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普通pcr和熒光定量pcr的區(qū)別2022/09/22

PCR儀也被稱做“基因擴增儀”是核酸檢測、PCR實驗、qpcr實驗常用的儀器設(shè)備，根據(jù)PCR實驗方法主要分為以下幾種：普通PCR儀、梯度PCR儀、熒光定量PCR儀、快速PCR儀、原位PCR儀等。一、普通PCR儀普通PCR是指在PCR過程中指設(shè)定一個退火溫度參數(shù)，進行樣本的PCR擴增。這種PCR儀往往屬于單通道模式，單一的參數(shù)設(shè)定，會影響到實驗效率，所以比較適宜用在檢測量較小，實驗任務(wù)量不大的小規(guī)模PCR擴增實驗室。比如學校實驗室，科研機構(gòu)實驗室，檢測實驗室等。二、梯度PCR儀梯度PCR采用多通道

細胞培養(yǎng)生物反應器放大效果不理想，可能因為你沒有注意到這幾點？2022/09/22

隨著轉(zhuǎn)基因制藥技術(shù)的不斷發(fā)展，細胞培養(yǎng)放大的規(guī)?；枨笠苍谥饾u增大，通常在實驗室進行的小批量細胞傳代實驗由于投入成本小，操作過程熟練，基本不會存在太大問題，當進入生物反應器規(guī)模化培養(yǎng)階段時，投入的成本往往較大，需要考慮的因素也變多，稍不注意就會影響到細胞的產(chǎn)量或質(zhì)量。其實細胞的培養(yǎng)放大不論是處在哪個階段的放大都需要保持在同一恒定的環(huán)境下進行，這樣才能培養(yǎng)出生長密度、細胞存活率、以及培養(yǎng)產(chǎn)物等維持相對穩(wěn)定的狀態(tài)。所以在進入生物反應器擴培階段時，需要注意到以下幾點：一、攪拌槳類型、攪拌轉(zhuǎn)速及剪切力通

HEK293T 細胞與HEK293是同一種細胞嗎？2022/09/01

如果您*熟悉細胞培養(yǎng)，您可能聽說過HEK293細胞。HEK293細胞新藥實驗室較為常用的細胞系之一。但它們是什么？為什么要使用它們？“293”是什么意思？與HEK293T細胞相同嗎？請繼續(xù)閱讀這些問題的答案以及更多內(nèi)容。一、什么是HEK293細胞？HEK293細胞是人類胚胎腎細胞，起初由荷蘭生物學家AlexVanderEb在1970年代初期分離和培養(yǎng)。VanderEb實驗室的博士后FrankGraham用剪切的腺病毒5(Ad5)DNA進行轉(zhuǎn)染。這是他們的第293次實驗，所以就命名該細胞系為HEK

細胞外泌體分離方法2022/08/31

標簽：外泌體離心分離外泌體分離高速離心機細胞外泌體在生物流體中發(fā)現(xiàn)的細胞外囊泡包括來自內(nèi)體，多泡體的細胞外泌體（30nm至150nm）和來自質(zhì)膜的微泡（150nm至1000nm）。目前已知有多種從生物體液中分離外泌體的方法出了使用高速離心機的離心分離法以外，還有色譜法、超濾過濾法、基于聚合物的沉淀和免疫分離法等。這些細胞外泌體分離方法提取的外泌體要警惕非外泌體顆粒污染，如凋亡小體、凋亡小囊泡、外泌體和脂蛋白，均會對獲得的外泌體生物活性產(chǎn)生影響。另外，分離方法也會影響細胞外泌體的純度和產(chǎn)量。如果要

什么是HEK293 細胞，293細胞的應用有哪些方面？2022/08/18

如果您*熟悉細胞培養(yǎng)，您可能聽說過HEK293細胞。HEK293細胞新藥實驗室較為常用的細胞系之一。但它們是什么？為什么要使用它們？“293”是什么意思？與HEK293T細胞相同嗎？請繼續(xù)閱讀這些問題的答案以及更多內(nèi)容。一、什么是HEK293細胞？HEK293細胞是人類胚胎腎細胞，起初由荷蘭生物學家AlexVanderEb在1970年代初期分離和培養(yǎng)。VanderEb實驗室的博士后FrankGraham用剪切的腺病毒5(Ad5)DNA進行轉(zhuǎn)染。這是他們的第293次實驗，所以就命名該細胞系為HEK

ELISA試劑盒真假難辨，學會三招“去偽存真”2022/08/02

ELISA試劑盒也被稱為酶聯(lián)免疫試劑盒，近些年來在實驗室中是的使用越來越廣泛主要應用于分子診斷，分子生物學領(lǐng)域。目前市場上的這類試劑盒的品質(zhì)良莠不齊，國產(chǎn)的，進口的，分裝的相關(guān)試劑，抗體層出不窮。甚至出現(xiàn)了貼牌試劑盒、劣試劑盒，以次充好。那么怎么區(qū)分真假試劑盒呢？區(qū)別試劑盒真假的主要方法有以下幾種：一、通過ELISA試劑盒的指標盒價格判別國內(nèi)有些公司的國產(chǎn)試劑盒的品類盒指標可以達到上千種以上，遇到此類ELISA試劑的的時候要慎重下單。因為對于一些常見指標如IL-6、TNF、MMP-9等類型的指標

如何利用生物反應器實現(xiàn)干細胞體外擴增培養(yǎng)2022/08/02

干細胞是指具有無限分裂增長能力，可以進行自我更新，并能在不同誘導條件下，分化成不同類型的細胞的一種特殊生物細胞。比如我們常見的骨髓干細胞胚胎干細胞，廣泛應用于免疫系統(tǒng)疾病治療，內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病治療等。細胞培養(yǎng)技術(shù)中利用生物反應器進行干細胞的體外培養(yǎng)，使干細胞大量增殖量產(chǎn)，已成為3D干細胞擴培的主流手段。一、干細胞的培養(yǎng)方法干細胞的培養(yǎng)方法主要有兩種，一種是2D培養(yǎng)，另一種是3D立體培養(yǎng)。2D培養(yǎng)多采用貼壁培養(yǎng)技術(shù)，在培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿等容器中加入細胞生長所必須的營養(yǎng)物質(zhì)，在特定的培養(yǎng)環(huán)境下，細胞貼附于

pcr耗材會直接影響pcr檢測實驗結(jié)果的準確性嗎？2022/08/02

直接影響到pcr檢測實驗結(jié)果的因素，通常有以下幾種：引物與模板DNA互補的程度、酶的濃度、鎂離子濃度、dNTP的質(zhì)量與濃度。還有循環(huán)次數(shù)、溫度和時間的設(shè)置，pcr實驗設(shè)備與配套耗材等在眾多影響因素中，pcr實驗耗材也是影響pcr檢測實驗結(jié)果的重要因素。用于pcr檢測的耗材類型包括：8連管、pcr管、無裙邊、半裙邊，全裙邊，深孔板孔等。這么多的耗材該如何選擇呢？pcr耗材多數(shù)屬于PP材質(zhì)，由于這種材質(zhì)不僅有良好的化學耐性而且表面不易粘附生物分子，可耐120°C的高溫。我們常見的pcr耗材規(guī)格及體積

如何分析定量PCR實驗中的Ct值與Cq 值?2022/08/01

如何分析定量PCR實驗中的Ct值與Cq值？在進行定量PCR實驗時，實驗數(shù)據(jù)中的Ct值是至關(guān)重要的。今天將帶您了解Ct值在qPCR中的關(guān)鍵作用、及其計算方式和分析統(tǒng)計方法。Ct值多重名稱在我們深入解釋什么是Ct值之前，我們想花點時間強調(diào)一下，多年來該值已被賦予多個名稱，包括：Ct–閾值循環(huán)Cp–交叉點TOP——起飛點Cq–量化周期這些值都是一樣的，只是名稱不同。為了規(guī)范qPCR的命名法，一般標準實驗中會使用Cq值。什么是Cq值？定量PCR實驗通常用于量化目標序列的絕對量或比較樣本之間目標序列的相對

凝膠成像儀的應用2022/07/29

凝膠成像是指對基因片段或蛋白等進行凝膠電泳實驗并通過其成像的圖像進行系統(tǒng)分析的一種測定方法。不同類型的凝膠成像，它的應用范圍也不一樣。用于實驗的凝膠成像主要應用在以下幾種類型的實驗：1.分子生物學中分子量的估算：通過凝膠成像系統(tǒng)的電泳實驗分析可直接估算蛋白或DNA/RNA分子量的大小。2.分子密度的掃描與定量：通過凝膠成像系統(tǒng)與染色實驗相結(jié)合的方法可以輕松進行分子密度的掃描和定量分析。3.PCR定量：PCR定量是分子生物學中常常遇到的，通過凝膠成像分析系統(tǒng)可以快速地進行PCR定量分析。我們常見的

凝膠成像儀的作用2022/07/29

凝膠成像儀相信大家都不陌生，它在生物實驗中都扮演著什么角色呢？今天我們就來了解一下：1、采集實驗過程中的圖像凝膠成像儀的主要作用使通過自帶的CCD設(shè)備拍攝圖像并傳輸在電腦中。工作原理如下：在暗箱中的紫外燈照射下，通過紫外燈的光源，在暗箱中自動完成對焦成像并優(yōu)化所獲取的圖像信息存儲在設(shè)備中，實驗者可以在圖像中添加注釋貨相關(guān)信息，編輯完成后，即可打印或傳輸。2、DNA或蛋白分子定量通過凝膠電泳實驗獲得不同的DNA或蛋白條帶影像，再利用凝膠成像儀上的圖象處理軟件中相關(guān)功能自動比對Marker標準條值，

利用微生物發(fā)酵罐生產(chǎn)雙歧桿菌工藝技術(shù)2022/07/27

標簽：雙歧桿菌發(fā)酵罐微生物微生物發(fā)酵罐雙歧桿菌是一種益生菌，可有效增加腸道內(nèi)有益菌群，對于維持腸道的微生態(tài)平衡有著十分重要的作用，市場上的雙歧桿菌主要是利用微生物發(fā)酵罐經(jīng)過菌液培養(yǎng)、比例調(diào)配、接種發(fā)酵，凍干等生產(chǎn)工藝所制成的片劑、干粉或膠囊制劑。一、雙歧桿菌的作用雙歧桿菌對于人體健康起著重要的作用，據(jù)統(tǒng)計嬰兒哺乳期腸道內(nèi)的雙歧桿菌數(shù)量可以達到菌群數(shù)量的90%左右，而隨著年齡的增長該菌群數(shù)量開始逐漸減少，65歲以上的老人，雙歧桿菌數(shù)量甚至降低至7%左右。另外，雙歧桿菌還具有減低內(nèi)毒素，護肝、抗腫瘤

傳感器在生物反應器上的應用2022/07/27

傳感器是生物反應器至關(guān)重要的部件之一，在生物反應器中，傳感器主要用來收集培養(yǎng)物中的pH數(shù)據(jù)、溶氧(DO)值、CO2濃度、溫度以及細胞活力等數(shù)據(jù)。一、PH傳感器的應用細胞培養(yǎng)過程中，隨著培養(yǎng)基的分解和細胞產(chǎn)物的不斷累積，罐內(nèi)的環(huán)境PH值也不斷變化，如果反應器內(nèi)的PH值偏高或偏低都會對細胞的生長及細胞活力造成嚴重的影響，。所以通過PH傳感器可以實時了解生物反應器內(nèi)的PH值及培養(yǎng)基營養(yǎng)成分的變化，以便及時有效地進行PH環(huán)境調(diào)節(jié)。在生物反應器中由于傳感器屬于實時傳送測量數(shù)據(jù)，探頭需要長期接觸高溫、高濕度

pcr擴增的原理和具體實驗步驟2022/07/27

pcr擴增的原理和具體實驗步驟PCR實驗是分子生物學中常見用的實驗之一，在基因擴增、核酸檢測、基因檢測等方面廣泛應用。pcr擴增的原理和步驟如下：一、試劑準備：PCR常用的試劑主要包括DNA模板、引物、ddH2O、DNA聚合酶以及特定的反應緩沖液、dNTP、MgSO4（可選）和DMSO（可選）。二、PCR實驗前的準備在開始PCR實驗之前，必須準備好DNA模板（基因組DNA或逆轉(zhuǎn)錄制備的cDNA）、特異性引物（自己設(shè)計或用軟件設(shè)計），并選擇合適的商業(yè)酶（選擇符合您實驗目的的酶)1.DNA聚合酶。有

細胞遺傳學分析中淋巴細胞微核測定方法介紹2022/07/26

細胞遺傳學分析中淋巴細胞微核測定方法介紹淋巴細胞微核測定是細胞遺傳學分析中常用的方法之一,通過微核率的高低可以有效判斷染色體畸變率與輻射損傷。一、淋巴細胞分離分離使用Ficoll-Paque密度梯度分離淋巴細胞。將血液用磷酸鹽緩沖鹽水按1:1稀釋，并在Ficoll-Paque上分層，血液+PBS:Ficoll的比例保持為4:3。血液在室溫下以1800rpm離心35分鐘。去除淋巴細胞層（血沉棕黃層）并在PBS中以1200rpm洗滌兩次，每次10分鐘，然后用培養(yǎng)基RPMI1640洗滌。用血細胞計數(shù)器

發(fā)酵罐中316L與304不銹鋼在材質(zhì)及應用領(lǐng)域上的區(qū)別2022/07/26

發(fā)酵罐中316L與304不銹鋼在材質(zhì)及應用領(lǐng)域上的區(qū)別隨著生物技術(shù)及生物制藥的不斷發(fā)展，當前小分子藥物、基因工程藥物等創(chuàng)新藥層出不窮，生物反應器、不銹鋼發(fā)酵罐等制藥設(shè)備也被廣泛應用。那么藥企車間里的制藥設(shè)備制藥企業(yè)的不銹鋼發(fā)酵罐是什么材質(zhì)的呢？是否一定全部要使用316L材質(zhì)的？其實這個問題制藥看是否直接參與制藥生產(chǎn)的反應過程了，雖然政策沒有嚴格要求藥企的所有設(shè)備均采用316L類型的不銹鋼材質(zhì)，但是大多數(shù)還是選擇該型號。個人認為，制藥設(shè)備是否采用316L材質(zhì)的不銹鋼主要還是要根據(jù)產(chǎn)品的性能及用途來

細胞培養(yǎng)過程中的常見問題及解決方案2022/07/25

標簽：細胞細胞培養(yǎng)液氮培養(yǎng)基細胞培養(yǎng)是生命科學實驗中的基礎(chǔ)實驗，在細胞生長過程中，很多因素都會造成細胞生長不良。下面簡單歸納一下細胞生長不良的原因及對應的解決方案。常見問題一：為什么細胞解凍后缺少活力，活細胞占比較低？這種現(xiàn)象可能主要由以下幾種原因所導致：1.培養(yǎng)物凍存液等質(zhì)量欠缺。解決方案：a.確保用來制備儲存物（凍存液）的起始培養(yǎng)物需要保證其健康、無微生物污染、處于生長對數(shù)期后期狀態(tài)。b.收獲細胞時需要小心翼翼，避免細胞損傷。2.儲存物凍存方法不當解決方案：a.在液氮冷凍細胞時，確保細胞、培

PCR擴增儀的原理及擴增實驗中存在的問題2022/07/22

標簽：pcr擴增熒光定量pcr定量pcrpcr儀pcr實驗室PCR擴增儀基因擴增儀PCR檢測方法有很多，其中PCR擴增儀又稱為“PCR儀”，它是PCR實驗中*的實驗室設(shè)備之一。PCR儀器大致可以分為三類：即：普通PCR儀，熒光定量PCR儀，梯度PCR儀和原位PCR儀等。一、PCR的原理在pcr擴增實驗中，PCR反應過程實質(zhì)就是DNA按模板復制而發(fā)生的聚合酶鏈反應的過程，主要包括引物、dNTP、DNA靶序列、DNA聚合及PH緩沖液體系。PCR反應過程如下：1.通過升溫反應體系混合物一般為：94℃/

分光光度計常見問題匯總2022/07/22

分光光度計是分子生物學中較為常見的儀器，是利用光譜成像，分光光度計就是利用分光光度法對物質(zhì)進核酸、BCA等物定量操作。分光光度計主要由發(fā)光源組件、單色器組件、樣品空間、CCD檢測器、信號處理器和顯示與存儲系統(tǒng)組成。常見的問題主要有以下幾點：一、儀器顯示數(shù)值無法歸零。這種情況往往可能是由于儀器存放條件或使用條件不當造成光電管暗盒受潮、內(nèi)部電路板短路等情況所導致。所以平時儀器應當放在陰涼干燥的環(huán)境中，暗盒中存放適量的干燥劑，使儀器保持干燥的狀態(tài)，切勿長期存放在在濕熱環(huán)境中，長時間不使用時可以斷掉電源

搖瓶在微生物種子制備工藝中的應用2022/07/21

搖瓶在微生物種子制備工藝中的應用標簽：搖瓶緩沖液微生物種子制備搖瓶種子即接種在搖瓶內(nèi)用于搖瓶發(fā)酵試驗或發(fā)酵罐生產(chǎn)的微生物菌種。用于接種傳代第一代的種子稱為“母瓶”，用于接種傳代第二代的種子就叫做“子瓶”。“母瓶”和“子瓶”均可應用在微生物發(fā)酵罐進行規(guī)模擴培傳代培養(yǎng)。一、培養(yǎng)基制備在搖瓶中進行種子制備的主要目標是培養(yǎng)強生長活性的營養(yǎng)菌體，所以在配制培養(yǎng)基階段必須以滿足菌體生長要求為目的。比如在培養(yǎng)基中添加足量的營養(yǎng)物質(zhì)，包括碳、氮源、緩沖液、無機鹽和生長因子等物質(zhì)。在培養(yǎng)基中添加緩沖液的主要作用是