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上海撫生實(shí)業(yè)有限公司
初級(jí)會(huì)員 | 第8年
?一般ELISA試劑盒組成結(jié)構(gòu)成分2023/01/29
一般ELISA試劑盒組成結(jié)構(gòu):1、血清:操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血紅細(xì)胞迅速小心地分離。2、血漿:EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測(cè)。1000×g離心30分鐘去除顆粒。3、細(xì)胞上清液:1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。4、組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液。5、保存:如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆
挑選適合細(xì)胞生長(zhǎng)的血清幾個(gè)方法2023/01/16
血清是一種純天ran培養(yǎng)基,含有細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖所需的多種營(yíng)養(yǎng)成分,如蛋白質(zhì)、多肽等,多用于細(xì)胞培養(yǎng)、生物制品及診斷試劑的。血清的主要成分是蛋白質(zhì),血清的組成成分與含量常常與供血?jiǎng)游镄詣e、年齡、生理?xiàng)l件和營(yíng)養(yǎng)條件有關(guān)。那么,如何挑選適合細(xì)胞生長(zhǎng)的血清?總結(jié)幾點(diǎn)方法如下:1.看產(chǎn)地不同產(chǎn)地的胎牛血清,品質(zhì)也是相差甚遠(yuǎn)。值得注意的是,胎牛血清是動(dòng)物源生物制品,我國(guó)對(duì)于動(dòng)物源制品的進(jìn)口一直有很嚴(yán)格的規(guī)定,目前我國(guó)批準(zhǔn)進(jìn)口的胎牛血清來(lái)源是澳大利亞、新西蘭和烏拉圭,合法正規(guī)途徑進(jìn)口的胎牛血清必須在產(chǎn)品包裝上標(biāo)
中和抗體ELISA檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)步驟2023/01/10
中和抗體ELISA檢測(cè)試劑盒利用競(jìng)爭(zhēng)法ELISA原理,當(dāng)樣本中存在中和抗體時(shí)與刺突RBD蛋白結(jié)合,從而阻止了RBD與預(yù)包被板底的ACE2蛋白的結(jié)合,用于病毒中和抗體的定量檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)步驟:1.將100ul2ug/mlACE2加入至每孔,4℃孵育過(guò)夜;2.第二天,50ul稀釋好的樣本+50ul刺突RBD蛋白混合后,室溫孵育2h;3.包被后,移除孔中的ACE2蛋白,加入稀釋好的封閉液,室溫封閉1h;4.移除孔中的封閉液,用200ulwashbuffer洗滌一次;5.將孵育好的樣本+刺突RBD蛋白混合液
細(xì)胞培養(yǎng)基本操作過(guò)程2023/01/05
細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)指的是細(xì)胞在體外條件下的生長(zhǎng),在培養(yǎng)的過(guò)程中細(xì)胞不再形成組織(動(dòng)物)。培養(yǎng)物是單個(gè)細(xì)胞或細(xì)胞群。細(xì)胞在培養(yǎng)時(shí)都要生活在人工環(huán)境中,由于環(huán)境的改變,細(xì)胞的移動(dòng)或受一些其他因素的影響,培養(yǎng)時(shí)間加長(zhǎng),傳代導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)單一化型。細(xì)胞培養(yǎng)基本操作過(guò)程以下幾點(diǎn):1.準(zhǔn)備工作:準(zhǔn)備工作的內(nèi)容包括器皿的清洗、干燥與消毒,培養(yǎng)基與其他試劑的配制、分裝及滅菌,無(wú)菌室或超凈臺(tái)的清潔與消毒,培養(yǎng)箱及其他儀器的檢查與調(diào)試。2.取材:在無(wú)菌環(huán)境下從機(jī)體取出某種組織細(xì)胞(視實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩?,經(jīng)過(guò)一定的處理(如消化分
標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋解析2022/12/19
下面標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋解析:1、標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液的選擇:若血清、血漿、組織勻漿樣本,用試劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液,梯度稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。若細(xì)胞上清樣本,建議用細(xì)胞培養(yǎng)基梯度稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。2、耗材準(zhǔn)備:準(zhǔn)備8個(gè)1.5Ml離心管,寫上S1-S7、空白。3、梯度稀釋:根據(jù)說(shuō)明書,每管加入等體積的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(培養(yǎng)基)。吸取同體積溶解好的標(biāo)準(zhǔn)品到S1管中,吹打10次混勻,渦旋5S。從S1管中吸取同體積溶液到S2管,吹打10次混勻,渦旋5s。同法稀釋S3-S7濃度。4、空白:標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(培養(yǎng)基)作為空白即零濃度。注意:梯度
蛋白酶抑制劑的作用解讀2022/12/13
蛋白酶抑制劑從廣義上指與蛋白酶分子活性中心上的一些基團(tuán)結(jié)合,使蛋白酶活力下降,甚至消失,但不使酶蛋白變性的物質(zhì)。從放線菌發(fā)酵液中分離到亮肽素、抗痛素、糜蛋白酶抑素、抑彈性蛋白酶醛、抑胃蛋白酶素、磷酰胺素等,能分別抑制胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、糜蛋白酶、彈性蛋白酶、胃蛋白酶、金屬蛋白酶等各種蛋白酶。都屬于蛋白酶抑制劑。蛋白酶抑制劑的作用特點(diǎn):是基于肽類的化合物,它們或競(jìng)爭(zhēng)性抑制蛋白酶活性或作為互補(bǔ)蛋白酶活性點(diǎn)的抑制劑。這類藥wu能抑制蛋白酶的活性,其主要作用于艾滋病病毒復(fù)制的后階段,由于蛋白酶被抑制,
小鼠ELISA試劑盒收集標(biāo)本注意事項(xiàng)2022/12/06
ELISA的檢測(cè)目的是為了實(shí)驗(yàn)提供準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)依據(jù),為了保證實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可靠性,在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中必須堅(jiān)持全面的質(zhì)量控制和全過(guò)程質(zhì)量控制,在收集標(biāo)本前都必須有一個(gè)完整的計(jì)劃。1、每個(gè)樣本量收集體積=100ulx檢測(cè)種類,如果要做復(fù)孔,標(biāo)本量收集體積=100ulx檢測(cè)種類x2。2、樣本收集后若在一周內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)可保存于2-8°C,若不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)進(jìn)行分裝,凍存于-20°或-80°C,避免反復(fù)凍融3、試劑盒的檢測(cè)范圍不等同于樣本中待測(cè)物的濃度范圍,建議實(shí)驗(yàn)前通過(guò)相關(guān)文獻(xiàn)預(yù)估樣本中待測(cè)物的濃度并通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)確定樣本
RT-PCR反應(yīng)靈敏度提高具體方式2022/11/25
PCR是一種選擇性體外擴(kuò)增DNA或RNA片段的方法,即通過(guò)試管中進(jìn)行的DNA復(fù)制反應(yīng),使極少量的基因組DNA或RNA樣品中特定基因片段在短短幾小時(shí)內(nèi)擴(kuò)增上百萬(wàn)倍。簡(jiǎn)單說(shuō),就是我們?cè)隗w外模仿體內(nèi)DNA復(fù)制的過(guò)程,混合DNA模板、合適的引物、足夠的4種dNTP、耐熱DNA聚合酶以及適宜的體系后,在一定溫度和時(shí)間條件下,進(jìn)行的DNA擴(kuò)增。PCR有很多種,其中RT-QPCR(實(shí)時(shí)熒光定量)原理:基于PCR反應(yīng)的技術(shù)提升與延伸,有染色法和熒光探針法。RT-PCR反應(yīng)體系的靈敏度提高具體方式有以下幾種:1、
化學(xué)實(shí)驗(yàn)室個(gè)人防護(hù)措施及安全注意事項(xiàng)2022/11/14
在實(shí)驗(yàn)室做實(shí)驗(yàn),一定要注意實(shí)驗(yàn)的安全,畢竟化學(xué)藥品大多數(shù)都是電郵一定毒性的,一旦出現(xiàn)問題,影響不容小覷,甚至可能會(huì)危及生命。化學(xué)實(shí)驗(yàn)室個(gè)人防護(hù)措施:1、眼睛及臉部的防護(hù)(1)、全防護(hù)眼鏡(眼睛及臉部是實(shí)驗(yàn)室中最易被事故所傷害的部位,因而對(duì)他們的保護(hù)尤為重要。實(shí)驗(yàn)室內(nèi),氖實(shí)驗(yàn)人員必須戴安全防護(hù)眼鏡(2)、當(dāng)化學(xué)物質(zhì)濺入眼睛后,應(yīng)立即用水徹di沖洗。沖洗時(shí),應(yīng)將眼皮撐開,小心地用自來(lái)水沖洗數(shù)分鐘,再用蒸餾水沖,然后去醫(yī)務(wù)室進(jìn)行治療。(3)、面部防護(hù)用具用于保護(hù)臉部和喉部。為了防止可能的爆炸及實(shí)驗(yàn)產(chǎn)生
細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)用技巧小結(jié)2022/11/07
細(xì)胞培養(yǎng)是指將細(xì)胞從動(dòng)物或植物體內(nèi)取出,然后在適宜的人工環(huán)境中生長(zhǎng)的過(guò)程。細(xì)胞可以在培養(yǎng)前直接從組織中取出并通過(guò)酶或機(jī)械方法進(jìn)行解離,也可以來(lái)源于已建立的細(xì)胞系或細(xì)胞株。一、細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)用技巧:1.買細(xì)胞要去靠譜的地方買,比如ATCC或者素冉生物。一般上面會(huì)有針對(duì)細(xì)胞的介紹,這樣培養(yǎng)之前可以了解細(xì)胞正常生長(zhǎng)的狀態(tài)圖、傳代、培養(yǎng)基的類型等。2.不管是買的細(xì)胞,還是別人惠贈(zèng)的細(xì)胞,剛拿到手趕緊的做兩件事:檢測(cè)是否有支原體污染;迅速擴(kuò)增凍存,凍存細(xì)胞復(fù)蘇后第二天*更換一次培養(yǎng)基。3.發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有污染迅速處
ELISA實(shí)驗(yàn)樣本的保存與處理2022/11/01
ELISA實(shí)驗(yàn)過(guò)程中除了選擇靈敏度高的ELISA試劑盒之外,處理樣本的方法也是不一樣的。ELISA實(shí)驗(yàn)中常見液體類樣本有血清、血漿、尿液、細(xì)胞上清、腦脊液等幾種。一、ELISA樣本的保存正常情況下,再5天內(nèi)測(cè)定的血清標(biāo)本可放置于4°C,標(biāo)本再冰箱中保存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致血清IgG聚合,是間接法的試劑本底加深,超過(guò)一周測(cè)定的需-20°C保存,凍結(jié)血清溶解后,蛋白質(zhì)局部濃縮,分不均,應(yīng)充分混勻并避免產(chǎn)生氣泡,渾濁或有沉淀的血清標(biāo)本應(yīng)先離心或過(guò)濾,澄清后再檢測(cè)。測(cè)抗體的血清的標(biāo)本如需保存作多次檢測(cè),以少量
驗(yàn)證生化試劑盒是否適合使用方法2022/10/24
通常生化試劑盒可分為液體單試劑和液體雙試劑,前者特別適用于半自動(dòng)生化分析儀和小型自動(dòng)生化分析儀,使用方便,缺點(diǎn)是穩(wěn)定性較差。與單試劑相比,雙試劑提高了抗干擾能力,具有穩(wěn)定性能較好,可消除樣品自身空白等特點(diǎn)。此外還有多項(xiàng)同測(cè)組合試劑、濃縮試劑等。對(duì)新的試劑盒,我們首先要查看其資質(zhì)是否齊全,是否為合法有效試劑,是否有相關(guān)的臨床試驗(yàn)驗(yàn)證等。其次,在本實(shí)驗(yàn)室,可做以下工作來(lái)進(jìn)行驗(yàn)證是否適合使用。一、試劑空白吸光度用蒸餾水做空白,用zhi定的空白液加入試劑作為樣品測(cè)試,在測(cè)試主波長(zhǎng)下,記錄測(cè)試啟動(dòng)時(shí)的吸光
?PCR反應(yīng)污染原因與對(duì)策2022/10/17
PCR反應(yīng)的最大特點(diǎn)是具有較大擴(kuò)增能力與很高的靈敏性,但令人頭痛的問題是易污染,極其微量的污染即可造成假陽(yáng)性的產(chǎn)生。一、污染原因1、標(biāo)本間交叉污染:標(biāo)本污染主要有收集標(biāo)本的容器被污染,或標(biāo)本放置時(shí),由于密封不嚴(yán)溢于容器外,或容器外粘有標(biāo)本而造成相互間交叉污染;標(biāo)本核酸模板在提取過(guò)程中,由于吸樣槍污染導(dǎo)致標(biāo)本間污染;有些微生物標(biāo)本尤其是病毒可隨氣溶膠或形成氣溶膠而擴(kuò)散,導(dǎo)致彼此間的污染。2、PCR試劑的污染:主要是由于在PCR試劑配制過(guò)程中,由于加樣槍、容器、雙蒸水及其它溶液被PCR核酸模板污染.
ELISA實(shí)驗(yàn)中洗板機(jī)洗板關(guān)鍵點(diǎn)2022/10/10
洗板機(jī)洗板人為因素少,速度快,條件恒定,但是使用洗板機(jī)洗板時(shí)應(yīng)注意以下三個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)。1、洗滌參數(shù)主要的參數(shù)是洗滌量。自動(dòng)洗板機(jī)會(huì)分配洗滌液。如果你之前遭遇過(guò)高背景,那么不要猶豫,將洗滌量調(diào)為高,最好是比包被體積更高。太少的洗滌液會(huì)讓一部分分析表面洗滌不到,從而明顯增加背景。所有反應(yīng)孔的洗滌量必須相同。江萊生物ELISA試劑盒的使用手冊(cè)中列出包被量。我們建議使用350µl洗滌液進(jìn)行洗滌,以便清潔整個(gè)反應(yīng)孔的壁。一般來(lái)說(shuō),洗滌量越高,則孵育步驟殘留的抗體或抗原量就越少。2、洗滌次數(shù)影響洗滌效果的主要參
關(guān)于抗體功能分類簡(jiǎn)介2022/10/05
抗體是哺乳動(dòng)物適應(yīng)性免疫系統(tǒng)對(duì)抗病原體的核心,它是在病原體刺激下由漿細(xì)胞(效應(yīng)B細(xì)胞)所分泌的一種免疫球蛋白,能夠識(shí)別并結(jié)合特異的病原體抗原,隨后通過(guò)介導(dǎo)中和作用、調(diào)理作用、效應(yīng)T細(xì)胞殺傷等來(lái)清除病原體。機(jī)體在抗原物質(zhì)刺激下,由B細(xì)胞分化成的漿細(xì)胞所產(chǎn)生的、可與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合反應(yīng)的免疫球蛋白。因?yàn)槌跤腥擞秒娪咀C明血清中抗體活性在γ球蛋白部分,故曾把抗體統(tǒng)稱為兩種(γ)球蛋白。后來(lái)證明,抗體并不都在γ區(qū);而且位于γ區(qū)的球蛋白,也不一定都具有抗體活性。1964年,世界衛(wèi)生組織舉行專門會(huì)議,將
細(xì)胞周期的測(cè)定原理與操作步驟2022/09/26
細(xì)胞周期的測(cè)定原理與操作步驟:一、原理1、細(xì)胞周期指細(xì)胞一個(gè)世代所經(jīng)歷的時(shí)間。從一次細(xì)胞分裂結(jié)束到下一次分裂結(jié)束為一個(gè)周期。細(xì)胞周期反應(yīng)了細(xì)胞增殖速度。2、單個(gè)細(xì)胞的周期測(cè)定可采用縮時(shí)攝影的方法,但它不能代表細(xì)胞群體的周期,故現(xiàn)多采用其他方法測(cè)群體周期。3、測(cè)定細(xì)胞周期的方法很多,有同位素標(biāo)記法、細(xì)胞計(jì)數(shù)法等,這里介紹一種利用BrdU滲入測(cè)定細(xì)胞周期的方法。4、BrdU(5-溴脫氧尿嘧啶核苷)加入培養(yǎng)基后,可做為細(xì)胞DNA復(fù)制的原料,經(jīng)過(guò)兩個(gè)細(xì)胞周期后,細(xì)胞中兩條單鏈均含BrdU的DNA將占l/
標(biāo)準(zhǔn)新生牛血清保存與注意事項(xiàng)2022/09/19
標(biāo)準(zhǔn)新生牛血清(輻照滅菌)保存:1.需要保存的血清,必須存儲(chǔ)于-20℃至-70℃低溫冰箱中。4℃冰箱保存請(qǐng)勿超過(guò)一個(gè)月時(shí)間。由于血清結(jié)冰時(shí)體積會(huì)增加約10%,因此在凍存之前,必須預(yù)留一定的體積空間,以免發(fā)生污染或玻璃瓶破裂;2.血清的熱滅活在56℃溫度中加熱30分鐘,加熱過(guò)程中必須搖晃均勻。熱滅活的目的是使血清中的補(bǔ)體成分滅活,除非必須,不建議做這樣的處理,因?yàn)檫@會(huì)導(dǎo)致血清沉淀物顯著增多,從而影響血清質(zhì)量。補(bǔ)體參與反應(yīng)有:細(xì)胞毒作用、平滑肌細(xì)胞收縮、肥大細(xì)胞和血小板釋放組胺、增強(qiáng)吞噬作用、促進(jìn)淋
上海撫生為大家介紹PCR反應(yīng)的引物2022/09/13
引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:1、引物長(zhǎng)度:5-30bp,常用為20bp左右。2、引物擴(kuò)增跨度:以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至0kb的片段。3、引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串
溶液配制步驟與注意事項(xiàng)2022/09/05
溶液、試劑的穩(wěn)定性和準(zhǔn)確度是保證理化分析質(zhì)量的前提,受到各實(shí)驗(yàn)室的高度重視。但母液、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)往往不能直接用于實(shí)驗(yàn)分析,需要配制成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液才能使用。配制后的試劑、溶液保存期因?qū)嶒?yàn)室環(huán)境、溶劑、器皿潔凈度、密封程度、使用頻次等條件而不一致,檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)或證書一般未作詳細(xì)規(guī)定,給理化實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)溶液的管理帶來(lái)不便。由于各實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)溶液存放條件相對(duì)固定,使用En值確定所使用標(biāo)準(zhǔn)溶液有效期,為大家定量確定溶液、試劑的有效期提供一種方法。溶液配制步驟:1.計(jì)算:計(jì)算配制所需固體溶質(zhì)的質(zhì)量或液體濃溶液的體
單克隆抗體基本概念2022/08/30
抗體(antibody)是一種通過(guò)效應(yīng)B細(xì)胞(漿細(xì)胞)分泌,用來(lái)鑒別和清除外源物質(zhì)如細(xì)菌、病毒等的一種“Y”形免疫球蛋白。通常,天然抗體具有2條較長(zhǎng)、相對(duì)分子量較大的重鏈(H鏈),以及2條較短、相對(duì)分子量較小的輕鏈(L鏈)。鏈間由二硫鍵和非共價(jià)鍵連接形成一個(gè)的單體分子。按照生物學(xué)特征,整個(gè)抗體可進(jìn)一步分為恒定區(qū)(C區(qū))和可變區(qū)(V區(qū))兩部分。由于自然界中存在各種各樣的病原體,而這些病原體的表面又存在諸多不同的蛋白質(zhì),抗體要識(shí)別它們,其“Y”形結(jié)構(gòu)的兩端部分(也就是其可變區(qū))也相應(yīng)是千變?nèi)f化的,從
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