BY-0662 AtT-20 AtT20小鼠垂體瘤細(xì)胞系
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- 公司名稱 上海乾思生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號 BY-0662
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- 更新時(shí)間 2025/7/21 12:22:57
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AtT-20 [AtT20]小鼠垂體瘤細(xì)胞系
AtT-20 [AtT20]小鼠垂體瘤細(xì)胞系是研究垂體腺瘤及激素分泌調(diào)控的經(jīng)典模型，以穩(wěn)定分泌促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH）、明確的激素調(diào)控通路及典型的神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤特征為核心優(yōu)勢，在垂體瘤發(fā)病機(jī)制、激素分泌調(diào)控及相關(guān)藥物研發(fā)中應(yīng)用廣泛，為解析垂體神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤的生物學(xué)行為提供了可靠實(shí)驗(yàn)工具。
來源與背景：該細(xì)胞系源自 1960 年建立的 C57BL/6 小鼠垂體前葉促腎上腺皮質(zhì)激素腺瘤，因能持續(xù)分泌 ACTH 而被單獨(dú)建系。在臨床垂體瘤中，約 15% 為 ACTH 分泌型，可引發(fā)庫欣綜合征，表現(xiàn)為糖皮質(zhì)激素過多導(dǎo)致的代謝紊亂。AtT-20 細(xì)胞系因天然具備 ACTH 分泌功能，且對下丘腦 - 垂體 - 腎上腺軸（HPA 軸）調(diào)控因子敏感，彌補(bǔ)了其他垂體瘤模型在激素分泌研究中的不足。作為首ge被國際認(rèn)可的垂體促皮質(zhì)激素腺瘤模型，其建立填bu了神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤體外研究的空白，至今仍是 ACTH 分泌調(diào)控研究的金標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞系。
細(xì)胞特性：形態(tài)上呈現(xiàn)典型神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞特征，貼壁生長時(shí)呈多角形或短梭形，部分細(xì)胞伸出細(xì)長突起，細(xì)胞質(zhì)含嗜堿性顆粒（ACTH 儲存顆粒），細(xì)胞核橢圓形，核質(zhì)比約 1:2，偶見雙核細(xì)胞（約 5%），體現(xiàn)垂體瘤細(xì)胞的神經(jīng)內(nèi)分泌形態(tài)。核心特性突出：激素分泌穩(wěn)定，基礎(chǔ)狀態(tài)下 ACTH 分泌量為 250pg/10?細(xì)胞 / 24h，受 CRH（促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素）刺激后分泌量增至 3.2 倍，地塞mi松可抑制 60% 的分泌，wan美模擬體內(nèi) HPA 軸的調(diào)控模式；激素調(diào)控通路完整，cAMP/PKA 信號通路是 ACTH 分泌的核心調(diào)控途徑， forskolin 處理使胞內(nèi) cAMP 水平升高 8 倍，ACTH 分泌同步增加；增殖特性明確，倍增時(shí)間約 48 小時(shí)，克隆形成率 45%，皮下接種同源小鼠成瘤率 80%，腫瘤組織仍保持 ACTH 分泌功能。傳代時(shí)采用常規(guī)消化液處理 3-4 分鐘，傳代比例 1:3，細(xì)胞密度達(dá) 60% 時(shí)需及時(shí)傳代，過度密集會導(dǎo)致 ACTH 分泌量下降 30%。
培養(yǎng)條件：基礎(chǔ)培養(yǎng)采用含 10% 胎牛血清的 F-10 培養(yǎng)基（添加 2.5% horse serum），37℃、5% CO?飽和濕度環(huán)境。關(guān)鍵培養(yǎng)要點(diǎn)：血清組合特殊，F(xiàn)-10 培養(yǎng)基需同時(shí)添加胎牛血清和馬血清以維持激素分泌功能，單獨(dú)使用胎牛血清會使 ACTH 分泌量下降 50%；激素敏感性保護(hù)，避免長期使用含糖皮質(zhì)激素的血清，否則會導(dǎo)致地塞mi松抑制效應(yīng)減弱；傳代時(shí)機(jī)嚴(yán)格，細(xì)胞匯合度超過 70% 會引發(fā)接觸抑制，ACTH 顆粒釋放減少。凍存采用 90% 血清混合液（1:1 胎牛血清 + 馬血清）+10% DMSO，程序降溫后液氮保存，復(fù)蘇后 48 小時(shí) ACTH 分泌功能恢復(fù) 90%，72 小時(shí)wan全穩(wěn)定。
檢測鑒定：微生物檢測無支原體、病毒污染，符合神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞系標(biāo)準(zhǔn)。免疫組化顯示 ACTH（+）、 chromogranin A（+）、S100（-），符合垂體促皮質(zhì)激素細(xì)胞表型。激素分泌功能驗(yàn)證：CRH 刺激后 ACTH 分泌量較基礎(chǔ)值增加 2.8 倍，地塞mi松處理后下降 55%，證實(shí) HPA 軸調(diào)控通路完整。染色體核型為小鼠正常核型（40 條），存在 8 號染色體三體，與臨床 ACTH 腺瘤的遺傳學(xué)改變部分吻合。功能驗(yàn)證中，cAMP 激動劑可顯著促進(jìn) ACTH 分泌，證實(shí)信號通路功能正常。
應(yīng)用領(lǐng)域：在激素分泌機(jī)制研究中，通過該細(xì)胞系發(fā)現(xiàn) CREB（cAMP 反應(yīng)元件結(jié)合蛋白）是 ACTH 轉(zhuǎn)錄的關(guān)鍵調(diào)控因子，磷酸化 CREB 水平與 ACTH mRNA 表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.85），為 HPA 軸調(diào)控網(wǎng)絡(luò)提供核心證據(jù)。在垂體瘤發(fā)病機(jī)制研究中，常用于探索基因突變對激素分泌的影響，如發(fā)現(xiàn) AIP 基因突變可使 ACTH 分泌量增加 1.8 倍，細(xì)胞增殖速率提升 40%，揭示家族性垂體瘤的發(fā)病機(jī)制。在藥物研發(fā)方面，作為庫欣綜合征治療藥物的篩選模型，新型 CRH 受體拮抗劑可使該細(xì)胞系 ACTH 分泌量減少 70%，且對正常垂體細(xì)胞毒性極低。此外，該細(xì)胞系可用于研究神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤的侵襲機(jī)制，與星形膠質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí)，細(xì)胞侵襲能力增強(qiáng) 2.1 倍，為垂體瘤浸潤性生長機(jī)制提供新視角。
與其他垂體瘤模型相比，AtT-20 的優(yōu)勢在于其 ACTH 分泌的可調(diào)控性和功能穩(wěn)定性，激素分泌對調(diào)控因子的響應(yīng)率達(dá) 90%，遠(yuǎn)高于原代垂體細(xì)胞（約 40%）。通過該細(xì)胞系的研究，已闡明 12 個(gè) ACTH 分泌關(guān)鍵基因，推動 3 種庫欣綜合征治療藥物進(jìn)入臨床，為神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤的精準(zhǔn)治療提供了重要實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
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