CHGF-003大鼠乳腺癌細(xì)胞系
CHGF-003大鼠乳腺癌細(xì)胞系是乳腺癌基礎(chǔ)研究與藥物開發(fā)的重要模型,源于大鼠自發(fā)性乳腺腫瘤組織,因保留完整的上皮表型及侵襲轉(zhuǎn)移特性,成為解析乳腺癌發(fā)生發(fā)展機(jī)制的關(guān)鍵工具,在腫瘤學(xué)研究中應(yīng)用廣泛。
該細(xì)胞系由國內(nèi)研究團(tuán)隊(duì)于 21 世紀(jì)初建立,通過無菌采集 SD 大鼠自發(fā)性乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織,采用組織塊原代培養(yǎng)法分離純化而來。經(jīng)過多代篩選,其生物學(xué)特性趨于穩(wěn)定,既保留乳腺上皮細(xì)胞的形態(tài)特征,又具備惡性腫瘤的增殖與轉(zhuǎn)移能力,與臨床乳腺癌的病理特征高度吻合,為本土乳腺癌研究提供了適配性更強(qiáng)的實(shí)驗(yàn)材料。
生物學(xué)特性方面,CHGF-003 細(xì)胞呈現(xiàn)典型的上皮樣形態(tài)。體外培養(yǎng)時呈多邊形或短梭形,貼壁生長且連接緊密,形成鋪路石樣排列,細(xì)胞核呈圓形或橢圓形,核質(zhì)比適中,可見 2-3 個核仁。生長特性上,其倍增時間約為 30-36 小時,在含 10% 胎牛血清的 DMEM 培養(yǎng)基中可穩(wěn)定傳代,傳至 50 代后仍保持雌激素受體(ER)和孕激素受體(PR)的低表達(dá)狀態(tài),模擬了臨床三陰性乳腺癌的部分特征,但若長期體外培養(yǎng),轉(zhuǎn)移能力可能減弱,需定期通過裸鼠原位接種復(fù)壯。
功能特性上,該細(xì)胞系的核心價值在于模擬乳腺癌的侵襲轉(zhuǎn)移級聯(lián)過程。研究發(fā)現(xiàn),其高表達(dá)基質(zhì)金屬蛋白酶 - 13(MMP-13),該分子可降解乳腺基底膜及細(xì)胞外基質(zhì),為腫瘤細(xì)胞侵襲周圍組織提供條件。通過劃痕實(shí)驗(yàn)與 Transwell 實(shí)驗(yàn)檢測顯示,其遷移能力是正常大鼠乳腺上皮細(xì)胞的 6-8 倍,且在裸鼠乳腺原位接種后,4-6 周即可發(fā)生腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,轉(zhuǎn)移率達(dá) 65% 以上,完整模擬了乳腺癌從原發(fā)灶到區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的過程。
在研究應(yīng)用中,CHGF-003 細(xì)胞系的價值貫穿多個領(lǐng)域。在腫瘤發(fā)生機(jī)制研究中,通過基因芯片分析發(fā)現(xiàn),其存在 PI3K/Akt 信號通路的持續(xù)激活,這與細(xì)胞中 PTEN 基因的低表達(dá)密切相關(guān),過表達(dá) PTEN 可使細(xì)胞增殖活性下降 50%,證實(shí)該通路在腫瘤發(fā)生中的驅(qū)動作用。在藥物篩選方面,該細(xì)胞系對臨床常用抗腫瘤藥物敏感,通過 CCK-8 法檢測藥物半數(shù)抑制濃度(IC50),可快速評估候選藥物的細(xì)胞毒性,尤其適用于中藥復(fù)方及天然產(chǎn)物提取物的抗腫瘤活性篩選。
此外,該細(xì)胞系在腫瘤微環(huán)境研究中也具重要價值。其分泌的轉(zhuǎn)化生長因子 -β(TGF-β)可誘導(dǎo)周圍成纖維細(xì)胞向癌相關(guān)成纖維細(xì)胞(CAFs)轉(zhuǎn)化,通過建立共培養(yǎng)模型,能觀察 CAFs 對腫瘤細(xì)胞侵襲能力的促進(jìn)作用,揭示腫瘤微環(huán)境與腫瘤進(jìn)展的相互作用。同時,該細(xì)胞可表達(dá) HER2 蛋白(人類表皮生長因子受體 2),為 HER2 靶向治療研究提供了理想模型,通過檢測靶向藥物對細(xì)胞增殖的抑制效果,可驗(yàn)證靶向治療的作用機(jī)制。
培養(yǎng)與保存 CHGF-003 細(xì)胞需注意特定條件。體外培養(yǎng)時,需維持 37℃、5% CO?的恒溫環(huán)境,培養(yǎng)基需添加 1% 非必需氨基酸以維持上皮表型,傳代時采用溫和的細(xì)胞分散方法,避免過度處理導(dǎo)致細(xì)胞損傷。體內(nèi)模型構(gòu)建推薦裸鼠乳腺脂肪墊接種,按 5×10?個細(xì)胞 / 只的劑量注射,2 周后形成可觸及的實(shí)體瘤,6 周后可用于轉(zhuǎn)移相關(guān)實(shí)驗(yàn)。
凍存時,使用含 10% DMSO 的胎牛血清作為凍存液,梯度降溫后存入液氮,復(fù)蘇時 37℃水浴快速解凍,離心去除 DMSO 后接種,存活率可達(dá) 80% 以上。值得注意的是,該細(xì)胞對血清質(zhì)量敏感,需選用批號穩(wěn)定的胎牛血清,否則易出現(xiàn)生長停滯或形態(tài)改變。
與其他乳腺癌細(xì)胞系相比,CHGF-003 的優(yōu)勢在于源自自發(fā)性腫瘤,遺傳背景更接近自然發(fā)病過程,且具備明確的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移能力,模型構(gòu)建成本低于人源腫瘤異種移植模型;但其局限性在于物種差異導(dǎo)致的信號通路差異,研究結(jié)果需結(jié)合人源細(xì)胞系驗(yàn)證。
總之,CHGF-003 大鼠乳腺癌細(xì)胞系憑借其穩(wěn)定的生物學(xué)特性、完整的轉(zhuǎn)移表型及與臨床的高度相關(guān)性,成為連接基礎(chǔ)研究與臨床轉(zhuǎn)化的重要橋梁,為解析乳腺癌發(fā)病機(jī)制、開發(fā)新型治療策略提供了可靠的實(shí)驗(yàn)平臺,推動了本土乳腺癌研究的深入發(fā)展。
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