B16小鼠黑色素瘤細(xì)胞系
B16小鼠黑色素瘤細(xì)胞系系是研究黑色素瘤生物學(xué)特性的標(biāo)gan模型,以穩(wěn)定產(chǎn)生黑色素、強(qiáng)侵襲轉(zhuǎn)移能力及低免疫原性為核心特征,在黑色素瘤發(fā)生機(jī)制、轉(zhuǎn)移規(guī)律及免yi治療策略開(kāi)發(fā)中應(yīng)用廣泛,為該惡性腫瘤的基礎(chǔ)研究與臨床轉(zhuǎn)化提供了可靠實(shí)驗(yàn)載體。
來(lái)源與背景:該細(xì)胞系于 1954 年從小鼠自發(fā)黑色素瘤組織中分離建立,是目前應(yīng)用zui廣泛的小鼠黑色素瘤模型。黑色素瘤作為一種高度惡性的皮膚腫瘤,其轉(zhuǎn)移率高、預(yù)后差,而 B16 細(xì)胞系的建立為研究黑色素瘤的惡性生物學(xué)行為提供了理想工具。與人類(lèi)黑色素瘤細(xì)胞系相比,B16 細(xì)胞系在小鼠體內(nèi)的成瘤和轉(zhuǎn)移特性更接近臨床黑色素瘤的發(fā)展過(guò)程,尤其適合進(jìn)行體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究,如腫瘤轉(zhuǎn)移路徑追蹤、藥物療效評(píng)估等。經(jīng)過(guò)多年傳代,該細(xì)胞系仍保持穩(wěn)定的生物學(xué)特性,至今仍是黑色素瘤研究領(lǐng)域的重要實(shí)驗(yàn)材料。
細(xì)胞特性:形態(tài)上呈現(xiàn)典型的黑色素瘤細(xì)胞特征,貼壁生長(zhǎng)時(shí)多為上皮樣,部分呈梭形,細(xì)胞質(zhì)豐富,因含有黑色素顆粒而呈棕黑色,細(xì)胞核大且不規(guī)則,核仁明顯,核質(zhì)比約 1:1.2,可見(jiàn)多核細(xì)胞(約 8%),體現(xiàn)高度惡性腫瘤的形態(tài)學(xué)特征。核心特性包括:產(chǎn)黑色素能力穩(wěn)定,酪an酸酶活性高,黑色素合成量為每 10?細(xì)胞 20-30μg/24h,這一特性使其在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中易于追蹤;強(qiáng)侵襲轉(zhuǎn)移能力,體外培養(yǎng)倍增時(shí)間約 24-30 小時(shí),克隆形成率約 65%,Transwell 實(shí)驗(yàn)中穿膜細(xì)胞數(shù)顯著高于其他腫瘤細(xì)胞系,尾靜脈注射小鼠后肺轉(zhuǎn)移率可達(dá) 90% 以上;免疫原性低,細(xì)胞表面 MHCⅠ 類(lèi)分子表達(dá)量低,能有效逃避小鼠免疫系統(tǒng)的攻擊,皮下接種成瘤率幾乎 100%。傳代時(shí)用常規(guī)消化液處理 2-3 分鐘,傳代比例 1:5-1:8,連續(xù)傳代多次后仍保持核心特性穩(wěn)定。
培養(yǎng)條件:適宜采用含 10% 胎牛血清的 RPMI-1640 或 DMEM 培養(yǎng)基,添加 1% 抗菌劑,培養(yǎng)環(huán)境需控制在 37℃、5% CO?飽和濕度。細(xì)胞密度維持在 20%-60%,密度過(guò)高會(huì)導(dǎo)致黑色素合成減少,且增殖速率下降。對(duì)血清質(zhì)量要求較高,優(yōu)質(zhì)血清可促進(jìn)細(xì)胞黑色素合成和增殖,而低質(zhì)量血清可能導(dǎo)致細(xì)胞形態(tài)改變。傳代時(shí)避免過(guò)度消化,凍存液為 10% DMSO+90% 胎牛血清,復(fù)蘇后 24 小時(shí)貼壁率約 85%,48 小時(shí)可wan全恢復(fù)增殖活性。
檢測(cè)鑒定:經(jīng)微生物檢測(cè),無(wú)支原體、細(xì)菌、真菌污染,符合實(shí)驗(yàn)細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)。細(xì)胞形態(tài)觀察可見(jiàn)明顯的黑色素顆粒,酪an酸酶活性測(cè)定呈陽(yáng)性,證實(shí)其黑色素合成能力。染色體核型分析顯示為小鼠正常核型,無(wú)明顯異常。功能驗(yàn)證中,小鼠皮下接種后 7-10 天可形成肉眼可見(jiàn)的黑色腫瘤,且隨著時(shí)間推移腫瘤體積迅速增大,具有典型的黑色素瘤生長(zhǎng)特性。
應(yīng)用領(lǐng)域:在黑色素瘤轉(zhuǎn)移機(jī)制研究中,該細(xì)胞系被廣泛用于探索轉(zhuǎn)移相關(guān)基因的功能,研究發(fā)現(xiàn)沉默 MMP-9 基因可使 B16 細(xì)胞的肺轉(zhuǎn)移率下降 60%,證實(shí) MMP-9 在黑色素瘤轉(zhuǎn)移中的重要作用。在藥物研發(fā)方面,常用于評(píng)估抗黑色素瘤藥物的療效,如新型 BRAF 抑制劑可顯著抑制 B16 細(xì)胞的增殖,IC50 值約為 1μM。在免yi治療研究中,B16 細(xì)胞系是驗(yàn)證免yi治療策略有效性的常用模型,如 PD-1 抗體治療可使荷瘤小鼠的腫瘤體積縮小 50% 以上,延長(zhǎng)生存期。此外,該細(xì)胞系還可用于研究黑色素合成機(jī)制,為美白藥物的研發(fā)提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
與其他黑色素瘤細(xì)胞系相比,B16 細(xì)胞系的優(yōu)勢(shì)在于其穩(wěn)定的黑色素合成能力、強(qiáng)侵襲轉(zhuǎn)移特性及在小鼠體內(nèi)的高成瘤率,能較好地模擬臨床黑色素瘤的惡性行為。通過(guò)對(duì)該細(xì)胞系的研究,為黑色素瘤的診斷、治療及預(yù)防提供了重要的實(shí)驗(yàn)依據(jù),推動(dòng)了黑色素瘤研究的不斷發(fā)展。
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