HB 11A-A11小鼠雜交瘤細(xì)胞系
HB 11A-A11小鼠雜交瘤細(xì)胞系是單克隆抗體制備與免疫相關(guān)研究的重要細(xì)胞模型,以穩(wěn)定分泌特異性抗體、良好的體外增殖能力及明確的抗原識(shí)別特性為顯著優(yōu)勢,在生物分子檢測、疾病診斷及免疫學(xué)機(jī)制研究中應(yīng)用廣泛,為單克隆抗體的研發(fā)與應(yīng)用提供了可靠的細(xì)胞資源。
來源與背景:該細(xì)胞系源于 BALB/c 小鼠脾臟 B 淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞的融合產(chǎn)物,通過雜交瘤技術(shù)篩選克隆獲得。其建立過程是將經(jīng)特定抗原免疫的小鼠脾臟 B 淋巴細(xì)胞與具有無限增殖能力的骨髓瘤細(xì)胞融合,經(jīng)多次篩選得到能穩(wěn)定分泌針對該抗原的單克隆抗體的細(xì)胞系。這一細(xì)胞系的成功構(gòu)建,解決了多克隆抗體特異性差、批間差異大的問題,為獲得均一性高、特異性強(qiáng)的抗體提供了有效途徑,自建立以來,在免疫檢測等領(lǐng)域發(fā)揮了重要作用。
細(xì)胞特性:形態(tài)上呈現(xiàn)典型的雜交瘤細(xì)胞形態(tài),貼壁生長時(shí)多為上皮樣,細(xì)胞呈多邊形或短梭形,細(xì)胞質(zhì)豐富,細(xì)胞核較大且清晰,核質(zhì)比約 1:2.2,約 7% 的細(xì)胞可見雙核,體現(xiàn)了雜交瘤細(xì)胞的融合特征。核心特性突出:抗體分泌穩(wěn)定,分泌量達(dá) 8-14μg/10?細(xì)胞 / 24h,連續(xù)傳代 55 次后,抗體分泌能力下降幅度僅為 10%,穩(wěn)定性優(yōu)于多數(shù)普通雜交瘤細(xì)胞系;抗原結(jié)合特異性優(yōu)異,與靶抗原的結(jié)合常數(shù)(Kd)達(dá) 10??M 級別,與其他類似抗原的交叉反應(yīng)率低于 1.2%,保證了檢測結(jié)果的可靠性;增殖能力良好,體外培養(yǎng)倍增時(shí)間約 54-60 小時(shí),克隆形成率 35%,腹腔接種 BALB/c 小鼠后,14-20 天可形成腹水,腹水中抗體濃度為 2-6mg/ml,便于大量獲取抗體。傳代時(shí)采用常規(guī)處理方法,傳代比例 1:3-1:4,當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到 70%-75% 時(shí)需及時(shí)傳代,過度密集會(huì)使抗體分泌量下降約 20%。
培養(yǎng)條件:適宜采用含 10% 胎牛血清的 RPMI-1640 培養(yǎng)基,添加 1% 雙抗,培養(yǎng)環(huán)境需維持在 37℃、5% CO?飽和濕度。關(guān)鍵培養(yǎng)要點(diǎn):血清質(zhì)量至關(guān)重要,應(yīng)選用低內(nèi)毒素胎牛血清(<0.3EU/ml),劣質(zhì)血清會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞活力降低 28%,抗體分泌量減少 35%;無血清培養(yǎng)適應(yīng)性較好,在無血清培養(yǎng)基中添加適量的胰島素、轉(zhuǎn)鐵蛋白等營養(yǎng)因子,可維持細(xì)胞正常生長,且抗體純度能提高至 94% 以上,有利于后續(xù)的抗體純化;腹水制備有規(guī)范流程,小鼠腹腔預(yù)先注射降植烷,7 天后接種 1.2×10?個(gè)細(xì)胞,16-22 天收集腹水,每只小鼠可收獲 3-5ml 腹水,腹水經(jīng)處理后抗體活性穩(wěn)定。凍存采用含 10% DMSO 的胎牛血清凍存液,程序降溫后液氮保存,復(fù)蘇后 48 小時(shí)貼壁率達(dá) 78%,抗體分泌功能恢復(fù) 83% 以上。
檢測鑒定:經(jīng)微生物檢測,無細(xì)菌、真菌、支原體污染,符合雜交瘤細(xì)胞的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)??贵w亞型鑒定為 IgG2b 型,輕鏈為 κ 型;通過 ELISA、免疫印跡等方法驗(yàn)證,該抗體能特異性結(jié)合靶抗原,無明顯交叉反應(yīng)。染色體核型分析顯示,其染色體數(shù)目為 82-92 條,融合了親本 B 淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞的染色體特征,符合雜交瘤細(xì)胞的遺傳學(xué)特性。功能驗(yàn)證中,將該抗體用于免疫熒光檢測,能特異性識(shí)別樣本中的靶抗原,熒光信號(hào)集中,背景干擾小,證明其在免疫檢測中的實(shí)用性。
應(yīng)用領(lǐng)域:在生物分子檢測方面,基于該細(xì)胞系分泌的抗體構(gòu)建的檢測試劑盒,對靶分子的檢測靈敏度達(dá) 0.4ng/ml,線性范圍廣,適用于多種樣本類型中靶分子的定量分析;在疾病診斷研究中,利用該抗體開發(fā)的免疫層析試紙條,可快速檢測相關(guān)疾病標(biāo)志物,檢測時(shí)間僅需 15 分鐘,準(zhǔn)確率達(dá) 89% 以上。在免疫學(xué)機(jī)制研究中,可用于探究抗原與抗體的相互作用,通過分析兩者的結(jié)合位點(diǎn),為理解免疫反應(yīng)的分子機(jī)制提供線索。此外,該細(xì)胞系可用于優(yōu)化抗體生產(chǎn)工藝,通過調(diào)整懸浮培養(yǎng)的條件,能使抗體產(chǎn)量提升 1.4-2 倍,有助于降低抗體規(guī)?;a(chǎn)的成本。
與其他雜交瘤細(xì)胞系相比,HB 11A-A11 細(xì)胞系的優(yōu)勢在于抗體分泌穩(wěn)定性強(qiáng)、傳代壽命較長,且在不同培養(yǎng)條件下抗體的特異性變化較小,適合用于標(biāo)準(zhǔn)化抗體的制備。通過該細(xì)胞系的應(yīng)用,已助力開發(fā)出多種免疫檢測工具,廣泛應(yīng)用于科研實(shí)驗(yàn)和臨床診斷,為免疫學(xué)研究及相關(guān)疾病的檢測提供了有力支持。
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