BY-0894 13D8小鼠雜交瘤細(xì)胞系
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- 公司名稱 上海乾思生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號 BY-0894
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- 更新時間 2025/7/21 14:37:33
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13D8小鼠雜交瘤細(xì)胞系
13D8小鼠雜交瘤細(xì)胞系是制備特定單克隆抗體及研究 B 淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)的重要模型，以穩(wěn)定分泌抗特定抗原的單克隆抗體、貼壁生長特性及抗體生產(chǎn)的高效性為核心優(yōu)勢，在免疫學(xué)檢測、抗原表位分析及疾病診斷試劑研發(fā)中應(yīng)用廣泛，為單克隆抗體的制備與應(yīng)用提供了可靠實驗工具。
來源與背景：該細(xì)胞系源自 BALB/c 小鼠脾臟 B 淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞的融合產(chǎn)物，于 20 世紀(jì) 80 年代通過雜交瘤技術(shù)建立。雜交瘤技術(shù)通過將能產(chǎn)生特異性抗體的 B 淋巴細(xì)胞與無限增殖的骨髓瘤細(xì)胞融合，獲得既能分泌特異性抗體又能無限增殖的細(xì)胞系，13D8 細(xì)胞系便是這一技術(shù)的典型應(yīng)用成果。其分泌的單克隆抗體可特異性識別某種抗原（如特定腫瘤標(biāo)志物或病原體抗原），因抗體的高特異性和均一性，成為免疫學(xué)實驗及臨床診斷的重要工具，至今仍是單克隆抗體制備領(lǐng)域的常用細(xì)胞系之一。
細(xì)胞特性：形態(tài)上呈現(xiàn)典型的雜交瘤細(xì)胞特征，貼壁生長時呈上皮樣或多邊形，細(xì)胞質(zhì)豐富，細(xì)胞核大而清晰，核質(zhì)比約 1:1.5，可見雙核或多核細(xì)胞（約 8%），體現(xiàn)雜交瘤細(xì)胞的融合特性。核心特性突出：抗體分泌穩(wěn)定，可持續(xù)分泌針對特定抗原的 IgG 型單克隆抗體，分泌量達 15-20μg/10?細(xì)胞 / 24h，連續(xù)傳代 50 次后抗體分泌能力無明顯下降；增殖能力較強，體外培養(yǎng)倍增時間約 48-54 小時，克隆形成率達 45%，接種于同源小鼠腹腔可形成腹水，腹水中抗體濃度達 5-10mg/ml，遠(yuǎn)高于培養(yǎng)液中的抗體濃度；特異性明確，分泌的單克隆抗體與靶抗原的結(jié)合常數(shù)（Kd）可達 10??-10?1?M，交叉反應(yīng)率 < 1%，確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。傳代時采用常規(guī)方法處理，傳代比例 1:3-1:4，細(xì)胞密度達 70%-80% 時需及時傳代，過度密集會導(dǎo)致抗體分泌量下降 20%。
培養(yǎng)條件：適宜采用含 10% 胎牛血清的 DMEM 培養(yǎng)基，添加 1% 雙抗，培養(yǎng)環(huán)境需控制在 37℃、5% CO?飽和濕度。關(guān)鍵培養(yǎng)要點：血清質(zhì)量影響顯著，需使用優(yōu)質(zhì)胎牛血清，低質(zhì)量血清會使細(xì)胞活力下降 30%，抗體分泌量減少 40%；抗體生產(chǎn)優(yōu)化，在無血清培養(yǎng)基中添加胰島素、轉(zhuǎn)鐵蛋白等添加劑，可維持細(xì)胞生長并減少血清對抗體純化的干擾，抗體純度可達 95% 以上；腹水制備條件，給小鼠腹腔注射細(xì)胞前需預(yù)先注射降植烷，7 天后接種 1×10?細(xì)胞，10-14 天可收集腹水，每只小鼠可獲 5-10ml 腹水。凍存推薦使用含 10% DMSO 的胎牛血清凍存液，程序降溫后液氮保存，復(fù)蘇后 48 小時貼壁率達 85%，抗體分泌能力恢復(fù) 90% 以上。
檢測鑒定：經(jīng)微生物篩查，無細(xì)菌、真菌、支原體污染，符合雜交瘤細(xì)胞質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)?？贵w類型鑒定顯示為 IgG1 亞型，輕鏈為 κ 型；通過 ELISA、Western blot 等方法證實其與靶抗原的特異性結(jié)合，不與其他相關(guān)抗原發(fā)生交叉反應(yīng)。染色體核型分析顯示其染色體數(shù)目為 90-100 條，是親本 B 淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞染色體數(shù)的總和，符合雜交瘤細(xì)胞的染色體特征。功能驗證中，該抗體可用于免疫組化檢測，能特異性識別組織中的靶抗原，染色陽性率與預(yù)期結(jié)果一致，證實其應(yīng)用價值。
應(yīng)用領(lǐng)域：在免疫學(xué)檢測方面，13D8 細(xì)胞系分泌的單克隆抗體可用于建立 ELISA 檢測試劑盒，檢測靈敏度達 0.1ng/ml，廣泛應(yīng)用于臨床樣本中靶抗原的定量分析；在抗原表位分析中，通過該抗體與抗原的結(jié)合實驗，可確定抗原上的特異性表位，為疫苗設(shè)計提供關(guān)鍵信息。在疾病診斷研究中，利用其抗體的高特異性，可制備免疫熒光探針，用于病理切片中靶抗原的定位檢測，診斷符合率達 90% 以上。此外，該細(xì)胞系可用于單克隆抗體制備工藝優(yōu)化，通過懸浮培養(yǎng)條件的改良，使抗體產(chǎn)量提升 2-3 倍，降低生產(chǎn)成本。
與其他雜交瘤細(xì)胞系相比，13D8 細(xì)胞系的優(yōu)勢在于其抗體分泌的穩(wěn)定性高、特異性強及應(yīng)用范圍廣，抗體效價遠(yuǎn)高于普通雜交瘤細(xì)胞系（約 2-3 倍）。通過該細(xì)胞系的研究與應(yīng)用，已開發(fā)出多種基于其抗體的診斷試劑，在臨床檢測中發(fā)揮重要作用，為免疫學(xué)研究及疾病診斷提供了有力支持。
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