的研究。


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