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藥品質(zhì)量檢測方法：熒光分光光度法
2022年08月24日 10:35:53
來源：化工儀器網(wǎng) 點擊量：6840
熒光分光光度法是根據(jù)物質(zhì)的熒光譜線位置及其強度進行物質(zhì)鑒定和含量測定的方法。
【化工儀器網(wǎng) 行業(yè)百態(tài)】熒光是指物質(zhì)分子在激發(fā)態(tài)最低振動能級返回到基態(tài)各振動能級時所發(fā)出來的光，比激發(fā)光波長更長。熒光分光光度法是根據(jù)物質(zhì)的熒光譜線位置及其強度進行物質(zhì)鑒定和含量測定的方法。當(dāng)激發(fā)光強度、波長、所用溶劑和溫度等條件固定時，物質(zhì)在一定濃度范圍內(nèi)，其發(fā)射光強度與溶液中該物質(zhì)的濃度成正比關(guān)系，可以用于該物質(zhì)的含量測定。
由于不同的物質(zhì)其組成與結(jié)構(gòu)不同，所吸收的紫外-可見光波長和發(fā)射光的波長也不同，同一種物質(zhì)應(yīng)具有相同的激發(fā)光譜和熒光光譜，將未知物的激發(fā)光譜和熒光光譜圖的形狀、位置與標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的光譜圖進行比較，即可對其進行定性分析。如果該物質(zhì)的濃度不同，它所發(fā)射的熒光強度就不同，測量物質(zhì)的熒光強度可對其進行定量測定。
熒光分光光度法的特點是靈敏度高、選擇性好、樣品用量少和操作簡便，常用于微量甚至痕量毒物的定量分析。其靈敏度一般較紫外-可見分光光度法高，但濃度太高的溶液會發(fā)生“自熄滅”現(xiàn)象，而且在液面附近溶液會吸收激發(fā)光，使發(fā)射光強度下降，導(dǎo)致發(fā)射光強度與濃度不成正比，故熒光分光光度法應(yīng)在低濃度溶液中進行。在衛(wèi)生檢驗、環(huán)境及食品分析、藥物分析、生化和臨床檢測等方面有著廣泛的應(yīng)用。
測定法
熒光分光光度法所用的儀器為熒光計或熒光分光光度計，按各品種項下的規(guī)定，選定激發(fā)光波長和發(fā)射光波長，并制備對照品溶液和供試品溶液。
通常熒光分光光度法是在一定條件下，測定對照品溶液熒光強度與其濃度的線性關(guān)系。當(dāng)線性關(guān)系良好時，可在每次測定前，用一定濃度的對照品溶液校正儀器的靈敏度。然后在相同的條件下，分別讀取對照品溶液及其試劑空白的熒光強度與供試品溶液及其試劑空白的熒光強度，并用下式計算供試品濃度：
式中，Cx為供試品溶液的濃度，Cr為對照品溶液的濃度，Rx為供試品溶液的熒光強度，Rxb為供試品溶液試劑空白的熒光強度，Rr為對照品溶液的熒光強度，Rrb為對照品溶液試劑空白的熒光強度。
且因熒光分光光度法中的濃度與熒光強度的線性范圍較窄，故(Rx-Rxb)/(Rr-Rrb)應(yīng)控制在0.5～2之間為宜，如若超過，應(yīng)在調(diào)節(jié)溶液濃度后再進行測定。需要注意的是，當(dāng)濃度與熒光強度的關(guān)系明顯偏離線性范圍時，應(yīng)改用標(biāo)準(zhǔn)曲線法進行含量測定。
對易被光分解或弛豫時間較長的品種，為使儀器靈敏度定標(biāo)準(zhǔn)確，避免因激發(fā)光多次照射而影響熒光強度，可選擇一種激發(fā)光和發(fā)射光波長與供試品近似而對光穩(wěn)定的物質(zhì)配成適當(dāng)濃度的溶液，作為基準(zhǔn)溶液。例如藍色熒光可用硫酸奎寧的稀硫酸溶液，黃綠色熒光可用熒光素鈉水溶液，紅色熒光可用羅丹明B水溶液等。在測定供試品溶液時選擇適當(dāng)?shù)幕鶞?zhǔn)溶液代替對照品溶液校正儀器的靈敏度。
【附注】
熒光分光光度法因靈敏度高，故應(yīng)注意以下干擾因素。
(1)溶劑不純會帶入較大誤差，應(yīng)先做空白檢查，必要時，應(yīng)用玻璃磨口蒸餾器蒸餾后再用。
(2)溶液中的懸浮物對光有散射作用，必要時，應(yīng)用垂熔玻璃濾器濾過或用離心法除去。
(3)所用的玻璃儀器與測定池等也必須保持高度潔凈。
(4)溫度對熒光強度有較大的影響，測定時應(yīng)控制溫度一致。
(5)溶液中的溶氧有降低熒光作用，必要時可在測定前通入惰性氣體除氧。
測定時需注意溶液的pH值和試劑的純度等對熒光強度的影響。
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